title: Derek Shepherd

text: La noche antes de que comience el nuevo ingreso de internos de cirugía en el hospital, Derek conoce a Meredith Grey en el "Bar de Joe" y acaban acostándose juntos. A la mañana siguiente ambos descubren que él es el jefe de neurocirugía y ella una nueva interna. Inician una relación, pero Derek no explica nada de su pasado a nadie. Por ello, cuando semanas después Addison reaparece en Seattle, Meredith descubre que Derek está casado, y que en términos oficiales ella ha sido la amante de Shepherd, y que Addison va a ser la nueva jefa de Obstetricia. A pesar de sus sentimientos por Meredith, Derek decide hacer lo que considera correcto al tratar de recomponer su matrimonio con Addison, pero pronto ella descubre que Derek no puede olvidar a Meredith. Los esposos deciden hacer terapia matrimonial, pero no logran superar sus problemas. Addison descubre que sus esfuerzos son en vano, y termina por confesar a Derek que su relación con Sloan no fue sólo de una noche, sino que mantuvieron una relación sentimental anterior e incluso posterior a que éste los descubriera, y que ella cortó esa relación y fue a Seattle a buscar a Derek debido a que Sloan la engañó mientras convivían. Finalizada su historia Con Addison, Derek admite estar enamorado de Meredith y desea tener una relación estable con ella. Durante la quinta temporada Derek quiere formalizar la relación, pero tiene que lidiar con la negativa de Meredith debido a sus problemas emocionales. Ella acude a una especialista ya que cree que tiene tendencias suicidas y conflictos de abandono, los cuales finalmente logra superar. Planean su boda, pero el mismo día de la ceremonia la ceden a Alex Karev e Izzie Stevens que se encontraba en estado crítico debido al cáncer y muy ilusionada con casarse. Derek y Meredith hacen sus votos en privado en un post-it, casándose simbólicamente. Al ser destituido Richard Webber de la jefatura por sus problemas de adicción al alcohol, Derek es nombrado jefe del hospital.


title: Derek Shepherd

text: En la sexta temporada, una paciente que había sido atendida por Derek debió ser desconectada por su estado irreversible, pero su esposo no comprende la situación y se enfurece contra el hospital, contra Derek y Lexie Grey que fue quien realizó el procedimiento de muerte. El esposo enfurecido intenta hacer reclamos contra Derek que no proceden, por lo que capítulos después irrumpe en el hospital para intentar asesinar principalmente a Derek Shepherd y a Lexie. Tras recibir un disparo, Derek es operado por Cristina Yang y logra sobrevivir. Después del tiroteo, Shepherd renuncia a la jefatura del hospital y retoma su cargo anterior. En la octava temporada, junto a su mujer, y algunos compañeros, sufre un accidente de avión que le deja secuelas en su mano derecha. Tiempo después, adoptan a una pequeña africana llamada Zola y, más adelante, son padres de dos hijos biológicos: Bailey y Ellis (póstuma)


title: Derek Shepherd

text: En el ámbito laboral, Derek es un neurocirujano muy respetado entre sus colegas y sus servicios suponen dos millones de dólares en ingresos para el hospital. Ha llevado a cabo procedimientos complicados y peligrosos, incluyendo una intervención quirúrgica de paralización, dos bypasses de cerebro y una separación de siameses adultos. Pese a ser un cirujano competente y experimentado, no ha olvidado la importancia de la compasión y el buen trato a sus pacientes. Ha sido jefe de Cirugía durante un tiempo y ha asesorado al gobierno de los Estados Unidos en un estudio para mapear el cerebro humano. Es conocido por Meredith y sus amigos como ¨El doctor apuesto¨.


title: Derek Shepherd

text: Casi al final de la undécima temporada, sufre un accidente automovilístico, el cual lo lleva a tener muerte cerebral y Meredith firma para desconectarlo.


title: Tilikum

text: Tilikum fue una orca macho ("Orcinus orca") (c. 1981-SeaWorld, Orlando, Florida, 6 de enero de 2017) que vivió en cautiverio en el parque SeaWorld de Orlando, Estados Unidos. Se vio involucrado en ataques mortales hacia humanos, lo cuál sumado a otros incidentes lo convirtieron en el espécimen con el historial más extenso de ataques a seres humanos.


title: Tilikum

text: Falleció a los 36 años a consecuencia de la infección respiratoria que había minado su salud, según informó el parque SeaWorld. Se mantuvo cautiva durante 33 años, y fue nombrado por PETA, en su memoria y reconociendo el coraje y valor que tuvo durante su cautiverio, como el primer "animal del año" el mismo día de su muerte.


title: Tilikum

text: La orca estuvo involucrada en la muerte de tres personas y fue protagonista principal del documental "Blackfish". A raíz del último incidente a principios de 2010, el animal fue retirado del espectáculo durante un año aproximadamente, hasta el 30 de marzo de 2011 cuando volvió de nuevo a actuar.


title: Tilikum

text: En 2010, Tilikum medía 6,9 m de longitud y pesaba 5600 kg. Sus aletas pectorales tenían aproximadamente 2 m de longitud, su aleta caudal estaba curvada hacia abajo y gran aleta dorsal de 1,8 m estaba completamente colapsada hacia el lado izquierdo. Ha sido la orca más grande en cautiverio y la más fértil en ese estado, con trece hijos engendrados, de los cuales diez aún sobreviven. En la jerga chinook del noreste de América del Norte, su nombre significa «amigos, parientes, tribu, nación, pueblo»


title: Tilikum

text: Tilikum fue separado de su grupo familiar y capturado cerca de Islandia en noviembre de 1983, cuando contaba con cerca de dos años de edad (en libertad las orcas macho viven hasta los 80 años por lo que era muy joven). Se le privó de libertad junto a otros dos animales: un macho ("Nandú") y una hembra ("Samoa"), ambos fallecidos en cautividad.


title: Tilikum

text: Allí tuvo una difícil convivencia con dos hembras: "Haida II" y "Nootka IV". El parque solo contaba con los 3 animales y tenían serios problemas de espacio.


title: Tilikum

text: Las orcas eran recluidas en piscinas muy pequeñas (unos 6x9 metros) cuando se cerraba el parque (un total de 2/3 del día) provocándoles mucho estrés y frustración que se tradujo en agresiones y trauma psicológico. Tilikum era habitualmente agredido por sus compañeras y solía tener heridas.


title: Tilikum

text: Cabe señalar que el entrenamiento de Tilikum fue muy agresivo y funcionaba mediante castigo: era entrenado junto a otra hembra (que estaba más avanzada que él) y ambos eran castigados cuando Tilikum fallaba los números y no la imitaba. Esto provocó que su compañera se volviera contra él.


title: Tilikum

text: Tilikum, siendo el único macho y siendo las orcas en libertad muy matriarcales, era constantemente atacado por las dos hembras provocando que hubiera que separarlo. Se piensa que ese aislamiento le provocó graves secuelas psicológicas (puesto que las orcas nunca se separan de su familia y son muy sociales).


title: Tilikum

text: Durante su estancia engendró a su primera cría llamada "Kyoquot" (1991), el cual también se vio involucrado más tarde en el ataque a un entrenador (al que persiguió por la piscina lanzandose sobre él repetidas veces). De "Nootka IV" engendró una cría nacida muerta cuando contaba aproximadamente ocho o nueve años de edad, en diciembre de 1991.


title: Tilikum

text: El 20 de febrero de 1991 mató a Keltie Byrne, una nadadora que trabajaba a tiempo parcial de entrenadora. Esa fue la causa de que Sealand cerrara aunque el parque no contaba en absoluto con la capacidad para albergar a los animales.


title: Tilikum

text: La convivencia allí con el resto de hembras también fue muy difícil puesto que una vez más éstas le agredían y en cautiverio no había posibilidad de huir del conflicto. Alternaba por tanto momentos de agresiones con momentos de aislamiento (al ser el único macho) que dañaron gravemente su psique.


title: Tilikum

text: Desde su llegada a SeaWorld, engendró doce hijos con diferentes hembras, algunas de ellas que eran hijas suya.


title: Tilikum

text: Su primer hijo allí lo tuvo con una hembra llamada "Katina"; se llamó "Taku" y nació en septiembre de 1993.


title: Tilikum

text: Los siguientes hijos que salieron adelante fueron: "Nyar" (1993-1996), "Unna" (1996 tras nacer fallecida), "Sumar" (1998-2010), "Tuar" (1999), "Tekoa" (2000), "Nakai" (2001), "Kohana" (2002), "Ikaika" (2002), "Skyla" (2004), "Malia" (2007), "Sakari" (2010) y "Makaio" (2010).


title: Tilikum

text: En 1999, Tilikum inició el entrenamiento para la inseminación artificial y a principios de 2000 la hembra "Kasatka" (que residia en "SeaWorld de San Diego)" fue fecundada usando su esperma y parió a "Nakai" en septiembre de 2001. En 2002, otra hembra llamada "Takara" (hija de "Kasatka") de San Diego, también tuvo una cría, "Kohana", de Tilikum por inseminación artificial.


title: Tilikum

text: Fue en 1999 cuando se vio involucrado en la misteriosa muerte de Daniel Dukes, un joven de 29 años que, según la versión oficial, se había colado en el parque por la noche. Falleció de hipotermia en el tanque de las orcas y fue descubierto a la mañana siguiente después de que Tilikum se hubiese pasado la noche mordiendo y jugando el cadáver (incluso le había arrancado los genitales).


title: Tilikum

text: Más tarde asesino a su entrenadora Dawn Brancheaux durante un espectáculo y delante de un grupo de personas que miraban la exhibición. La agarró del brazo metiéndola en el agua, posteriormente se lo arrancó y se lo tragó.


title: Tilikum

text: Aparte de los ataques mortales protagonizados por Tilikum, presentaba otros síntomas de inestabilidad psíquica como apatía, permaneciendo cada día varias horas sin moverse en su tanque. Según varios biólogos marinos y licenciados en ciencias ambientales, esto es debido a los numerosos traumas que su captura y posterior experiencia en cautividad le han provocado, ya que ha convivido con hembras que le acosaban y atacaban, ha permanecido hasta 14 horas diarias en tanques pequeños y sin luz y ha realizado diariamente espectáculos a cambio de comida.


title: Tilikum

text: En 2005 nació su primer nieto, "Trua" (hijo de "Takara" y "Taku"), en 2007 nació su nieta "Nalani" (hija/hermana de Taku y hija/nieta de "Katina"), de "Kohana" nacieron sus nietos "Adán" (2010) y "Victoria" (2012-2013) y en 2017 "Kyoquot" se convertiría en padre con el nacimiento de la última orca en cautiverio, "Kyara", nacida de "Takara", pero falleció en ese mismo año.


title: Tilikum

text: Mientras estaba en Sealand, el 21 de febrero de 1991, Tilikum estuvo involucrado en un incidente que terminó en la muerte de una entrenadora, Keltie Byrne.


title: Tilikum

text: Esta fue cogida por Tilikum y arrastrada al estanque con las orcas. Tilikum le agarró de la pierna y la metió al agua y Haida II (entonces preñada) y Nootka IV, dieron vueltas alrededor del estanque mientras Tilikum ahogaba a Keltie Byrne hasta que falleció, ella pidió auxilio en la que una testigo del espectáculo, reconoció oírla gritar "¡No quiero morir! ¡Ayuda!". Sealand lo tapó como un accidente de la entrenadora, que resbaló, se cayó al estanque y ahí, ya entre las orcas, se cree que siendo Tilikum el instigador (se cree puesto que el público diferenciaba difícilmente a los 3 animales entre ellos), fue ahogada.


title: Tilikum

text: El 6 de julio de 1999, Daniel Dukes, un hombre de 29 años, fue encontrado desnudo sobre la espalda de Tilikum. Daniel Dukes había visitado SeaWorld el día anterior, volvió a entrar después de que el parque cerrara las puertas y evadió la seguridad para acceder al tanque de la orca. Un empleado descubrió el cuerpo que era acarreado sobre la espalda de la orca al día siguiente. Las primeras versiones dadas por SeaWorld aseguraban que el hombre no tenía marcas de mordeduras en su cuerpo, ni había signo alguno de sangre en el estanque, aunque encontrar restos de sangre hubiera sido imposible porque el tanque contenía millones de litros de agua y un cuerpo humano solo 7 de sangre. Luego se sabría que la ausencia de marcas de mordisco en el cuerpo no era cierta, ya que, entre otras cosas, el hombre había sido castrado por Tilikum. A pesar de ello, inicialmente la policía declaró que la muerte ocurrió por ahogamiento e hipotermia. Siguiendo esta línea de razonamiento que favorecía a la empresa, algunos expertos aseguraron que una vez muerto, la orca consideró el cuerpo como un juguete y comenzó a jugar con él.


title: Tilikum

text: En la película documental "Blackfish", este hecho se cuestiona, dado que el hombre apareció desnudo, Tilikum le había arrancado los genitales, y el cadáver presentaba numerosas contusiones y hemorragias subcutáneas. También se cuestiona que, dado que el parque (y sobre todo los tanques de las orcas) disponían de videovigilancia, y cada punto estaba siendo grabado las 24horas de día, los vídeos nunca aparecieran. No ha sido esclarecido cómo Daniel Dukes entró en el parque ni en la piscina de las orcas.


title: Tilikum

text: El 24 de febrero de 2010, Tilikum resultó envuelto en un tercer incidente cuando mató a Dawn Brancheau, una entrenadora de 40 años con 16 años de experiencia en SeaWorld. La entrenadora fue atacada después del espectáculo frente al menos dos docenas de turistas observando sobre el estanque y el área de observación submarina. Los empleados usaron redes y le lanzaron alimento intentando distraerlo.


title: Tilikum

text: Movilizándose entre los estanques dentro del complejo, eventualmente detuvieron a Tilikum liberando el cuerpo de la entrenadora, antes de darse cuenta de que el animal todavía la sostenía por un brazo, que Tilikum engulló. El supervisor de ese número aseguró que Tilikum lanzó a la entrenadora al agua sujetándola del pelo en cola de caballo, porque confundió el pelo con un pez o un juguete, según los argumentos de los dueños del parque. Sin embargo, durante el juicio, este mismo supervisor declaró que no estaba seguro de ello. Como se puede apreciar en la grabación del incidente, la hipótesis más plausible es que la arrastrara del brazo durante la última fase del espectáculo (destinado a unir lazos). La autopsia de Brancheau reveló que la muerte ocurrió por ahogamiento y traumas contundentes. También se halló que su médula espinal estaba seccionada y que tenía fracturas en su mandíbula, costillas y una vértebra cervical.


title: Tilikum

text: Un representante de Sea World afirmó que la empresa tenía intención de regresar a Tilikum al espectáculo, pero que la decisión final no se tomaría hasta que se completase la revisión de los procedimientos.


title: Tilikum

text: El 23 de agosto de 2010, el parque fue multado con 75 000 dólares por la Occupational Safety and Health Administration (OSHA) por la violación de tres reglas de seguridad, dos de ellas relacionadas con la muerte de Brancheau. SeaWorld emitió un comunicado en que tildo los resultados de la OSHA como «carentes de fundamento».


title: Tilikum

text: Tilikum retornó al espectáculo de SeaWorld el 30 de marzo de 2011. Desde entonces, los entrenadores no se acercaban más allá de un pequeño murito para trabajar con él y no se permitía su entrada con la orca en el agua. Se usaban mangueras de alta presión para dirigir al animal y se instalaron barandillas y redes de seguridad en la piscina.


title: Tilikum

text: El 7 de diciembre de 2010, se informó que Tommy Lee, miembro de la PETA y la banda Motley Crue envió una carta a Terry Prather, presidente de SeaWorld, haciendo referencia al anuncio de SeaWorld de limitar el contacto de los humanos con Tilikum. En la carta, Lee se refiere a Tilikum como el banco de esperma de SeaWorld y describe el proceso que el parque usaba para obtener esperma de la orcas cautivas, mediante su masturbación con una vagina de vaca llena de agua caliente, además de denunciar su reclusión en un tanque de reducidas dimensiones tras la muerte de su entrenadora. La carta solicita a SeaWorld la liberación de Tilikum de su estanque. El 8 de diciembre de 2010, SeaWorld respondió a la carta de Lee, señalando que los señalamientos de PETA son inadecuados y que los entrenadores de SeaWorld «no entran ni han entrado al agua para este propósito».


title: Tilikum

text: En julio de 2013 se estrena el documental "Blackfish" acerca de los eventos que rodearon la muerte de la entrenadora Dawn Brancheau y el sufrimiento al que se ven sometidas las orcas en cautividad. De acuerdo a su directora, Gabriela Cowperthwaite, su finalidad es concienciar sobre las condiciones adversas que soportan los animales en cautiverio. En un comunicado, el parque SeaWorld, que se negó a participar en él, criticó el documental pues lo considera un intento de explotación comercial de una tragedia que según su opinión, dejaba de lado la gestión de la seguridad, protección y cuidado de los animales por parte del parque. El documental muestra el testimonio de varios exentrenadores e investigadores de orcas. Los exempleados de Seaworld explican como nunca fueron informados de los ataques de Tilikum y de otras orcas ocurridos desde que estos animales se utilizan en espectáculos, y que sus conocimientos sobre la biología de estos animales eran en realidad muy limitados.


title: Tilikum

text: Por su parte, los investigadores entrevistados en el documental hacen hincapié en que la corta longevidad de las orcas cautivas, la deformidad de sus aletas y el comportamiento anormal de Tilikum y otras orcas se debe con toda probabilidad al sufrimiento extremo que les supone su cautiverio y el vivir en espacios muy reducidos donde se ven obligadas a convivir con ejemplares de distinta procedencia y realizar espectáculos circenses a cambio de comida. El documental tuvo un fuerte impacto a nivel mundial en la opinión pública y en el debate sobre la crueldad de mantener orcas en cautividad.


title: Tilikum

text: El 6 de enero de 2017, Tilikum falleció a los 36 años en las instalaciones de SeaWorld en Orlando (Florida) a consecuencia de una infección pulmonar.


title: CRISPR

text: CRISPR (en inglés: "Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats", en español: repeticiones palindrómicas cortas agrupadas y regularmente interespaciadas) es una familia de secuencias de ADN que se encuentran en el genoma de los organismos procariotas. Las secuencias contienen fragmentos de ADN de virus que han infectado a bacterias y arqueas en el pasado. Estos fragmentos de ADN son utilizados por la célula procariota para detectar y destruir el ADN de nuevos ataques de virus similares, y así poder defenderse eficazmente de ellos. Estas secuencias juegan un papel clave en los sistemas de defensa bacterianos y forman la base de una tecnología conocida como CRISPR/Cas, que es capaz de modificar los genes de cualquier organismo utilizando una familia de enzimas con actividad endonucleasa asociadas a CRISPR conocidas como Cas, tal como la Cas9 del sistema CRISPR/Cas9.


title: CRISPR

text: En términos más técnicos, los arreglos CRISPR son loci de ADN que contienen repeticiones cortas de secuencias de bases. Tras cada repetición siguen segmentos cortos de "ADN espaciador" proveniente de exposiciones previas a un virus. Se encuentran en aproximadamente el 40% de los genomas bacterianos y en el 90% de los genomas secuenciados de las arqueas. Con frecuencia se hallan asociados con los genes cas que codifican para proteínas nucleasas conocidas como Cas relacionadas con los CRISPR. El sistema CRISPR/Cas es un sistema inmunitario procariótico que confiere resistencia a agentes externos como plásmidos y bacteriófagos y provee una forma de inmunidad adquirida. Los espaciadores de los CRISPR reconocen secuencias específicas y guían a las nucleasas Cas para cortar y degradar esos elementos génicos exógenos de una manera análoga al ARNi en sistemas eucarióticos.


title: CRISPR

text: Desde 2013 el sistema CRISPR/Cas se ha utilizado para la edición de genes (agregando, interrumpiendo o cambiando las secuencias de genes específicos) y para la regulación génica en varias especies. Al administrar la proteína Cas9 y los ARN guía apropiados a una célula, el genoma de esta puede cortarse en los lugares deseados, cuyas secuencias serán complementarias a las de los ARN guía utilizados. Esto permite la eliminación funcional de genes o la introducción de mutaciones (tras la reparación del corte realizado por la maquinaria celular de reparación del ADN) para estudiar sus efectos. Modificaciones recientes del sistema CRISPR/Cas9 permiten también actuar sobre la transcripción de los genes, modificando así solo su nivel de funcionamiento, pero no la información genética. Los investigadores plantean que los CRISPRs quizás puedan usarse para construir sistemas de entrega de genes guiados por ARN que lleguen a alterar los genomas de poblaciones enteras.


title: CRISPR

text: Las bacterias pueden incorporar ADN externo en otras circunstancias e incluso pueden tomar ADN dañado de su medio.


title: CRISPR

text: Las secuencias repetidas que luego se conocerían como CRISPR fueron identificadas por primera vez por un grupo de científicos japoneses en 1987 (Yoshizumi Ishino et al).y luego más tarde de forma independiente por el científico Francisco J. M. Mojica (Universidad de Alicante) a principios de los años 90 en una arquea "Haloferax mediterranei" y los resultados fueron publicados en 1993, tras haber sido anteriormente descritas en bacterias ("Escherichia coli" y "Mycobacterium bovis"). Inicialmente fueron utilizadas para el tipado de bacterias, para diferenciar distintos aislados, cepas y especies. Estudios iniciales por Francisco J. M. Mojica y colaboradores postularon el posible papel de estas secuencias en la partición de replicones. En el año 2000, Francisco J. M. Mojica y colaboradores detectaron un gran número de estas secuencias repetidas en bacterias, arqueas y mitocondrias y propusieron el nombre de "Short Regularly Spaced Repeats" (SRSR, en castellano "Repeticiones Cortas Regularmente Espaciadas". Pocos años después, Francisco J. M. Mojica propuso y acuñó el acrónimo CRISPR (del inglés: "Clustered Regularly Interspaced Short Palyndromic Repeats"), propuesta que quedó recogida en una publicación de microbiólogos holandeses en 2002 y que sería utilizada universalmente desde entonces para referirse a estas secuencias. También, en la misma publicación, se describió por vez primera un conjunto de genes, algunos de los cuales codifican nucleasas o helicasas putativas, asociados a las secuencias repetidas CRISPR (los genes "cas" o "asociados a CRISPR:" del inglés: "CRISPR associated").


title: CRISPR

text: En 2005, tres grupos de investigación independientes mostraron que algunos de los espaciadores de los CRISPRs se derivan de diversas fuentes de ADN como ADN de fagos y ADN extracromosomal como los plásmidos. Nuevamente fue el grupo de Francisco J. Mojica quien primero se dio cuenta de que las secuencias CRISPR y los espaciadores asociados podían formar parte de algún sistema inmune propio de estos microorganismos procarióticos, quien primero estableció la relación entre CRISPR e inmunidad. Esas observaciones clave indican que el sistema CRISPR/cas puede tener un rol en la inmunidad adaptativa en las bacterias. Koonin y sus asociados propusieron que los espaciadores sirven como plantilla para moléculas de ARN, análogo a un sistema que usan los eucariontes llamado interferencia por ARN.


title: CRISPR

text: En 2007 Barrangou, Horvath (científicos de la industria alimenticia en Danisco) y el grupo de Moineau en la Université Laval (Canadá) mostraron que podían alterar la resistencia de "Streptococcus thermophilus" a ataques de fagos con ADN espaciador.


title: CRISPR

text: Jennifer Doudna y Emmanuelle Charpentier, ganadoras del Premio Nobel de Química 2020, junto con Francisco Juan Martínez Mojica, habían estado explorando de manera independiente a las proteínas asociadas a CRISPR para aprender cómo las bacterias utilizan a los espaciadores en sus sistemas inmunes. Juntas estudiaron un sistema CRISPR más simple que se basa en una proteína llamada Cas9. Encontraron que las bacterias responden ante un fago invasor al transcribir espaciadores y ADN palindrómico en una larga molécula de ARN y que entonces la célula utilizaba un ARN llamado "Trans-activating crRNA" (tracrRNA) y también Cas9 para cortarla en pedazos llamados ARNcr.


title: CRISPR

text: Cas9 es una nucleasa, una enzima especializada en cortar ADN, con dos sitios de corte activos (HNH y RuvC), uno para cada hebra de la doble hélice. El equipo demostró que podrían desactivar uno o ambos sitios preservando la habilidad de Cas9 de ser específico para su ADN objetivo. Jinek combinó al tracrRNA y ARN espaciador para formar una molécula llamada "single-guide RNA" que, al combinarse con Cas9, podía encontrar y cortar los blancos correctos de ADN. Jinek propuso que estos ARN guía sintéticos podrían usarse para la edición de genes.


title: CRISPR

text: La primera vez que se mostró que CRISPR funcionaba como una herramienta de ingeniería genética en cultivos de células humanas fue en 2012. Desde entonces se ha utilizado en muchos organismos, incluida la levadura del pan ("Saccharomyces cerevisiae"), el pez cebra ("Danio rerio"), la mosca de la fruta ("Drosophila melanogaster"), nematodos ("Caenorhabditis elegans") plantas y ratones, entre otros.


title: CRISPR

text: Adicionalmente, CRISPR ha sido modificada para hacer factores de transcripción programables que permiten a los científicos silenciar o activar ciertos genes.


title: CRISPR

text: La primera evidencia de que CRISPR puede revertir síntomas de enfermedad en organismos vivos fue demostrada en marzo de 2014, cuando investigadores del MIT curaron a ratones de desórdenes genéticos del hígado.


title: CRISPR

text: En 2015, la nucleasa Cpf1 se descubrió en el sistema CRISPR/Cpf1 de la bacteria "Francisella novicida". Cpf1 mostró varias diferencias claves de Cas9 incluyendo: causando un corte 'escalonado' en el ADN de doble hebra, en oposición al corte 'brusco' producido por Cas9, basándose en un PAM rico en T (proporcionando sitios de orientación alternativos a Cas9) y requiriendo solamente Un CRISPR ARN (CRRNA) para el éxito de la orientación. Por el contrario Cas9 requiere tanto crARN y un crARN trans activado (tracrRNA)).


title: CRISPR

text: Actualmente esta nucleasa recibe el nombre de Cas12a, y presenta algunas variantes en función del organismo de origen, entre las que se encuentran AsCas12a (presente en la bacteria "Acidaminococcus"), y LbCas12a (presente en "Lachnospiraceae bacterium"). Además, en esta última variante se descubrió una mutación puntual, D156R, que representa la sustitución del aminoácido ácido aspártico por arginina en la posición 156 de la proteína. Cas12a muestra un aumento en la eficiencia de corte en el modelo vegetal "Arabidopsis thaliana", similar al que después se corroboró en "D. melanogaster", generando una eficiencia en la tasa de edición génica próxima a la observada en Cas9.


title: CRISPR

text: Se trata de una nucleasa hipercompacta descrita en 2020 que representa la mitad del peso molecular de Cas9/Cas12 y con características similares en su utilización como herramienta para la edición génica. Además, se ha adaptado de forma exitosa a la edición "in vivo" en "Drosophila melanogaster" de forma precisa sin generar cortes en el ADN de doble cadena.


title: CRISPR

text: Al inicio de la década de los 2000, investigadores desarrollaron las nucleasas con dedos de zinc, proteínas sintéticas cuyas regiones de unión a ADN les permitían cortar el ADN en puntos específicos. Después, las nucleasas sintéticas llamadas TALENs dieron una vía más sencilla para llegar a ADN específico y se predijo que sobrepasarían a las de los dedos de zinc. Ambas dependen de la elaboración de proteínas específicas para cada ADN objetivo, un procedimiento bastante más complicado que los ARN guía. Los CRISPRs son más eficientes y pueden llegar a más genes que ambas técnicas.


title: CRISPR

text: El 12 de julio de 2017 la revista británica "Nature" comunicó un trabajo recibido el 22 de agosto de 2016, comunicando que investigadores de la Universidad de Harvard modificaron en el genoma de un grupo de bacterias, por medio de corta-pega o copipasteo genético logrado con la técnica CRISPR, la información digital de una fotografía y un GIF o animación corta. Después secuenciaron el ADN de los microorganismos para recuperar la imagen y el video con una precisión del 90%. El avance atrajo nuevo interés científico en el campo de la ‘grabación molecular’ y en particular conjeturas, al parecer prematuras e inexactas, sobre la memorización en sistemas accedidos desde un psiquismo.


title: CRISPR

text: Los loci de CRISPR van de 24 a 48 pares de bases. Las repeticiones están separadas por espaciadores de longitud similar. Algunas secuencias espaciadoras de CRISPR son complementarias a las de los plásmidos y fagos, aunque algunos espaciadores se complementan con el genoma procarionte (espaciadores autoreplicativos). Pueden añadirse rápidamente espaciadores nuevos como respuesta a una infección por un fago.


title: CRISPR

text: Los genes asociados a CRISPR, llamados "cas", son genes frecuentemente relacionados con los arreglos de repeticiones CRISPR. Análisis extensivos de genómica comparativa han identificado a muchos genes cas diferentes; un análisis inicial de 40 genomas de bacterias y arqueas sugirió que podría haber 45 familias de genes cas, con solo dos genes, cas1 y cas2, siendo omnipresentes. El sistema actual de clasificación de CRISPR agrupa a los operones en cas en tres grupos mayores, cada uno con múltiples subdivisiones basadas en filogenia de cas1 y en el complemento del operón del gen cas. Aparte de cas1 y cas2, las tres divisiones mayores tienen conjuntos muy diferentes de genes constitutivos, con cada una de las divisiones conteniendo un ‘gen característico’ encontrado exclusivamente en esa subdivisión. Muchos organismos contienen múltiples sistemas CRISPR-Cas sugiriendo que son compatibles e incluso podrían compartir elementos. La distribución esporádica de los subtipos de CRISPR/Cas sugiere que el sistema está sujeto a la transferencia genética horizontal durante la evolución microbiana.


title: CRISPR

text: Capturar al ADN invasor e integrarlo en un locus CRISPR en forma de un espaciador es la primera etapa en la respuesta inmune. La prevalencia de cas1 y cas2 fue la primera pista de que estaban involucrados en la adquisición de los espaciadores ya que todos los CRISPRs comparten la estructura repetitiva regular. Estudios de mutaciones confirmaron esta hipótesis ya que al remover cas1 o cas2 impedía la adquisición de espaciadores, sin afectar la respuesta inmune CRISPR en sí. La función exacta de Cas1 y Cas2 se desconoce, sin embargo un número de proteínas Cas1 se han caracterizado bioquímicamente y se han resuelto sus estructuras. Las proteínas Cas1 tienen secuencias de aminoácidos muy diversas, sin embargo sus estructuras cristalinas son sorprendentemente similares y todas las cas1 purificadas son nucleasas dependientes de metales que se unen a ADN en modo independiente de secuencia. Las proteínas Cas2 representativas también han sido caracterizadas y poseen actividad específica de endorribonucleasa ya sea para ARN de cadena sencilla o ADN de cadena doble Los datos funcionales y estudios de mutación genética sugieren que Cas1 y Cas2 cortan fragmentos de ADN invasor y los insertan en arreglos CRISPR.


title: CRISPR

text: El análisis bioinformático de regiones de genomas de fagos que fueron cortados como espaciadores (denominados protoespaciadores) reveló que estos no estaban distribuidos aleatoriamente sino más bien se encontraban adyacentes a secuencias cortas de ADN (de 3 a 5 pb) llamadas PAMs (protospacer adjacent motifs en inglés). El análisis de los sistemas CRISPR-Cas de las tres divisiones mayores han mostrado que los PAMs son importantes para los sistemas tipo I y II, pero no para el III durante el proceso de adquisición de espaciadores. En sistemas tipo I y II, los protoespaciadores se cortan en posiciones adyacentes a una secuencia PAM, con el otro extremo del espaciador siendo cortado con un mecanismo tipo regla inherente a la proteína Cas1, manteniendo así la regularidad en tamaño de los espaciadores a lo largo del arreglo de CRISPR. La conservación de la secuencia PAM difiere entre los sistemas CRISPR-Cas y parece estar ligada evolutivamente a cas1 y a la secuencia líder.


title: CRISPR

text: Los nuevos espaciadores se añaden a un arreglo de CRISPR en un modo direccional, ocurriendo preferencialmente pero no exclusivamente, en forma adyacente a la secuencia líder. El análisis del sistema tipo I-E de E. coli ha demostrado que la primera repetición directa, adyacente a la secuencia líder, es copiado, con el espaciador recientemente adquirido siendo insertado entre la primera y segunda repeticiones directas. La secuencia PAM también parece ser importante durante la inserción de espaciadores de sistemas tipo I-E. La secuencia PAM del sistema I-E contiene un nucleótido final fuertemente conservado (adyacente al primer nucleótido del protoespaciador) y se ha mostrado que este nucleótido se convierte en la base final en la primera repetición directa. Esto sugiere que la maquinaria de adquisición de espaciadores genera overhangs de cadena sencilla en la penúltima posición de la repetición directay en el PAM durante la inserción del espaciador. Sin embargo no todos los sistemas CRISPR-Cas parecen tener este mecanismo ya que los PAMs caracterizados en otros organismos no muestran el mismo nivel de conservación en la posición final. Es probable que en esos sistemas, un extremo romo es generado al final de la repetición directa y el protoespaciador durante la adquisición. Análisis reciente de CRISPRs de "Sulfolobus solfataricus" han revelado más complejidades al modelo canónico de la inserción de espaciadores ya que uno de sus seis locus insertó espaciadores de manera aleatoria a lo largo de su arreglo CRISPR, opuesto a una inserción más cercana a la secuencia líder.


title: CRISPR

text: Ha sido notado en una cantidad de CRISPRs que estos contienen muchos espaciadores para el mismo fago. El mecanismo que causa este fenómeno ha sido dilucidado recientemente en el sistema tipo I-E de E. coli. Una mejora significativa en la adquisición de espaciadores ha sido detectada donde ya hay espaciadores con el fago como objetivo inclusive con "desajustes" al protoespaciador. Este ‘cebado’ requiere que tanto las proteínas Cas involucradas en adquisición como en interferencia interactúen entre sí. Los espaciadores nuevamente adquiridos que resultan del mecanismo de cebado siempre se encuentran en la misma cadena que la del espaciador original que produjo el cebado. Esta observación ha llevado a la hipótesis de que la maquinaria de adquisición recorre el ADN extraño después del cebado para encontrar un nuevo protoespaciador.


title: CRISPR

text: La respuesta inmune por CRISPR ocurre en dos etapas: la biogénesis de CRISPR-ARN (ARNcr) y la interferencia guiada por ARNcr. Un arreglo de CRISPR es transcrito de un promotor en el líder en un solo transcrito largo. Este transcrito es procesado por cortes dentro de las secuencias repetidas para formar ARNcr. Los mecanismos para producir ARNcr maduros varían de gran manera entre los tres sistemas principales de CRISPR-Cas. Tanto en sistemas del tipo I-E como I-F las proteínas Cas6e y Cas6f respectivamente, reconocen giros creados por la naturaleza palindrómica de las repeticiones directas. Esas proteínas cortan el transcrito primario en la unión entre los ARN de cadena sencilla y doble, dejando un extremo 5ʹ de 8 nucleótidos originado de la repetición en los ARNcr maduros y con una secuencia espaciadora. Los sistemas tipo III también usan Cas6, sin embargo, sus repeticiones no producen giros<nowiki>stem-loops</nowiki>, sino que la escisión ocurre por el "enroscamiento" del transcrito primario a lo largo de la Cas6 para permitir la división justo antes de la secuencia de repetición. Los sistemas tipo II no poseen el gen Cas6 así que utilizan a la ARNsaIII para hacer los cortes. Los sistemas funcionales tipo II codifican un pequeño ARN adicional que es complementario a la secuencia de las repeticiones conocido como ARN trans-activador(tracrRNA). La transcripción del tracrRNA y del transcrito primario CRISPR resulta en emparejamiento de bases y la formación de ARN de doble cadena en la secuencia de repeticiones, la cual es subsecuentemente cortada por la ARNasaIII para producir ARNcr. A diferencia de los otros dos sistemas el ARNcr no contiene el espaciador completo, está truncado en un extremo por diez nucleótidos.


title: CRISPR

text: Los ARNcr se asocian con las proteínas Cas para formar complejos de ribonucleótidos que reconocen ácidos nucleicos extraños. Experimentos con fagos y plásmidos han indicado que los ARNcr no tienen preferencia por cadenas codificantes o no codificantes, lo cual indica un sistema específico para ADN guiado por ARN. El complejo tipo I-E (llamado Cascade de forma común) requiere cinco proteínas Cas arregladas en una configuración que recuerda a un caballo de mar, unidas al ARNcr de cadena sencilla que está unido a lo largo del "lomo". Durante el estado de interferencia en los sistemas tipo I la secuencia PAM es reconocida en la cadena complementaria al ARNcr y se requiere junto con el apareamiento de ARNcr. En los sistemas tipo I, el correcto emparejamiento entre el ARNcr y los protoespaciadores señaliza un cambio conformacional en Cascade que recluta a Cas3 para la degradación del ADN.


title: CRISPR

text: Los sistemas de tipo II utilizan una proteína multifuncional, Cas9, para el paso de interferencia. La Cas9 requiere tanto al ARNcr como al tracrRNA para funcionar y corta al ADN usando sus dominios duales de endonucleasa: HNH y RuvC. El apareamiento de bases entre el PAM y el genoma del fago también se requiere en los sistemas tipo II, sin embargo el PAM es reconocido en la misma cadena que el ARNcr (la cadena opuesta a los sistemas tipo I).


title: CRISPR

text: Los sistemas tipo III, como los de tipo I, requieren un complejo multiproteico para asociarse con el ARNcr. Análisis bioquímicos y estructurales de S. solfataricus y Pyrococcus furiosus han dilucidado que seis o siete proteínas cas se unen a los ARNcr, respectivamente. Sorpredentemente, los sistemas tipo III analizados en S. solfataricus y P. furiosus son específicos para el ARNm de fagos y plásmidos, lo cual puede hacer a esos sistemas capaces de ser específicos para genomas de fagos basados en ARN.


title: CRISPR

text: El mecanismo para distinguir ADN propio del externo durante la interferencia está dentro de los ARNcr y por lo tanto se infiere que es conservado en los 3 sistemas. Aun a través del proceso de maduración distintiva de cada uno de los tipos, todos los ARNcr contienen una secuencia espaciadora y una porción de la repetición en uno o ambos extremos. Es la secuencia parcial de repeticiones la que previene que el sistema CRISPR-Cas ataque al cromosoma ya que el apareamiento de bases más allá de la secuencia del espaciador es una señal de que pertenece a sí mismo y previene el corte de ADN en el cromosoma. Las enzimas de CRISPR guiadas por ARN se clasifican como enzimas de restricción tipo V.


title: CRISPR

text: En 2017 se demostró en un estudio que este tipo de ingeniería genética puede generar centenares de mutaciones aleatorias no esperadas.


title: CRISPR

text: Dos días después de esta publicación, la reconocida revista Science publica un artículo que pone en entredicho la veracidad de este estudio crítico. Diferentes estudios anteriores muestran un alto nivel de especificidad de CRISPR.


title: CRISPR

text: Para la comprobación de estas mutaciones aleatorias o fuera de la región diana (""off targets"" en inglés) de las guías diseñadas han surgido herramientas de estudio de estas regiones de una forma automatizada como la herramienta VIVO. VIVO es un “sistema de detección in vivo de "off-targets"”. Esta herramienta es un método eficiente para la detección de las zonas de edición fuera de la región diana a la cual orientamos las guías RNA del sistema de edición genómica CRISPR /Cas. Actualmente es el único método que cuenta con una observación inicialmente in vitro de los posibles "off-targets" de las guías con una posterior comprobación in vivo de la acción real de las guías RNA. El sistema VIVO nos permite detectar y cuantificar las regiones fuera de la diana o ""target"" de las nucleasas, de esta forma se busca definir que generando una guía RNA bien diseñada esta carece de "off-targets" o mutaciones aleatorias.


title: CRISPR

text: a) CIRCLEseq : es un método in vitro para la determinación de los posibles "off-targets" que puede generar una RNA guía en unas células determinadas. Esta etapa se basa en la localización de regiones del DNA donde pueda producir un corte la Cas9 debido a que estas regiones son complementarias a los RNA guías diseñados. Esas regiones del DNA se cortan y se anillan, dando lugar a fragmentos circulares de DNA con regiones para el corte mediado por Cas9 y otras sin región reconocida por la Cas9 que se van a degradar mediante un tratamiento con exonucleasas. Los fragmentos circulares deseados se someten a una linealización mediante el uso de la Cas9 .Los fragmentos lineales adquieren un ligando adaptador, se someten a PCR y posteriormente se analizan mediante técnicas de secuenciación. Cada una de las secuencias obtenidas corresponderá a un posible "off-target" de la Cas9 mediante el uso de las guías diseñadas.


title: CRISPR

text: b) Comprobación in vivo: a partir de los datos obtenidos mediante CIRLCE seq se comprueba que realmente se produce un corte en esas regiones del DNA mediante la Cas9 in vivo .Para ello se utiliza un tejido al que se aplica las Cas9 y se observa si las regiones predichas por CIRCLE seq realmente se cortan por las nucleasas.


title: CRISPR

text: Estudios en "Streptococcus thermophilus" fueron los primeros indicativos de cómo los CRISPRs mueven a la evolución de fagos y bacterias. Un espaciador CRISPR debe corresponder perfectamente a la secuencia del gen objetivo del fago. Los fagos pueden seguir infectando a sus hospederos cuando hay mutaciones puntuales en el espaciador. Se siguen requerimientos similares en el PAM o la cepa seguirá siendo sensible a fagos. El modelo básico de evolución CRISPR se explica como el modelo donde los espaciadores recientemente incorporados llevan a los fagos a mutar sus genomas creando diversidad en las poblaciones tanto de fagos y bacterias.


title: CRISPR

text: La evolución CRISPR ha sido estudiada usando la genómica comparativa de muchas cepas de "S. thermophilus", "Escherichia coli" y "Salmonella enterica". Un estudio de 124 cepas de "S. thermophilus" mostró que 26% de todos los espaciadores eran únicos y que los diferentes locus de CRISPR mostraban diferentes tasas de adquisición de espaciadores. Los resultados mostraron que un locus de CRISPR particular puede evolucionar más rápidamente que otros, lo cual ayuda a establecer relaciones filogenéticas entre cepas. Un análisis similar de cepas de "E. coli" y "S. enterica" reveló que evolucionaron mucho más lentamente que "S. thermophilus". Las cepas de esta última que habían divergido hace más de 250,000 años todavía contenían el mismo complemento de espaciador.


title: CRISPR

text: La diversidad de CRISPR se estudió en múltiples comunidades ambientales usando metagenómica. El análisis de los biofilms de los drenajes ácidos de dos minas mostró que uno de los CRISPRs analizados contenía deleciones y espaciadores extensivos en comparación con el otro biofilm, lo cual sugiere una mayor actividad de fagos en una comunidad que en otra. En la cavidad oral, un estudio temporal determinó que aproximadamente del 7 al 22% de los espaciadores eran compartidos en períodos en el tiempo a lo largo de 17 meses en un mismo individuo y menos del 2% de los espaciadores fueron compartidos entre diferentes individuos en cualquier período en el tiempo. Del mismo ambiente, se aisló una cepa particular usando primers de PCR específicos para su CRISPR. A diferencia de los resultados generales de la presencia/ausencia de los espaciadores, los cuales mostraban diversidad significativa, este CRISPR añadió 3 espaciadores a lo largo de 17 meses, lo que sugiere que incluso en un ambiente con diversidad importante de CRISPR algunos locus evolucionan lentamente. Los CRISPRs también han sido analizados desde los metagenomas producidos por el proyecto del microbioma humano. Aunque la mayoría de los CRISPRs eran específicos en un sitio, algunos CRISPRs dentro del sitio eran ampliamente encontrados entre individuos. Uno de esos locus de CRISPR se originó con estudios de especies de Streptococcus y contuvieron ~15,000 espaciadores, 50% de los cuales eran únicos. De modo similar a los estudios dirigidos de la cavidad oral, algunos de los CRISPRs mostraron poca evolución entre períodos en el tiempo.


title: CRISPR

text: La evolución CRISPR ha sido estudiada en quimiostatos usando S. thermophilus para examinar de manera explícita la tasa de adquisición de espaciadores. En el período de una semana, cepas de "S. thermophilus" adquirieron hasta tres espaciadores cuando eran expuestos ante solo un fago. En el mismo periodo de tiempo, el fago desarrolló varios SNPs que se quedaron fijos es la población, lo que sugiere que CRISPR había prevenido la replicación de todos los otros tipos de fagos sin estas mutaciones. Otros experimentos, también con "S. thermophilus", mostraron que los fagos pueden infectar y replicarse en hospederos que tienen solo un espaciador y que los hospederos sensibles existen en ambientes con altas concentraciones de fagos. Los estudios por quimiostatos y observaciones en los CRISPRs sugieren muchas consecuencias al resultado de la evolución de CRISPR y fagos.


title: CRISPR

text: Los CRISPRs están altamente distribuidos entre bacterias y arqueas y muestran similitudes en las secuencias, sin embargo su característica principal son sus espaciadores repetidos y repeticiones directas. Esta característica hace a los CRISPRs fáciles de identificar en largas secuencias de ADN, ya que el número de copias repetidas disminuye la posibilidad de una unión tipo falso positivo. En la actualidad hay tres programas utilizados para la identificación de repeticiones CRISPR que buscan repeticiones interespaciadas en secuencias grandes: CRT, PILER-CR y CRISPRfinder.


title: CRISPR

text: El análisis de los CRISPRs en los datos de metagenómica es mucho más demandante, ya que los locus de CRISPR no suelen ensamblarse debido a su naturaleza repetitiva ni por variación de cepas, lo cual confunde a los algoritmos. Mientras que hay muchos genomas de referencias disponibles, la PCR se puede utilizar para amplificar arreglos de CRISPR y así analizar el contenido de los espaciadores. Sin embargo, este enfoque solamente dará información de CRISPRs específicamente buscados y en organismos con suficiente representación en bases de datos públicas para poder hacer el diseño de primers de PCR confiables.


title: CRISPR

text: El enfoque alterativo es extraer y reconstruir los arreglos de "CRISPR arrays" basándose en datos "shotgun" metagenómicos. La identificación de los arreglos de CRISPR de lecturas metagenómias es una tarea computacionalmente más difícil, particularmente con las tecnologías de secuenciación de segunda generación (como son 454, Illumina), ya que las longitudes cortas previenen que más de dos o tres unidades repetidas se presenten en una sola lectura. La identificación de CRISPR en lecturas crudas se logra usando puramente identificación denovo o al usar secuencias repetidas directas en arreglos CRISPR parcialmente ordenados como herramienta para identificar repeticiones directos en lecturas individuales.


title: CRISPR

text: Un estudio bioinformático mostró que los CRISPRs son evolutivamente conservados y que se pueden aglomerar en tipos relacionados. Muchos muestran la posibilidad de una estructura secundaria conservada.


title: CRISPR

text: A través del mecanismo CRISPR/Cas, las bacterias pueden adquirir inmunidad a ciertos fagos y por ende detener la consecuente transmisión de estos fagos. Por esta razón los CRISPR/Cas se describen como un mecanismo de herencia Lamarckiano. Otros han investigado la coevolución de los genomas vitales y hospederos.


title: CRISPR

text: Las proteínas Cas9 están altamente enriquecidas en bacterias patogénicas y comensales. La regulación mediada por CRISPR/Cas puede contribuir a la regulación de los genes endógenos bacterianos, particularmente en la interacción bacteriana con hospederos eucariontes. Por ejemplo, la proteína Cas9 de "Francisella novicida" usa un pequeño y único ARN asociado a CRISPR/Cas para reprimir un transcrito endógeno que codifica para una lipoproteína bacteriana que es crítica para "F. novicida" para reducir la respuesta del hospedero y promover la virulencia.


title: CRISPR

text: La prueba que demostró el principio de la redirección específica del sistema CRISPR/Cas llegó en 2012 y fue un primer paso para la materialización de propuestas para la biotecnología derivada de CRISPR:


title: CRISPR

text: Editas Medicine, una "start up" de 43 millones de dólares, busca desarrollar tratamientos que usen CRISPR/Cas para hacer ediciones desde pares de bases específicas hasta segmentos más grandes de ADN. Algunas enfermedades heredadas como la fibrosis quística y la anemia son causadas por mutaciones de un solo par de bases; la tecnología CRISPR/Cas tiene el potencial de corregir esos errores. El gen "corregido" permanece en su lugar habitual en su cromosoma, quien contiene la forma en que la célula normalmente activa o inhibe su expresión.


title: CRISPR

text: Después de cultivar precursores de células sanguíneas llamados hemocitoblastos de la médula ósea de un paciente, la cirugía genética con CRISPR podría corregir el gen defectuoso. Entonces las células con el genoma corregido serían reintroducidas a la médula del paciente, que ahora producirá células sanas. Reemplazar el 70% de las células defectuosas significaría tener una cura. Antes de que pueda usarse clínicamente, la compañía debe poder garantizar que solo la región objetivo será afectada y debe determinar cómo entregar la terapia a las células del paciente. En 2014, investigadores de la UCSF usaron a los CRISPR para crear versiones sanas de células madre de pacientes con beta-talasemia. En 2020 la empresa CRISPR Therapeutics anunció que a junio de 2020, 5 pacientes con beta-talasemia, y dos pacientes con anemia falciforme, habían sido tratados exitosamente con CTX001. CTX001 es una terapia en desarrollo que las empresas Vertex Pharmaceuticals y CRISPR Therapeutics tienen en desarrollo. En la noticia se indicó que dos pacientes de beta-talasemia a los 5 y 15 meses después de la edición del gen que reprime la expresión del gen de la hemoglobina fetal (HbF) eran independientes de transfusiones; y que un paciente que presenta la enfermedad de células falciformes, o anemia falciforme, a los 9 meses de la edición CTX001 se presenta libre de las crisis vasooclusivas de la enfermedad.


title: CRISPR

text: Otras patologías que se podrían tratar con CRISPR incluyen la enfermedad de Huntington, los efectos de la vejez, esquizofrenia y autismo e inclusive la modificación de ADN en embriones vivos.


title: CRISPR

text: Mejorar el sistema de dirección es fundamental antes de que CRISPR pueda ser utilizado en aplicaciones médicas. Los ARN guía existentes podrían trabajar sobre secuencias que difieren en algunas pares de bases de la secuencia objetivo.


title: CRISPR

text: En 2017 dos mellizas chinas fueron modificadas genéticamente mediante CRISPR, modificando el gen CCR5, para conseguir que fueran resistentes contra el VIH, virus causante del SIDA que fectaba a su padre.


title: CRISPR

text: CRISPR simplifica la creación de modelos de ratones y reduce el tiempo requerido de meses a tan solo semanas. El "knockdown" de genes endógenos ha sido logrado por transfección con un plásmido que contiene un área CRISPR con un espaciador, que inhibe un gen objetivo. La inyección de cigotos de ratón con Cas9 y dos ARN guía pudo lograr desactivar dos genes con el 80% de eficacia. La llamada reparación dirigida por homología involucra el uso de Cas9 para "cortar" al ADN, y así introducir nuevas partes génicas al cigoto.


title: CRISPR

text: En 2014, el investigador chino Gao Caixia aplicó para patentes para la creación de una cepa de trigo que es resistente al oídio. A la cepa le faltan genes que producen proteínas que reprimen las defensas en contra del oídio. Los investigadores borraron todas las copias de los genes del genoma hexaploide del trigo. La cepa promete reducir o eliminar el gran uso de fungicidas para controlar la enfermedad. Gao usó los sistemas de edición génica "transcription activator-like effector nuclease" (TALENs) y CRISPR para agregar o cambiar ningún otro gen. Aún no ha habido pruebas de campo.


title: CRISPR

text: En las células diploides eucariotas los análisis de perdida de función se han realizado primariamente por siRNA. En cambio, en los últimos años la tecnología CRISPR asociada a la proteína Cas9 ha adquirido una gran importancia. El sistema CRISPR es eficiente identificando genes en la resistencia de fármacos, tumorogénesis, respuesta inmune, interacciones con patógenos e inmunoterapia para el cáncer. Un ejemplo de esto es el estudio realizado en "Bombyx mori" que identificó los genes relacionados con su viabilidad celular, crecimiento, interacciones huésped-patógeno y resistencia a la temperatura, caracterizando más de 6000 genes diferentes.


title: CRISPR

text: Marcadores moleculares como el estado epigenético, la accesibilidad a la cromatina, la vinculación de factores de transcripción y la conservación evolutiva, se correlacionan con elementos funcionales putativos en el genoma no codificante y pueden predecir su función reguladora. Sin embargo, estas predicciones superan en gran medida las regiones que carecen de características, y es difícil determinar qué características desempeñan un papel correlativo o verdaderamente causal en la función o en el fenotipo.


title: CRISPR

text: Los esfuerzos para determinar la causalidad se han basado en la utilización de fragmentos de ADN preseleccionados , basándose en su expresión como sustituto de la función, pero estos métodos carecen del contexto de la cromatina local y de las interacciones reguladoras más amplias. Por lo tanto, existe la necesidad de enfoques sistemáticos para cribar variantes no codificantes y determinar si y cómo afectan a los fenotipos en un contexto biológico nativo. Para ello, se diseñó un método de alto rendimiento que utilizaba una biblioteca de ARN guía en CRISPR-Cas9 para la detección genómica de locus no codificantes con el fin de identificar las regiones funcionales relacionadas con el fenotipo y la regulación de genes. En combinación con otros ensayos de todo el genoma, se demuestra el alto rendimiento de la técnica en la identificación de las regiones donde los cambios en el contexto de la cromatina y factores de transcripción que se unen a estas regiones están causalmente vinculados a la pérdida de expresión génica y un fenotipo relevante de la enfermedad.


title: CRISPR

text: Un ejemplo aplicado de esta técnica es la detección de localizaciones genómicas no codificantes que modulan la resistencia a los fármacos:


title: CRISPR

text: El Vemurafenib inhibe las proteínas B-Raf portadoras de la mutación (cambio de valina por glutamato en la posición 600), que se encuentra en el 50 al 70% de los melanomas. La resistencia al vemurafenib surge en cuestión de meses en casi todos los pacientes con melanoma, y las células tumorales supervivientes muestran un aumento de la malignidad que conduce rápidamente a la letalidad. Una criba de CRISPR a escala genómica encontró que las mutaciones de pérdida de función en los genes NF1, NF2 y CUL3 producen resistencia a vemurafenib. Para explorar si las mutaciones en las regiones no codificantes, alrededor de estos tres genes, podrían afectar de manera similar a la resistencia a los fármacos, se hizo uso de tres bibliotecas de "sgRNAs" que mapeaban a lo largo de 100kb en las regiones 5' y 3' de las principales isoformas de cada gen. Se concluyó que las mutaciones en la región no codificante 5' del gen CUL3 alteran los entornos locales epigenéticos y la interacción con distintos factores de transcripción ("yin yang 1" (YY1), "zinc finger protein 263" (ZNF263), "CCCTC-binding factor" (CTCF), y el complejo "activation-protein 1" (AP-1) formado por Jun:Fos). Estas regiones no codificantes son de alta importancia en la regulación de genes y la resistencia quimioterapéutica y farmacológica.


title: CRISPR

text: Los CRISPRs pueden agregar y eliminar pares de bases en locus de ADN altamente específicos. Se han usado los CRISPRs para cortar más de cinco genes a la vez.


title: CRISPR

text: Los "CRISPRi", análogos a los ARNi, tienen la capacidad de desactivar los genes en un modo reversible al ser específicos pero sin hacer cortes. En bacterias, la presencia es lo único que se necesita para detener la transcripción, pero en aplicaciones de mamíferos, una sección de proteína es añadida. Guía al ARN que es específico para el ADN regulatorio, que son promotores que preceden al gen de interés.


title: CRISPR

text: La Cas9 se usó para llevar factores de transcripción sintéticos (fragmentos proteicos que encienden genes) que activaban genes humanos específicos. Esta técnica logró un fuerte efecto al dirigir múltiples constructos de CRISPR a lugares ligeramente diferentes en el promotor del gen.


title: CRISPR

text: Los genes incluían algunos atados a enfermedades humanas, diferenciación muscular, cáncer, inflamación y de producción de hemoglobina fetal.


title: CRISPR

text: Otro mecanismo para la defensa de las bacterias contra invasión de fagos es teniendo islas genómicas. Un subtipo de islas llamada "phage-inducible chromosomal island" (PICI) es cortada del cromosoma bacteriano cuando se presenta la infección por fago y puede inhibir su replicación. Los mecanismos que inducen el sistema PICI y cómo PICI inhibe la replicación del fago no se tienen entendidos hasta ahora. Un estudio mostró que el fago lítico ICP1, el cual específicamente ataca al serotipo 01 de "Vibrio cholerae" ha adquirido un sistema CRISPR/Cas que apunta a un elemento de tipo PICI en "V. cholera". El sistema tiene dos locus CRISPR y 9 genes Cas. Parece ser que es homólogo al sistema 1-F system encontrado en "Yersinia pestis". Además, igual que el sistema bacteriano CRISPR/Cas el sistema ICP1 CRISPR/Cas puede adquirir nuevas secuencias, lo cual permite al fago co-evolucionar con su hospedador.


title: CRISPR

text: Existe software gratuito para diseñar ARN para poder identificar cualquier gen deseado. El repositorio de Addgene ofrece a los académicos la posibilidad de crear su propio sistema ”CRISPR system" por 65 dólares. En 2013 Addgene distribuyó más de 10 000 constructos de CRISPR. La asociación ha recibido secuencias génicas activadoras de CRISPR de 11 equipos de investigación independientes.


title: CRISPR

text: Una aplicación de patente provisional sobre el uso del sistema CRISPR para la edición de genes y regulación de expresión génica fue solicitada por el equipo de Doudna el 12 de mayo de 2012. Aplicaciones subsecuentes fueron combinadas el 6 de marzo de 2014, con los resultados siendo publicados por la oficina de patentes estadounidense (USPTO). Los derechos de patente han sido asignados por los inventores a los regentes de la Universidad de California y la Universidad de Viena.


title: CRISPR

text: Por su parte, Feng Zhang en el Broad Institute, que había desarrollado y demostrado la tecnología CRISPR en células humanas, ha obtenido una patente de CRISPR para células con núcleo: células de animales (incluidos los humanos) y de plantas. Según Zhang, las predicciones formuladas por Doudna en su propia aplicación de patente de que su descubrimiento podría funcionar en humanos fueron una "mera conjetura", mientras que él fue el primero en demostrarlo en un acto de invención separado y "sorprendente". Esta segunda patente es controvertida, ya que otros científicos sugieren que, en términos de propiedad intelectual, era "obvio" que la tecnología CRISPR funcionaría en células humanas y por tanto la "invención de Zhang no sería merecedora de una patente propia. Desde diciembre de 2014 se espera que Doudna y Charpentier planteen su oposición contra la patente del Broad Institute.


title: CRISPR

text: En febrero de 2017, la Oficina de Patentes de los Estados Unidos se pronunció sobre un caso de interferencia de patente presentado por la Universidad de California con respecto a las patentes emitidas al Broad Institute, y encontró que las patentes Broad, con reivindicaciones que abarcaban la aplicación de CRISPR/cas9 en células eucariotas, eran distintas de los inventos reclamados por la Universidad de California.


title: CRISPR

text: Hasta noviembre de 2013, SAGE Labs (ahora parte del grupo Horizon Discovery) tenía derechos exclusivos de una de esas empresas para producir y vender ratas genéticamente modificadas y derechos no exclusivos para modelos de ratones y conejos. En 2015, Thermo Fisher Scientific había autorizado la propiedad intelectual de ToolGen para desarrollar kits de reactivos CRISPR.


title: CRISPR

text: Hay que aclarar que el sistema CRISPR fue descubierto por primera vez, por un grupo de científicos japoneses en 1987 liderado por Yoshizumi Ishino, años después fue encontrado de nuevo de forma independiente por el microbiólogo alicantino Francis Mojica, actual profesor titular de la Universidad de Alicante.


title: CRISPR

text: Según investigadores del Instituto Wellcome Sanger en Inglaterra, la edición genética puede llevar a mutaciones no directamente relacionadas con el sitio de edición del genoma. La complejidad y la interrelación entre genes editados y no editados podría afectar a la salud de personas con genes editados. En su monografía "El fenotipo revolucionario" ("The revolutionary phenotype"), el neurólogo canadiense Jean-François Gariépy desarrolla una teoría basada en la Hipótesis del mundo de ARN en que la edición del genoma humano podría llegar a un reemplazo de la reproducción biológica. En lugar de la presente reproducción biológica, podría formarse una reproducción controlada por científicos usando programas informáticos para cumplir los deseos de los padres eligiendo una edición genética para sus hijos.


title: Miss Venezuela

text: El Miss Venezuela es el principal concurso de belleza femenina nacional de Venezuela que se celebra anualmente desde 1952, donde la ganadora fue Sofia Silva Inserri (Miss Bolívar). Cada concursante representa un y/o región del país y la del título lo lleva por un período de alrededor de un año. La actual Miss Venezuela 2022 es Diana Silva del Distrito Capital.


title: Miss Venezuela

text: El Miss Venezuela es un concurso popular y con masivo seguimiento en toda Venezuela e incluso internacionalmente, sobre todo en América y Asia. El patrocinador oficial del certamen es la Organización Cisneros y juntos conforman la "Organización Miss Venezuela". Actualmente es liderado por un Comité Ejecutivo, por las exmisses: Nina Sicilia, Miss Internacional 1985; Jacqueline Aguilera, Miss Mundo 1995; y María Gabriela Isler, Miss Universo 2013. La Organización Cisneros organiza este concurso y sus dos certámenes hermanos, el Miss Venezuela Mundo (que se realiza ocasionalmente) y el Mister Venezuela. Esta misma organización mantiene, comercializa y agenda las actividades y necesidades de las tres portadoras de los títulos (Miss Venezuela Universo, Miss Venezuela Mundo y Miss Venezuela Internacional), siendo su imagen principal la "Miss Venezuela Universo" en funciones.


title: Miss Venezuela

text: El certamen es transmitido y producido en vivo y en directo por la cadena de televisión venezolana Venevisión, con versiones corregidas en los Estados Unidos y México por Univision y Telemundo, respectivamente durante un periodo de 10 años. Además es transmitido para países hispanos a través de OnDirecTV y Ve Plus, y a Estados Unidos por Ve Plus, así como por streaming y en plataformas en línea.


title: Miss Venezuela

text: El 7 de mayo de 1905 fue elegida Manuela Victoria Mujica Antich, representante del estado Lara, por votación popular como "Señorita Venezuela". Muchos autores y estudiosos de la historia del concurso Miss Venezuela la consideran como la primera Miss Venezuela que existió y a esa votación como precursora del concurso como es conocido actualmente.


title: Miss Venezuela

text: El concurso Miss Venezuela fue fundado oficialmente en 1952 por Panamerican Airways (Pan Am), junto con la empresaria Gloria Sánchez, con el propósito publicitario y turístico de enviar a una representante venezolana al concurso Miss Universo, en California, Estados Unidos, el cual había sido creado ese mismo año por la empresa "Pacific Mills" para promocionar su nueva marca de trajes de baño y bikinis ""Catalina"".


title: Miss Venezuela

text: La rapidez con que se eligió a las concursantes para ese primer certamen caracterizaría sus primeras ediciones, en las cuales los desfiles con diferentes indumentarias se realizaban durante el transcurso de una semana o más en diferentes locaciones del país. Debido a protestas por parte de organizaciones religiosas de la época, los desfiles en traje de baño se realizaban en privado, solo para los jurados.


title: Miss Venezuela

text: A diferencia del actual concurso, no se realizaba entrenamiento previo y tanto el maquillaje como el vestuario eran responsabilidad de las concursantes. Tampoco se entregaron premios, ya que el único objetivo del concurso era elegir a una representante local para el Miss Universo en Long Beach, California, así cómo atraer turismo al país. Durante estos años también se empezaría a elegir representantes a los concursos de Miss Mundo y Miss Internacional.


title: Miss Venezuela

text: Tras una primera interrupción en 1954 durante la dictadura de Marcos Pérez Jiménez, Panamerican Airways cedió los derechos del concurso en 1955 al periodista y musicólogo Reinaldo Espinoza Hernández, quien a pesar del triunfo de Susana Duijm en el Miss Mundo de ese año (primera hispanoamericana en llevarse una gran corona internacional), tras enfrentar protestas por parte de la Iglesia católica y movimientos feministas, sumado a la falta de interés por parte de la prensa, y una segunda interrupción en 1959, vendió los derechos del Miss Venezuela al empresario cubano-venezolano Edwin E. Acosta-Rubio en 1962.


title: Miss Venezuela

text: De mayor visión empresarial, Acosta-Rubio inmediatamente cambió el formato del Miss Venezuela, convirtiendo el semi-improvisado concurso turístico en la organizada institución anual que existe hoy en día. Para elegir a las concursantes con criterio profesional y responsable creó el llamado "Comité Venezolano de la Belleza", desarrolló la proyección publicitaria del evento y lo transmitió por primera vez por televisión en 1962, a través de la cadena de Radio Caracas Televisión. Además, en el evento de 1962 cobró una entrada de 5 bolívares (unos 2,35 dólares de la época). Con todos estos cambios a finales de los años 1960, el concurso Miss Venezuela era un favorito entre los venezolanos y más importante aún para Acosta-Rubio, un negocio rentable y apreciado.


title: Miss Venezuela

text: En el año 1968 se transmitió por primera vez el desfile en traje de baño y de gala por televisión y aunque no fue de mayor importancia en el momento, ese mismo año Osmel Sousa comienza a trabajar como diseñador gráfico y de modas del concurso.


title: Miss Venezuela

text: En el año 1969, Ignacio Font Coll cuñado de Edwin Acosta -Rubio quien era el creador y Presidente de "OPPA Publicidad, lo nombra como director de" la actual Organización Miss Venezuela.


title: Miss Venezuela

text: Ya en los años 1960, la organización de Acosta-Rubio había empezado a obtener excelentes resultados con Mercedes Revenga de primera finalista en el "Miss Beauty Form" "1964" y posteriormente semi-finalista en Miss Universo 1964, la elección de Mariela Pérez Branger y Peggy Kopp como primera y tercera finalista en los Miss Universo 1967 y 1968, respectivamente, Adriana López ganando el "Miss Planet Resort 1967", Judith Castillo primera finalista del Miss Universo 1976, y Zully Guilarte ganando el "Miss Turismo de Centroamérica y el Caribe" "1968", así cómo numerosas clasificadas más alrededor del mundo, sirvieron de abreboca para el triunfo de Maritza Sayalero en el Miss Universo 1979, el primero que se televisó a color en el país. Con Sayalero, se inició lo que se considera la "época de oro" del Miss Venezuela.


title: Miss Venezuela

text: Desde el año 1972 la Organización Cisneros adquirió los derechos para empezar a producir y transmitir el concurso de belleza por medio de su canal, Venevisión, la destacada participación de Miss Venezuela 1972, María Antonieta Cámpoli, en Miss Universo 1972 como segunda finalista, fue el gran triunfo para el nacido proyecto. Obteniendo posteriormente también la primera corona del certamen Miss Intercontinental en 1974, por la bolivarense, María Emilia de los Ríos, el cual marca el momento cuando la madurez del concurso empieza a dar frutos.


title: Miss Venezuela

text: La sólida organización que había creado Acosta-Rubio fue importante para la continuación del concurso, que, tras ser vendida en su totalidad a la Organización Cisneros, Venevisión en 1981, lo transformó en el reconocido certamen que es hoy en día.


title: Miss Venezuela

text: En 1981, con el triunfo de Irene Sáez en el Miss Universo y Pilín León en el Miss Mundo, además del fallecimiento de Ignacio Font Coll en el mismo año; la Organización Cisneros se coloca al frente del Miss Venezuela en 1982, y se estructura oficialmente la Organización Miss Venezuela, Tras esto Cisneros y Acosta-Rubio nombra a Osmel Sousa, trabajador de la organización por muchos años, en febrero de 1982 como sucesor de Ignacio Font Coll, quien dirigía la presidencia del concurso, y nombraron a Joaquín Riviera, María Kallay y Mery Cortez como productor, coordinador y coreografa respestivamente del evento.


title: Miss Venezuela

text: A partir de ese momento, el Miss Venezuela alcanzó un gran nivel y prestigio internacional, cuando las venezolanas se traían las coronas internacionales de cuanto concurso existiera en cualquier parte del mundo, o al menos, quedaban entre las primeras 6 finalistas. En la década de los noventa posteriormente, la Organización Miss Venezuela fue catalogada como el concurso de belleza de más éxito internacional.


title: Miss Venezuela

text: A partir de 1984 las coronas usadas en los certámenes de la organización serían realizadas por George Wittels, quien hasta julio de 2018 fue el encargado oficial de elaborar las piezas de orfebrería del concurso Miss Venezuela, Wittels fue sucedido por la señora Mila Toledo (quien fuera "Miss Distrito Federal 1980"). En 1996 empieza a disponer de una página web, "missvenezuela.com".


title: Miss Venezuela

text: En 2009 Venezuela logra el Récord Guinness al ser la primera y hasta ahora única representación en el Miss Universo en ser coronada por otra ganadora de la misma nación.


title: Miss Venezuela

text: En 2010, el certamen adquiere la franquicia del Miss Tierra la cual mantuvo hasta 2015 obteniendo una corona Alyz Henrich como Miss Tierra 2013,


title: Miss Venezuela

text: Joaquín Riviera estaría al frente del concurso hasta su muerte en el año 2012, posteriormente tras la muerte de María Kallay en el año 2013, la producción del evento quedó a cargo de Peggy Navarro, Ricardo Di Salvatore, Vicente Alvarado y Erick Simonato; quienes formaban parte del equipo de producción junto a Riviera como productor general del mismo. En 2015 Peggy dejó el cargo, quedando entonces tres encargados los cuales hasta la fecha siguen formando parte de la Organización Miss Venezuela.


title: Miss Venezuela

text: En 2016, Mery Cortez anuncia su salida del certamen y de Venevision después de casi 45 años como productora coreográfica del certamen y de la mano del fallecido Joaquin Riviera.


title: Miss Venezuela

text: El 6 de febrero de 2018 desde la red social Instagram, el presidente de la Organización Miss Venezuela, Osmel Sousa, por más de 40 años, anunció su retiro de la organización, quedando vacante la presidencia desde ese momento, poco tiempo después se conocería que las riendas del certamen la manejarían las ex-misses: Gabriela Isler, Miss Universo 2013; Jacqueline Aguilera, Miss Mundo 1995 y Top Model of the World 1995; y Nina Sicilia, Miss Internacional 1985, con el objetivo de dar un nuevo rumbo a uno de los concursos de belleza más importantes del planeta.


title: Miss Venezuela

text: El 17 de abril de 2018 desde la misma red social, la Organización Miss Venezuela mediante una campaña de intriga fue que reveló las imágenes de quienes serían el nuevo comité ejecutivo; Un día después se confirmó como se venía especulando que Nina Sicilia, Miss Internacional 1985, Jacqueline Aguilera, Miss Mundo 1995 y Gabriela Isler, Miss Universo 2013 conformarán un Comité Ejecutivo encargado de liderar la evolución del certamen, sustituyendo la antigua figura del presidente y actuando como el máximo órgano de liderazgo del certamen.


title: Miss Venezuela

text: Actualmente el Miss Venezuela se realiza entre los meses de septiembre, octubre o noviembre, tras unos tres meses o más de eventos preliminares como la "Gala Interactiva de la Belleza", en el cual las aspirantes se presentan a la prensa y reciben premios y bandas por parte de los patrocinadores y marcas internacionales.


title: Miss Venezuela

text: Este acto se transmite por televisión y es de notable interés público, mientras el acto de coronación ha sido durante muchos años el programa de televisión más visto en Venezuela a pesar de que ha llegado a durar hasta 5 horas en 1995.


title: Miss Venezuela

text: El Miss Venezuela ha sido llamado a través de los años como «"El Magno Evento de la Belleza"»debido a la alta calidad del espectáculo que le imprimía la producción y dirección del fallecido Joaquín Riviera. Como empresa filial del grupo de la Organización Cisneros, Venevisión se encarga de la transmisión en vivo del espectáculo, que normalmente incluye las actuaciones de renombrados artistas nacionales e internacionales y una lujosa presentación como ningún otro evento que se produce en el país, «"La noche más Linda"» es un hito cultural y amado por todos los venezolanos, durante varias horas todos se reúnen para saber el nombre de sus nuevas soberanas de la belleza de Venezuela, el famoso «Himno del Miss Venezuela» acompaña este sentimiento.


title: Miss Venezuela

text: A lo largo de los años el Miss Venezuela se ha llevado a cabo por tradición en el Poliedro de Caracas, o bien en los centros de convenciones de los hoteles más importantes de la ciudad de Caracas como el "Hotel Intercontinental Tamanaco" o en otras sedes como el "Hotel Macuto Sheraton" en el estado Vargas, en el "Palacio de Eventos" en la ciudad de Maracaibo en 2010, y en teatros como el "Teatro Teresa Carreño," y hasta en los estudios de "Venevisión."


title: Miss Venezuela

text: Las aspirantes son seleccionadas de entre miles de muchachas, ya sea provenientes de las franquicias regionales o porque fueron seleccionadas directamente por la "Organización Miss Venezuela", que decide el número de participantes que usualmente varia entre 24 y 26 candidatas.


title: Miss Venezuela

text: Normalmente, existe una candidata por cada uno de los 23 estados de Venezuela más el Distrito Capital, pero el número puede llegar hasta 28 e incluso 30 o 32 candidatas, pues, en ocasiones se incluyen regiones geográficas de importancia dentro de los mismos estados, tal es el caso de la Península Guajira, Península de Paraguaná, Costa Oriental, Canaima, Dependencias Federales o la Guayana Esequiba, entre otras.


title: Miss Venezuela

text: Es importante acotar que la candidata no necesariamente debe ser nativa del estado o región a representar, el Miss Venezuela nunca ha hecho especial énfasis en este aspecto, para así fomentar la participación de todas las candidatas sin importar su estado de origen; por ejemplo, Ly Jonaitis, Miss Guárico y Miss Venezuela 2006 es oriunda de Valencia, estado Carabobo.


title: Miss Venezuela

text: Debido a esto, a pesar de que estados como Aragua, Táchira, Lara, Zulia y Carabobo realizan concursos de belleza para elegir la representante al Miss Venezuela, la ganadora de estos certámenes regionales ganaba el derecho de representar el estado en la final del certamen. Sin embargo, a partir de 2013 y con la incorporación de los realities, estas franquicias regionales seleccionan a un grupo de participantes que puedes oscilar entre cinco y diez, o incluso más, las cuales pasan directamente a ser pre-candidatas al evento, para posteriormente ser seleccionadas las candidatas oficiales, dentro de un grupo que supera hasta 150 aspirantes, aunque puede variar si se presentara el caso, a partir del año 2018 se incorpora el "EPI" o también llamada "Evaluación Preferencial Individual", donde las aspirantes a Miss Venezuela, tras una inscripción previa en línea, son evaluadas individualmente en la quinta Miss Venezuela para su pre selección.


title: Miss Venezuela

text: El escenario del certamen Miss Venezuela ha reunido grandes artistas nacionales e internacionales como: Celia Cruz, Oscar D'León, Chino y Nacho, Tito El Bambino, Wilfrido Vargas, Luis Fonsi, David Bisbal, Jorge Celedón, Daddy Yankee, Wisin y Yandel, Olga Tanón, Prince Royce, Kudai, Miguel Bosé, Chayanne, Ricky Martin, Romeo Santos, Franco de Vita, Ricardo Montaner, Simón Díaz, Raphael, Rocío Dúrcal, Kiara, Karina, entre tantos; acompañados por grandiosas coreografías, como las presentadas por "La Primerísima de América", Mirla Castellanos, en sus presentaciones de 1980, 1982 y 1984; y la de Celia Cruz en 1987. Cabe destacar que Mirla Castellanos ha sido la artista con mayor números de apariciones en este certamen durante toda su historia.


title: Miss Venezuela

text: Este certamen es el responsable de seleccionar a las representantes del país a Miss Universo, Miss Mundo, Miss Internacional y hasta el 2015 a Miss Tierra (la cual a partir de 2016 es seleccionada por una franquicia distinta, denominada Miss Earth Venezuela); al igual que designaciones en su momento a certámenes como el Reinado Internacional del Café, Reina Hispanoamericana, y a otros concursos de belleza de talla internacional y continental como el Miss Continentes Unidos, Miss Supranacional, Miss Grand Internacional, y Miss Intercontinental.


title: Miss Venezuela

text: Hasta el edición de 2011, se escogía en una misma versión a la representante al Miss Mundo; sin embargo luego del Miss Mundo 2012 y atendiendo al requerimiento de la Organización Miss Mundo por su presidenta Julia Morley, se realizó una reunión sostenida entre su presidenta, en Caracas, con su homólogo Osmel Sousa. La Organización Miss Venezuela tomó la decisión de ajustar los parámetros de la realización del certamen Miss Venezuela, dividiéndolo en dos eventos: uno para coronar a las representantes para Miss Universo, Miss Internacional y otro para escoger a la candidata del país al Miss Mundo, dicho certamen fue llamado Miss Venezuela Mundo. No obstante, a partir de 2016 este último certamen no se realiza, por lo que la primera finalista del Miss Venezuela 2016 es posteriormente designada al Miss Mundo ese mismo año, para 2017 en adelante nuevamente se toma la decisión de coronar a Miss Venezuela Mundo la misma noche del certamen Miss Venezuela.


title: Miss Venezuela

text: Tradicionalmente, el certamen dura aproximadamente cuatro horas en vivo, con posibilidad de prórroga. En la mayoría de los casos, se lleva a cabo a mediados de septiembre o noviembre. Su lugar de realización principal y más famoso es el Poliedro de Caracas desde la década de 1990, aunque desde el año 2011 se ha estado realizando en los estudios Venevisión, el Estudio 1 principalmente, y desde 2017 en el Estudio 5.


title: Miss Venezuela

text: El desfile es precedido por un mes de acontecimientos preliminares, incluyendo los premios corporativos, la presentación a la prensa y la Gala Interactiva de la Belleza, esta etapa es denominada "Temporada de la Belleza", la cual a su vez comprende también numerosos programas televisados.


title: Miss Venezuela

text: Bajo la dirección de Osmel Sousa, Venezuela se ha adjudicado más títulos de belleza mundiales que cualquier otro país, incluyendo los cuatro mayores, principales y más famosos certámenes o conocidos como "The Big Four": 7 ganadoras de Miss Universo, 6 ganadoras de Miss Mundo, 8 ganadoras de Miss Internacional y 2 ganadoras de Miss Tierra. Además, Venezuela lleva acumuladas otras coronas en otros concursos: 7 ganadoras de Reina Hispanoamericana y 5 ganadoras del Miss Intercontinental, entre otras.


title: Miss Venezuela

text: Desde 1952 hasta 2006 hubo 54 "Misses" en 54 años a pesar de los dos años en que no se realizó el concurso (1954 y 1959). La corrección sucedió con la renuncia de María José Yellici y Elluz Peraza en 1969 y 1976, respectivamente. En ambos casos fueron substituidas por las primeras finalistas, Marzia Piazza y Judith Castillo, quienes sirvieron como Miss Venezuela exitosamente hasta el final del reinado.


title: Miss Venezuela

text: En todos los años las ganadoras fueron elegidas por un gran jurado durante el acto de coronación final, excepto Miss Miranda 1991, Jackeline Rodríguez, quien fue designada directamente por Osmel Sousa tras conocerla en una universidad, para representar a Venezuela en el Miss Universo debido a que ese año el Miss Venezuela se pospuso de febrero a mayo, con lo cual sucedía después del concurso internacional. A partir de entonces, las ganadoras del Miss Venezuela participan en el Miss Universo del año siguiente, al igual que en el Miss Mundo y Miss Internacional.


title: Miss Venezuela

text: En cuanto a estas participaciones, las reglas han cambiado durante los años, y se utiliza un sistema de jerarquía basado en la importancia de los concursos internacionales según la organización. Así, la ganadora del Miss Venezuela participa en el Miss Universo, la que ocupa el segundo puesto en el Miss Mundo, y la tercera en el Miss Internacional, durante algunos años también se premiaba la noche final del Miss Venezuela a la representante para Miss Tierra entre 2010 y 2015.


title: Miss Venezuela

text: Ellas mismas u otras finalistas participan en concursos menores alrededor del mundo, lo cual es totalmente a discreción de la organización directamente. Desde 2013 hasta 2015, la candidata que representa a Venezuela en el Miss Mundo fue elegida en un concurso aparte llamado Miss Venezuela Mundo, no obstante, en 2016 el certamen no se realizó, por lo que Diana Croce Miss Nueva Esparta y primera finalista del Miss Venezuela 2016, sería designada para representar a Venezuela en el Miss Mundo 2016, mismo sistema se repetiría con la designación de Ana Carolina Ugarte como Miss Venezuela Mundo 2017. A partir de 2018, se recupera el sistema tradicional de selección en la noche final, (Miss Universo, Miss Mundo, y Miss Internacional).


title: Miss Venezuela

text: A continuación se presentan a los estados, regiones, municipios y/o ciudades que más clasificaciones han en el Miss Venezuelaː "Actualizado luego del Miss Venezuela 2022"


title: Miss Venezuela

text: A continuación se presentan a los estados y/o regiones que aún no han ganado el título de Miss Venezuela


title: Miss Venezuela

text: A continuación se presentan las regiones especiales que participan o han participado en el Miss Venezuela:


title: Miss Venezuela

text: • En 2006 la Organización Miss World atacó a la Organización Miss Venezuela con tener una ganadora como tal del concurso nacional para el Miss Mundo 2006, además la fecha del concurso Miss Mundo se adelantó mucho antes de la final del concurso Miss Venezuela 2006, es por eso que se crea el concurso Miss Venezuela Mundo 2006. Luego arrancó el concurso Miss Venezuela 2006 donde se eligió a la Miss Venezuela Mundo 2006 rumbo al Miss Mundo 2007 que se realizaría en China.


title: Miss Venezuela

text: • En 2017 es elegida por designación de Osmel Sousa, Ana Carolina Ugarte, Miss Monagas 2013 para representar al país en la edición Miss Mundo 2017, convirtiéndose así en la segunda monaguense en ser Miss Mundo Venezuela; mientras que en la tardía edición del Miss Venezuela 2017 es elegida, Veruska Ljubisavljevic, del estado Vargas quien representará a Venezuela en Miss Mundo 2018.


title: Miss Venezuela

text: • En 1994 Milka Chulina, Miss Venezuela 1992, es designada para representar a Venezuela en la edición Miss Internacional 1994, luego en el Miss Venezuela 1994 es elegida la candidata al Miss Internacional 1995.


title: Miss Venezuela

text: • En 2003 es designada Goizeder Azúa para representar al país en Miss Internacional 2003 logrando la cuarta corona para el país, anteriormente había sido coronada Miss Venezuela Mundo 2002, luego en el Miss Venezuela 2003 es elegida la candidata al Miss Internacional 2004.


title: Miss Venezuela

text: • En 2017 es designada Diana Croce para representar al país en Miss Internacional 2017 quedando como 2.ª finalista, anteriormente había sido coronada Miss Venezuela Mundo 2016, luego en el Miss Venezuela 2017 es elegida la candidata al Miss Internacional 2018.


title: Miss Venezuela

text: Es el primer evento oficial del Miss Venezuela, en la cual se dan a conocer las candidatas oficiales del certamen, y donde se sabrá a que estado representaran durante el certamen anual. Hasta 2016 se denominaba como la "Presentación Oficial a la Prensa de la Candidatas al Miss Venezuela", pero para 2017 solo es una presentación sin participación de la prensa escrita y digital.


title: Miss Venezuela

text: En la Gala Interactiva de la Belleza (evento previo a la noche final), se da a conocer varios reconocimientos previos que fueron elegidos a través del voto del público en las redes sociales y la página oficial del certamen. Los siguientes reconocimientos son los siguientes:


title: Miss Venezuela

text: El evento antes era denominado solamente como "Gala de la Belleza", donde las bandas eran impuesta por un jurado, pero hasta el año 2011 el formato cambia, siendo la elección de la banda por votos de la audiencia por Internet por medio la página web del Miss Venezuela, Facebook y Twitter. A partir del año 2017 no se realiza el evento, siendo la entrega de la bandas realizada durante el transcurso del certamen.


title: Miss Venezuela

text: Miss Venezuela, Todo por la corona fue un reality show, previo a la noche final del máximo certamen de belleza nacional, conducido por Viviana Gibelli. Su única temporada se realizó en 2013 con un total de 50 aspirantes a misses las cuales enfrentaron diversos desafíos y entrenamientos, las mismas eran eliminadas semana a semana hasta reducir el grupo a las 26 candidatas finales que compitieron por la noche final del Miss Venezuela.


title: Miss Venezuela

text: Este reality fue producción de Venevisión y con la coproducción de Sony Entertainment Television. Ambos transmitieron el reality los lunes, pero en horarios diferentes. En 2014 no hubo acuerdo con ningún canal internacional. Pasando el reality a ser llamado, .


title: Miss Venezuela

text: es un reality show venezolano de belleza y talento femenino, que tiene como objetivo principal elegir y conocer a las candidatas para el Miss Venezuela. El reality es producido y transmitido por Venevisión en vivo desde el Estudio 1, al finalizar Súper Sábado Sensacional.


title: Miss Venezuela

text: En el inicio se escogen candidatas electas de los certámanes realizados de Zulia, Carabobo, Lara, Táchira, Bolívar y Aragua, conjuntamente con las escogidas en la "Quinta Miss Venezuela" en el Distrito Capital, para tener el total de candidatas finales que irán rumbo a la noche final; las mismas son conocidas más profundamente durante el avance del programa semana a semana.


title: Miss Venezuela

text: Es el evento más esperado de todo el certamen, divididos en varios segmentos empezando por el acostumbrado "Opening", donde un artista nacional y/o internacional junto a las candidatas hacen un pre-show con el "Himno del Miss Venezuela", posteriormente se prosigue al "Desfile de traje de baño", luego al "Desfile de Traje de Gala" en donde se dan a conocer los trajes de los mejores diseñadores del país, para luego escoger el cuadro de las diez "Semifinalistas" que se enfrentarán a la "Ronda de Preguntas" para luego reducir el número de candidatas al "Cuadro de Honor", donde finalmente se da a conocer las finalistas y a la "Ganadora".


title: Miss Venezuela

text: Es un programa especial transmitido por Venevisión, desde el año 2014 tradicionalmente, donde se reciben al cuadro de ganadoras del certamen, junto a la ganadora de "La Magia de ser Miss", donde cuentan sus anécdotas y sentimientos después de haber ganado.


title: Miss Venezuela

text: En el actual cuadro de honor del certamen, se escogen a 10 candidatas que serían las semifinalistas. El cuadro de honor actual está conformado de la siguiente manera:


title: Miss Venezuela

text: Hasta la edición del 2011, la que quedaba de segundo lugar se llevaba el título de Miss Venezuela Mundo y representaba a Venezuela, en el Miss Mundo. Pero por diferentes motivos la representante de Venezuela al Miss Mundo se eligió a partir del año 2013 en un evento diferente llamado Miss Venezuela Mundo, aunque este no se realizó en el 2016, y desde entonces 2 representantes del país en el Miss Mundo fueron designadas, no obstante, en el Miss Venezuela 2017 se eligió a Miss Venezuela Mundo, luego de 4 años. Igualmente hasta el año 2015 se elegía a Miss Venezuela Tierra durante el Miss Venezuela pero a partir del año 2016 la ganadora de este título la elige la franquicia de Miss Earth Venezuela en un evento aparte, lo mismo se presenta con los concursos menores Miss Supranacional, Miss Grand Internacional, y Miss Intercontinental.


title: Miss Venezuela

text: El certamen se restructuraría oficialmente en 2018 por primera vez en más de 30 años después de la salida de Osmel Sousa de la presidencia del certamen.


title: Irma Grese

text: Irma Ilse Ida Grese(Wrechen; 7 de octubre de 1923 – Hamelín; 13 de diciembre de 1945) fue una supervisora de prisioneros alemana en los campos de concentración de Auschwitz-Birkenau, Bergen-Belsen y Ravensbrück durante la Segunda Guerra Mundial. Apodada ""La bella bestia"", ""La cancerbera"", ""El ángel de la muerte"" (mote también acuñado al médico nazi Josef Mengele) o ""La perra de Belsen"" por los prisioneros de estos campos a causa de su comportamiento sádico y perverso, fue una de las más crueles y famosas criminales de guerra nazis, quien a pesar de su corta edad fue condenada y ejecutada en la horca por los Aliados el 13 de diciembre de 1945.


title: Irma Grese

text: Hija de Alfred Grese, un agricultor que disentía del Partido Nazi, y de Berta, una mujer que se suicidó en 1936. Irma dejó la escuela a los quince años, debido al poco empeño en los estudios y a sus intereses fanáticos en participar de la "Bund Deutscher Mädel" (Liga de la Juventud Femenina Alemana), que su padre no aprobaba.


title: Irma Grese

text: En 1942, con 18 años, se presentó como voluntaria para un entrenamiento en el campo de Ravensbrück, lo que provocó la furia de su padre, contrario a este trabajo. Cuando Irma llegó a casa con el uniforme, su padre la echó de casa, entonces ella lo denunció y consiguió que lo metieran en la cárcel.


title: Irma Grese

text: Entre otras de sus actividades, trabajó dos años en un sanatorio de las SS e intentó, sin éxito, graduarse como enfermera.


title: Irma Grese

text: En 1943 ingresó en el Campo de concentración de Auschwitz como "SS Oberaufseherin" (guardia femenina), y para finales de ese mismo año fue ascendida a supervisora, la segunda mujer de más alto rango en el campamento, después de María Mandel, a cargo de alrededor de 30.000 reclusas de origen judío. El ascenso se produjo a causa de su enorme fanatismo nazi y el considerable sadismo que desarrolló.


title: Irma Grese

text: Después de Auschwitz, su sadismo continuó en Ravensbrück y Bergen-Belsen, tres campos de exterminio nazis, siendo detenida el 15 de abril de 1945 por los británicos en el último de ellos, junto a otros integrantes de las SS.


title: Irma Grese

text: Irma Grese fue una de las principales criminales de guerra en el juicio de Bergen-Belsen, realizado entre septiembre y diciembre de 1945. Las supervivientes de los campos que testimoniaron la acusaron de asesinatos y torturas. Siempre usando pesadas botas, látigo y pistola, entre otros elementos, Irma Grese era conocida por dejar que perros se lanzaran encima de las presas para devorarlas, asesinar a internas a tiros a sangre fría, torturas a niños, abusos sexuales y palizas sádicas con látigos trenzados hasta provocar la muerte de las víctimas.


title: Irma Grese

text: Aunque Irma Grese renegó de los asesinatos y manifestó que conocía el destino de las prisioneras solo por boca de ellas mismas, nunca renegó de su ideario nazi y cantaba himnos de las SS en la celda.


title: Irma Grese

text: En el juicio de Bergen-Belsen fue condenada a la horca a los 22 años -la más joven condenada a muerte por leyes británicas en el siglo XX-, siendo ejecutada en la prisión de Hamelín (Alemania) el 13 de diciembre de 1945.


title: Irma Grese

text: Parece que hubo un enfrentamiento con el famoso verdugo inglés Albert Pierrepoint. Cuando intentó poner una capucha oscura a la condenada, esta se negó violentamente. Pierrepoint la abofeteó repetidas veces hasta que logró dominarla. Colocó apresuradamente la soga alrededor de su cuello pero no de una manera adecuada. Se cree que Grese murió realmente por estrangulamiento y no por ahorcamiento. En cualquier caso, lo que más ha trascendido es que sus últimas palabras fueron: "Schnell!" ("¡Rápido!"). Al parecer después de su ejecución su cuerpo fue mutilado e incinerado para que después las cenizas fueran arrojadas a un río de desagüe.


title: Pescado

text: El término pescado se refiere a los peces extraídos de su hábitat para servir como alimento. Estos peces pueden ser pescados en el agua —océanos, mares, ríos, lagos—, pero también pueden ser criados mediante técnicas de acuicultura. En concordancia con los distintos tipos de peces, se obtienen distintos tipos de pescado. El término se aplica simplemente a los peces, de ahí la palabra pescado, y desde la caída del Imperio romano hasta los inicios de la Edad Moderna se aplicaba incluso a ciertas aves acuáticas como los patos, los gansos y las barnaclas, que eran comidos en cuaresma, cuando no se podía comer otra carne que la de pescados y mariscos ya que, por una leyenda atribuida a las barnaclas, que las consideraba una metamorfosis de ciertos bivalvos, se clasificaba a estas aves como pescado.


title: Pescado

text: El pescado blanco es el que tiene un bajo contenido en grasas, aproximadamente 2% de su peso en grasa (lenguado, merluza, rodaballo, abadejo, etcétera).


title: Pescado

text: El pescado azul tiene un contenido en grasa superior al 5 % (anchoa, bonito, caballa, salmón, sardina, atún, etc.). Es una fuente natural de ácidos grasos omega-3, un ácido graso esencial.


title: Pescado

text: Son los que tienen como característica que, naciendo con la forma típica de un pez, van variando esta hasta hacerse planos, para poder vivir en el fondo. De aquí que tengan los dos ojos en el mismo lado de la cara, la boca torcida y las aletas pectorales una encima de otra. En estos peces se denomina "lado ciego" el que tienen en contacto con el fondo. Al ser peces que viven en profundidades muy pequeñas, son muy aptos para criarse en piscifactorías. Son ejemplos de estos el lenguado, el rodaballo y el gallo.


title: Pescado

text: El pescado demersal es aquel que, por oposición al pelágico, viven en las proximidades del fondo. Algunos autores lo llaman nectobentónico. (Nectobentos: organismos bénticos que viven en la proximidad, pero no sobre ni dentro del fondo marino).


title: Pescado

text: Los pueblos andinos prehispánicos supieron utilizar los residuos del pescado (huesos, escamas, aletas, cabezas etc.) como excelentes abonos orgánicos.


title: Pescado

text: La piel del pescado ha sido utilizada por los pueblos aborígenes del litoral siberiano para confeccionar ropas, las espinas de pescado han sido utilizadas por los seres humanos prehistóricos y por los pueblos hasta hace poco llamados "primitivos" (por ejemplo los inuit) para confeccionar artefactos, en especial agujas de coser. La grasa de pescado muchas veces se ha utilizado como una "cola" o pegamento. La piel muy áspera de los escualos ha sido utilizada para confeccionar lijas hasta fechas muy recientes.


title: Pescado

text: En general el pescado es muy nutritivo, pero proporcionalmente menos que la mayoría de los animales terrestres y aviares, aunque ha conspirado contra su mayor consumo al menos un par de factores, la menor saciedad que suelen provocar los pescado en relación con las de aves y de mamíferos, y las mayores dificultades de conservación (la conservación por ahumado y salazón es eficaz pero insume por lo general más gastos energéticos que la conservación de la carne de las aves y otros animales ya que, para el desarrollo de gérmenes patógenos casi siempre la carne de pescado presenta lo que técnicamente se conoce como un mayor punto de actividad acuosa). Por otra parte, como se verá, el salado o la salazón y, más aún, el ahumado, conllevan riesgos para la salud.


title: Pescado

text: Desde fines del merced a los avances de la conservación por frigorífico o con envasado al vacío los problemas de conservación se están superando ampliamente.


title: Pescado

text: En líneas generales, todas las variedades de pescado son ricas en proteínas y minerales esenciales; el pescado de agua salada (el que se pesca en el mar) suele ser excepcionalmente rico en ácidos grasos, en especial ácidos grasos insaturados, omega 3 y minerales como el yodo, cinc, fósforo y selenio. Tales elementos combaten los efectos nocivos del colesterol LDL beneficiando inmediatamente al sistema circulatorio y, así, a toda la salud. Estos elementos incluso refuerzan al sistema inmune contra los carcinomas (por ejemplo existen algunas evidencias al respecto muy notorias en el cartílago de tiburón). El hígado de muchos pescados (por ejemplo el del bacalao) es muy rico en vitamina D.