title: Gélose TSN
text: # Gélose TSN
  
  Le Tryptone sulfite néomycine est un milieu pour la détection et l’énumération de Clostridium perfringens.
  
  ## Composition
  
  | Composant | Qté (g/L) |
  | - | - |
  | Peptone trypsique | 10 |
  | NaCl | 5 |
  | Extrait de viande | 2 |
  | Extrait de levure | 5 |
  | Chlorhydrate de cystéine (rend le milieu très réducteur) | 0,3 |
  | Agar | 15 % |
  
  ## Mode d’action
  
  Le milieu TSN est une gélose sélective, elle exploite le fait que Clostridium perfringens est résistant à la polymyxine, la néomycine (antibiotiques) et qu’il a le pouvoir de réduire les sulfites. La croissance des autres Clostridia sulfito réducteurs est presque totalement inhibée car la flore d’accompagnement est largement supprimée. Ce milieu contient 1 critère de différenciation : le sulfite de sodium dont la réduction est révélée par le fer (précipitation du sulfure de fer), forme une colonie noire. La température d’incubation permet de sélectionner : - à 37 °C → dénombrement des formes végétatives de Cl. perfringens. - à 46 °C → dénombrement de Clostridium perfringens. L’incubation se fait en anaérobiose.
  
  Ensemencement
  
  -se placer en milieu stérile : hotte ou bec Bunsen
  
  -réaliser la dilution nécessaire en eau physiologique ou dans du tampon PBS
  
  -introduire 1 ml de la suspension bactérienne dans une boîte de Petri stérile
  
  -ajouter 15 ml de gélose en surfusion (46 °C)
  
  -laisser la gélose se solidifier
  
  -couler une double couche (10 ml de gélose)
  
  -placer la boîte de Petri dans une jarre hermétiquement fermée contenant un réactif générateur d'une atmosphère anaérobie (acide ascorbique par exemple) et un témoin de cette atmosphère modifiée
  
  -incuber la jarre à 37 ou 46 °C pendant 18 à 24 heures
  
  Les colonies produisant un pigment noir diffusible sont des bactéries anaérobies sulfito réductrices et peut-être Clostridium perfringens.
  
  