હવે આ ચોક્કસ પ્રોટોનનું pKa લગભગ 1 થી 3 છે; શારીરિક pH પર તેનો અર્થ એ છે કે તે તેના જેવું અસ્તિત્વમાં રહેશે નહીં પરંતુ તેના બદલે તેના પર મજબૂત ઋણાત્મક ચાર્જ હશે કારણ કે તે ડિપ્રોટોનેટેડ સ્વરૂપ હશે અને જ્યારે આપણે કહીએ છીએ કે DNA ની કરોડરજ્જુ એ જ  ફોસ્ફોડાયેસ્ટરનો ઋણાત્મક ચાર્જ મજબૂત છે. તે મુખ્યત્વે આ ટ્વિસ્ટને કારણે છે, જો કે ફોસ્ફોડાયેસ્ટર પાસે તે OH છે, જે શારીરિક pH પર તે ડિપ્રોટોનેટેડ પરમાણુ તરીકે અસ્તિત્વ ધરાવે છે.
இப்போது இந்த குறிப்பிட்ட புரோட்டானின் pKa 1 முதல் 3 வரை உள்ளது; உடலியல் pH இல் அது அப்படி இருக்காது, ஆனால் அதற்கு பதிலாக அது ஒரு வலுவான எதிர்மறை ஆற்றலை கொண்டிருக்கும், ஏனெனில் இது ஒரு டிப்ரோடோனேட்டட் வடிவமாக இருக்கப் போகிறது, மேலும் DNAவின் முதுகெலும்பாக இருக்கும் பாஸ்போடையெஸ்டர் ஒரு வலுவான எதிர்மறை ஆற்றலைக் கொண்டிருக்கும்; இதன் காரணமாகவே, பாஸ்போடையெஸ்டரில் OH இருந்தாலும், உடலியல் pH இல், இது ஒரு டிப்ரோடோனேட்டட் மூலக்கூறாக உள்ளது.