Once auxiliary adhesions put the organism in contact with an epithelial cell, T4SS assembly begins. Initially, the proteins which are part of the inner membrane, such as CagE/HPO544 VirB4 and HPO525 VirB11, are assembled 15. They possess ATPase activity which allows translocation of the substrate. An additional protein, VirD4 which is homologous to HPO524, is responsible for delivering the substrate to the T4SS secretion machinery 15. Next, assembly of proteins which will make up the central complex of the T4SS begins.
Una vez el microorganismo entra en contacto con la célula epitelial gracias a adhesinas accesorias comienza el ensamblaje del T4SS, inicialmente con las proteínas que hacen parte de la membrana interna como CagE/HPO544 VirB4 y HPO525 VirB11 15, las cuales poseen actividad ATPasa para permitir la translocación del sustrato, una proteína adicional, HPO524 homóloga a VirD4 es la encargada de entregar el sustrato a la maquinaria de secreción de T4SS 15.