For the immunohistochemistry, the slides were treated for antigen unmasking with Tris-EDTA buffer and were blocked at non-specific sites with 10% bovine serum albumin in Tris-buffered saline for 2h at room temperature. Primary mouse anti-caspase-3 antibodies 1:50 Sigma, mouse anti-CD-95 1:50 Sigma and anti-Fox 3 1:1000 Sigma were applied and the slides incubated for 8h at 4°C. Biotinylated anti-mouse IgG was used as secondary antibody and finally Streptavidin-HRP conjugate Vector, and contrast Harris hematoxylin staining was applied.
Para esta última, las láminas se trataron para el desenmascaramiento de antígenos con buffer Tris-EDTA y se bloquearon sitios inespecíficos con albúmina sérica bovina al 10% en tris buffer salino por 2 h a temperatura ambiente y se aplicaron anticuerpos primarios anti caspasa-3 en ratón 1:50 Sigma, anti CD-95 en ratón 1:50 Sigma y antiFox-3 1:1000 Sigma, con una incubacion por 8 h a 4 °C; como anticuerpo secundario se utilizó anti-IgG de ratón biotinilado, y finalmente el conjugado Streptavidin-HRP Vector. Se hizo coloración de contraste con hematoxilina de Harris.