r e . G E N E T I C   T O X I C I T Y N o   g e n e t i c   t o x i c i t y   s t u d i e s   f o r   i n d i u m   p h o s p h i d e   w e r e f o u n d   i n   t h e   l i t e r a t u r e . S T U D Y   R A T I O N A L E I n d i u m   p h o s p h i d e   w a s   n o m i n a t e d   b y   t h e   N a t i o n a l I n s t i t u t e   o f   E n v i r o n m e n t a l   H e a l t h   S c i e n c e s   f o r   s t u d y b e c a u s e   o f   t h e   p o t e n t i a l   f o r   i n c r e a s e d   u s e   i n   t h e   m i c r o - e l e c t r o n i c s   i n d u s t r y ,   t h e   p o t e n t i a l   f o r   w o r k e r   e x p o s u r e , a n d   t h e   a b s e n c e   o f   c h r o n i c   t o x i c i t y   a n d   c a r c i n o g e n i c i t y d a t a .     I n h a l a t i o n   w a s   c h o s e n   a s   t h e   r o u t e   o f   e x p o s u r e b e c a u s e   h u m a n   e x p o s u r e   t o   i n d i u m   p h o s p h i d e   o c c u r s p r i m a r i l y   b y   t h i s   r o u t e . 2 4 I n d i u m   P h o s p h i d e ,   N T P   T R   4 9 9 2 5 M A T E R I A L S   A N D   M E T H O D S P R O C U R E M E N T A N D   C H A R A C T E R I Z A T I O N O F   I N D I U M   P H O S P H I D E I n d i u m   p h o s p h i d e   w a s   o b t a i n e d   i n   t h r e e   l o t s   f r o m J o h n s o n   M a t t h e y ,   I n c .   ( W a r d   H i l l ,   M A ) .     T h e   s t u d y l a b o r a t o r y   c o m b i n e d   t w o   l o t s   i n t o   a   s i n g l e   l o t   ( l o t B N W - 1 2 9 5 7 - 2 1 )   f o r   u s e   i n   t h e   1 4 - w e e k   s t u d i e s .     T h e t h i r d   l o t   ( l o t   B N W - 1 3 0 4 0 - 1 2 7 )   w a s   c o m b i n e d   w i t h   l o t B N W - 1 2 9 5 7 - 2 1   t o   m a k e   l o t   B N W - 1 2 9 5 7 - 2 8   w h i c h w a s   u s e d   i n   t h e   2 - y e a r   s t u d i e s .     I d e n t i t y ,   p u r i t y ,   a n d s t a b i l i t y   a n a l y s e s   w e r e   c o n d u c t e d   b y   t h e   s t u d y l a b o r a t o r y .     R e p o r t s   o n   a n a l y s e s   p e r f o r m e d   i n   s u p p o r t o f   t h e   i n d i u m   p h o s p h i d e   s t u d i e s   a r e   o n   f i l e   a t   t h e N a t i o n a l   I n s t i t u t e   o f   E n v i r o n m e n t a l   H e a l t h   S c i e n c e s . F o r   l o t   B N W - 1 2 9 5 7 - 2 1 ,   r e s u l t s   o f   g l o w - d i s c h a r g e   m a s s s p e c t r o m e t r i c   a n a l y s e s   p r o v i d e d   b y   t h e   m a n u f a c t u r e r i n d i c a t e d   t h a t   i m p u r i t i e s   t o t a l e d   l e s s   t h a n   1 2 0   p p m   f o r t h e   7 2   e l e m e n t s   a s s a y e d ;   t h e   p r i n c i p a l   i m p u r i t i e s   w e r e a l u m i n u m   ( 3 7   p p m ) ,   s i l i c o n   ( 2 9   p p m ) ,   c h l o r i n e ( 7   p p m ) ,   c a l c i u m   ( 1 6   p p m ) ,   a n d   a r s e n i c   ( 1 2   p p m ) .     F o r l o t   B N W - 1 3 0 4 0 - 1 2 7 ,   r e s u l t s   o f   g l o w - d i s c h a r g e   m a s s s p e c t r o m e t r i c   a n a l y s e s   p r o v i d e d   b y   t h e   m a n u f a c t u r e r i n d i c a t e d   t h a t   i m p u r i t i e s   t o t a l e d   l e s s   t h a n   2   p p m   f o r   t h e 7 2   e l e m e n t s   a s s a y e d .     F o l l o w i n g   m i c r o n i z a t i o n ,   t h e b u l k   m a t e r i a l   w a s   d e s i g n a t e d   l o t   B N W - 1 2 9 5 7 - 2 8   i n t h r e e   b a t c h e s   o v e r   t h e   c o u r s e   o f   t h e   1 4 - w e e k   a n d   2 - y e a r s t u d i e s . L o t   B N W - 1 2 9 5 7 - 2 8 ,   a   p o l y c r y s t a l l i n e   s o l i d ,   w a s   i d e n - t i f i e d   a s   i n d i u m   p h o s p h i d e   b y   X - r a y   d i f f r a c t i o n a n a l y s e s ,   w h i c h   i n d i c a t e d   t h e   p r e s e n c e   o f   i n d i u m   p h o s - p h i d e   a t   g r e a t e r   t h a n   9 9 %   p u r i t y   ( F i g u r e   J 1 ) .     E l e m e n t a l i n d i u m   w a s   d e t e c t e d   a t   a   c o n c e n t r a t i o n   o f   a p p r o x i - m a t e l y   1 %   o r   l e s s .     T h e   p u r i t y   o f   l o t   B N W - 1 2 9 5 7 - 2 8 w a s   d e t e r m i n e d   b y   i n d u c t i v e l y   c o u p l e d   p l a s m a / a t o m i c e m i s s i o n   s p e c t r o s c o p y   ( I C P / A E S ) .     T h e   r e s u l t s   o f I C P / A E S   a n a l y s e s   w e r e   i n   a g r e e m e n t   w i t h   t h e   t h e o r e t i - c a l   v a l u e s .     F o r   t h e   t w o   b a t c h e s   o f   l o t   B N W - 1 2 9 5 7 - 2 8 p r e p a r e d   f o r   u s e   i n   t h e   1 4 - w e e k   s t u d i e s ,   r e s u l t s   o f I C P / A E S   a n a l y s e s   i n d i c a t e d   p u r i t i e s   o f   9 7 . 6 %   ±   0 . 6 % a n d   9 9 . 0 %   ±   0 . 4 %   f o r   i n d i u m   a n d   9 6 . 8 %   ±   0 . 4 %   a n d 9 7 . 7 %   ±   1 . 7 %   f o r   p h o s p h o r u s   r e l a t i v e   t o   t h e   t h e o r e t i c a l v a l u e s .     A r s e n i c ,   s e l e n i u m ,   a n t i m o n y ,   a n d   i r o n   w e r e p r e s e n t   i n   e a c h   b a t c h   a t   c o n c e n t r a t i o n s   g r e a t e r   t h a n 0 . 0 1 % ;   o t h e r   e l e m e n t s   w e r e   p r e s e n t   a t   c o n c e n t r a t i o n s o f   l e s s   t h a n   0 . 0 1 %   o r   w e r e   n o t   d e t e c t e d .     T h e   t o t a l w e i g h t   o f   t r a c e   i m p u r i t i e s   i n   e a c h   b a t c h   w a s   l e s s   t h a n 0 . 2 % .     F o r   t h e   b a t c h   o f   l o t   B N W - 1 2 9 5 7 - 2 8   p r e p a r e d f o r   u s e   i n   t h e   2 - y e a r   s t u d i e s ,   t h e   r e s u l t s   i n d i c a t e d   a p u r i t y   o f   9 7 . 1 %   ±   0 . 3 %   f o r   i n d i u m   a n d   a   9 6 . 9 %   ±   0 . 7 % f o r   p h o s p h o r u s   r e l a t i v e   t o   t h e   t h e o r e t i c a l   v a l u e s . A r s e n i c ,   i r o n ,   a n t i m o n y ,   a n d   s e l e n i u m   w e r e   d e t e c t e d   a t c o n c e n t r a t i o n s   o f   0 . 0 1 %   t o   0 . 0 2 % .     C o n c e n t r a t i o n s   o f o t h e r   e l e m e n t s   w e r e   l e s s   t h a n   0 . 0 1 %   o r   w e r e   b e l o w   t h e l i m i t   o f   d e t e c t i o n .     T h e   t o t a l   w e i g h t   o f   t r a c e   i m p u r i t i e s w a s   l e s s   t h a n   0 . 1 2 % . A c c e l e r a t e d   s t a b i l i t y   s t u d i e s   w e r e   p e r f o r m e d   o n l o t   L 0 8 C 0 7   ( n o t   u s e d   i n   t h e   c u r r e n t   s t u d i e s ) ,   w h i c h   w a s o b t a i n e d   f r o m   J o h n s o n   M a t t h e y ,   I n c .     I n d i u m   p h o s - p h i d e   w a s   f o u n d   t o   b e   s t a b l e   f o r   a t   l e a s t   2   w e e k s   a t t e m p e r a t u r e s   u p   t o   6 0 E   C   w h e n   s t o r e d   u n d e r   a   h e a d - s p a c e   o f   n i t r o g e n   o r   a i r .     T h e   b u l k   c h e m i c a l   w a s   s t o r e d i n   a m b e r   g l a s s   b o t t l e s   w i t h   T e f l o n ® - l i n e d   c a p s   u n d e r   a n i t r o g e n   h e a d s p a c e   a t   r o o m   t e m p e r a t u r e .     S t a b i l i t y   w a s m o n i t o r e d   t h r o u g h o u t   t h e   s t u d i e s   w i t h   I C P / A E S .     N o d e g r a d a t i o n   o f   t h e   b u l k   c h e m i c a l   w a s   d e t e c t e d . T h e r m a l   s t u d i e s   w e r e   c o n d u c t e d   t o   a s s e s s   t h e   s t a b i l i t y o f   m i c r o n i z e d   i n d i u m   p h o s p h i d e   i n   a i r   a n d   i n   n i t r o g e n a t   h i g h e r   t e m p e r a t u r e s   s u c h   a s   t h o s e   g e n e r a t e d   b y   t h e m i l l i n g   p r o c e s s .     U s i n g   d i f f e r e n t i a l   s c a n n i n g   c a l o r i m - e t r y ,   t h e r m a l   b e h a v i o r   w a s   m o n i t o r e d   b e t w e e n   3 0 E   a n d 5 0 0 E   C   w i t h   t e m p e r a t u r e s   i n c r e a s i n g   a t   a   r a t e   o f   5 E   C p e r   m i n u t e ;   i s o t h e r m a l   a n a l y s e s   w e r e   p e r f o r m e d   i n   a i r b y   h e a t i n g   i n d i u m   p h o s p h i d e   t o   2 5 0 E   C   a t   3 2 0 E   C   p e r m i n u t e   a n d   h o l d i n g   a t   2 5 0 E   C   f o r   4   h o u r s .     A   s m a l l e n d o t h e r m i c   r e a c t i o n   ( 0 . 1   J / g )   o c c u r r e d   i n   a i r   a n d n i t r o g e n   a t   a r o u n d   1 5 6 . 6 E   C ,   s u g g e s t i n g   s o m e   d e c o m - p o s i t i o n   o f   i n d i u m   p h o s p h i d e   i n t o   i t s   e l e m e n t s .     A n e x o t h e r m i c   r e a c t i o n   ( 9   J / g )   i n   a i r   o n l y   w a s   o b s e r v e d   a t a r o u n d   3 8 0 E   C   a n d   m a y   h a v e   b e e n   a s s o c i a t e d   w i t h   t h e p r e s e n c e   o f   a n   u n i d e n t i f i e d   i m p u r i t y .     U s i n g   s c a n n i n g t h e r m o g r a v i t y ,   t h e r m a l   b e h a v i o r   w a s   m o n i t o r e d   a s   w i t h d i f f e r e n t i a l   s c a n n i n g   c a l o r i m e t r y ;   i s o t h e r m a l   a n a l y s e s w e r e   p e r f o r m e d   i n   a i r   b y   h e a t i n g   i n d i u m   p h o s p h i d e   t o 2 6 I n d i u m   P h o s p h i d e ,   N T P   T R   4 9 9 2 5 0 E   C   a t   1 6 0 E   C   p e r   m i n u t e   a n d   h o l d i n g   a t   2 5 0 E   C   f o r 2   h o u r s .     N o   m a s s   c h a n g e   w a s   o b s e r v e d   f o r   t h e   e n d o - t h e r m i c   r e a c t i o n   o b s e r v e d   i n   t h e   c a l o r i m e t r i c   a n a l y s i s . T h e   e x o t h e r m i c   r e a c t i o n   t h a t   o c c u r r e d   a t   a p p r o x i m a t e l y 3 8 0 E   C   s h o w e d   a   w e i g h t   g a i n   o f   a p p r o x i m a t e l y   0 . 5 %   a t t e r m i n a t i o n   ( 5 0 0 °   C ) .     N o   s i g n i f i c a n t   r e a c t i o n   w a s o b s e r v e d   f o r   i s o t h e r m a l   a n a l y s i s   a t   2 5 0 E   C . A d d i t i o n a l   s t a b i l i t y   s t u d i e s   w e r e   p e r f o r m e d   b y   D u s t T e c h ,   I n c .   ( A u g u s t a ,   N J ) ,   u s i n g   a   H a r t m a n n   D u s t E x p l o s i o n   A p p a r a t u s   ( U . S .   B u r e a u   o f   M i n e s ,   B r u c e t o n S t a t i o n ,   P A )   a n d   a   G o d b e r t - G r e e n w a l d   f u r n a c e   ( U . S . B u r e a u   o f   M i n e s )   ( B a t t e l l e ,   1 9 9 5 a ) .     R e s i s t i v i t y   w a s m e a s u r e d   w i t h   a   c e l l ,   d e s i g n e d   f o r   p a r t i c u l a t e   m a t e r i a l s , e q u i p p e d   w i t h   a   h i g h - v o l t a g e   p o w e r   s u p p l y   a n d   a n e l e c t r o m e t e r .     T h e   c u r r e n t   p a s s i n g   t h r o u g h   t h e   s t a n d a r d s a m p l e   g e o m e t r y ,   m e a s u r e d   a s   a   f u n c t i o n   o f   a p p l i e d v o l t a g e ,   w a s   u s e d   t o   c a l c u l a t e   v o l u m e   r e s i s t i v i t y . R e s u l t s   o f   a n a l y s e s   i n d i c a t e d   t h a t   i n d i u m   p h o s p h i d e d u s t   i s   c a p a b l e   o f   c a u s i n g   a   s e v e r e   e x p l o s i o n .     U n d e r c o n d i t i o n s   i n   w h i c h   e l e c t r o s t a t i c   c h a r g e s   a r e   g e n e r a t e d , s u c h   a s   m i l l i n g   a n d   p n e u m a t i c   c o n v e y i n g ,   i n d i u m   p h o s - p h i d e   i s   s e n s i t i v e   t o   i g n i t i o n   b y   e l e c t r o s t a t i c   d i s c h a r g e a n d   c a n   g e n e r a t e   p r e s s u r e   a t   a   r a t e   o f   u p   t o   1 0 , 2 0 0   p s i p e r   s e c o n d . A E R O S O L   G E N E R A T I O N A N D   E X P O S U R E   S Y S T E M F o r   t h e   1 4 - w e e k   s t u d i e s ,   t h e   i n d i u m   p h o s p h i d e   a e r o s o l g e n e r a t i o n   a n d   d e l i v e r y   s y s t e m   h a d   f o u r   b a s i c   c o m p o - n e n t s :     a   f l e x i b l e   b r u s h   d u s t   f e e d   m e c h a n i s m   d e v e l o p e d a t   t h e   s t u d y   l a b o r a t o r y ,   a   T r o s t   M o d e l   G E M - T   a i r - i m p a c t   m i l l   ( G a r l o c k ,   I n c . ,   N e w t o n ,   P A ) ,   a n   a e r o s o l c h a r g e   n e u t r a l i z e r ,   a n d   a   s t a i n l e s s - s t e e l   a e r o s o l   d i s t r i - b u t i o n   s y s t e m   ( F i g u r e   J 2 ) .     T h e   g e n e r a t i o n   a n d   d i s t r i - b u t i o n   s y s t e m   w a s   e l e c t r i c a l l y   g r o u n d e d   a n d   b o n d e d a n d   w a s   m o n i t o r e d   c o n t i n u o u s l y   f o r   p r o p e r   g r o u n d i n g ; t h e   s y s t e m   w a s   d e s i g n e d   t o   s h u t   d o w n   a u t o m a t i c a l l y   i f a   g r o u n d   f a u l t   w a s   d e t e c t e d .     T h e   f l e x i b l e - b r u s h   d u s t f e e d   m e c h a n i s m   ( F i g u r e   J 3 )   e m p l o y e d   a   h o p p e r   i n t o w h i c h   t h e   d r y   p o w d e r   w a s   p o u r e d .     T h e   h o p p e r   w a s r e l o a d e d   w i t h   a d d i t i o n a l   i n d i u m   p h o s p h i d e   a t   r e g u l a r i n t e r v a l s   t h r o u g h o u t   e a c h   d a y ’ s   e x p o s u r e   p e r i o d . I n d i u m   p h o s p h i d e   w a s   s t o r e d   i n   a   n i t r o g e n - p u r g e d d e s i c c a t o r   t o   a c h i e v e   m o r e   u n i f o r m   f l o w   i n   t h e g e n e r a t o r . T h e   a e r o s o l   g e n e r a t i o n   a n d   d e l i v e r y   s y s t e m   f o r   t h e 2 - y e a r   s t u d i e s   i s   s h o w n   i n   F i g u r e   J 4 .     T h e   a e r o s o l g e n e r a t o r   c o n s i s t e d   o f   a   d r u m ,   b o d y ,   a n d   c a p ( F i g u r e   J 5 ) .     T h e   d r u m   r o t a t e d   a t   6 0 E   i n c r e m e n t s ,   w i t h s e t   t i m e   i n t e r v a l s   b e t w e e n   d r u m   r o t a t i o n s .     R o t a t i o n   o f t h e   d r u m   w a s   c o n t r o l l e d   b y   a   c o m p r e s s e d - a i r - d r i v e n v a l v e   d r i v e r   ( V I C I   V a l c o   I n s t r u m e n t   C o . ,   H o u s t o n , T X ) .     A s   t h e   d r u m   r o t a t e d ,   i n d i u m   p h o s p h i d e   f i l l e d   s i x m e t e r i n g   p o r t s   i n   a   d i s k   a t   t h e   b o t t o m   o f   t h e   d r u m   a n d w a s   h e l d   i n   e a c h   p o r t   b y   a   s t a i n l e s s - s t e e l   s c r e e n .     T h e m e t e r i n g   p o r t s   s e q u e n t i a l l y   a l i g n e d   w i t h   a   n i t r o g e n   i n l e t i n   t h e   b o d y   a n d   d i s p e r s e d   i n d i u m   p h o s p h i d e   w h e n   a n i t r o g e n   s o l e n o i d   v a l v e   w a s   o p e n e d .     O u t p u t   o f   t h e g e n e r a t o r   w a s   r e g u l a t e d   b y   a d j u s t i n g   t h e   r o t a t i o n c a d e n c e . I n   a l l   s t u d i e s ,   t h e   a e r o s o l   l e a v i n g   t h e   g e n e r a t o r   p a s s e d t h r o u g h   a   c o r o n a   d i s c h a r g e   a i r - i o n i z i n g   n e u t r a l i z e r ( C o n v e y o s t a t   S t a t i c   N e u t r a l i z i n g   S y s t e m ,   S i m c o ,   I n c . , H a t f i e l d ,   P A )   i n t o   t h e   d i s t r i b u t i o n   l i n e .     A t   e a c h   c h a m - b e r   l o c a t i o n ,   a   p n e u m a t i c   i n j e c t o r   d e v e l o p e d   b y   t h e s t u d y   l a b o r a t o r y   d r e w   a e r o s o l   f r o m   t h e   d i s t r i b u t i o n   l i n e i n t o   t h e   c h a m b e r   i n l e t ,   w h e r e   t h e   a e r o s o l   w a s   f u r t h e r d i l u t e d   w i t h   H E P A - f i l t e r e d   a i r   t o   t h e   a p p r o p r i a t e c o n c e n t r a t i o n .     T h e   f l o w   r a t e   t h r o u g h   t h e   d i s t r i b u t i o n l i n e   w a s   c o n t r o l l e d   b y   v a c u u m   p u m p s   ( A i r - V a c E n g i n e e r i n g   C o m p a n y ,   I n c . ,   M i l f o r d ,   C T ) ;   p r e s s u r e w a s   m o n i t o r e d   b y   p h o t o h e l i c   d i f f e r e n t i a l   p r e s s u r e g a u g e s   ( D w y e r   I n s t r u m e n t s ,   I n c . ,   M i c h i g a n   C i t y ,   I N ) . T h e   s t u d y   l a b o r a t o r y   d e s i g n e d   t h e   s t a i n l e s s - s t e e l   i n h a l a - t i o n   e x p o s u r e   c h a m b e r s   ( H a r f o r d   S y s t e m s   D i v i s i o n   o f L a b   P r o d u c t s ,   I n c . ,   A b e r d e e n ,   M D )   s o   t h a t   u n i f o r m a e r o s o l   c o n c e n t r a t i o n s   c o u l d   b e   m a i n t a i n e d   t h r o u g h o u t t h e   c h a m b e r s   w h e n   c a t c h   p a n s   w e r e   i n   p l a c e .     T h e   t o t a l a c t i v e   m i x i n g   v o l u m e   o f   e a c h   c h a m b e r   w a s   1 . 7   m 3 . A E R O S O L   C O N C E N T R A T I O N M O N I T O R I N G S u m m a r i e s   o f   c h a m b e r   a e r o s o l   c o n c e n t r a t i o n s   o f i n d i u m   p h o s p h i d e   a r e   g i v e n   i n   T a b l e s   J 1   a n d   J 2 . C h a m b e r   a e r o s o l   c o n c e n t r a t i o n s   w e r e   m o n i t o r e d   w i t h r e a l - t i m e   a e r o s o l   m o n i t o r s   ( R A M s )   ( M o d e l   R a m - 1 ; M I E ,   I n c . ,   B e d f o r d ,   M A )   t h a t   u s e d   a   p u l s e d - l i g h t - e m i t t i n g   d i o d e   i n   c o m b i n a t i o n   w i t h   a   s i l i c o n   d e t e c t o r   t o s e n s e   l i g h t   s c a t t e r e d   o v e r   a   f o r w a r d   a n g u l a r   r a n g e   o f 4 5 E   t o   9 5 E   b y   p a r t i c l e s   t r a v e r s i n g   t h e   s e n s i n g   v o l u m e . T h e   i n s t r u m e n t   r e s p o n d s   t o   p a r t i c l e s   0 . 1   t o   2 0   µ m i n   d i a m e t e r ;   t h e   g e o m e t r i c   d i a m e t e r   o f   i n d i u m p h o s p h i d e   a e r o s o l   a p p r o a c h e d   t h e   m i n i m u m   o f   t h i s r a n g e .     T h e   s a m p l i n g   s y s t e m   c o n s i s t e d   o f   a   v a l v e   w h i c h I n d i u m   P h o s p h i d e ,   N T P   T R   4 9 9 2 7 m u l t i p l e x e d   e a c h   R A M   t o   t w o   o r   t h r e e   e x p o s u r e c h a m b e r s   a n d   e i t h e r   t h e   c o n t r o l   c h a m b e r ,   t h e   r o o m ,   o r a   H E P A   f i l t e r .     T h e   m o n i t o r s   w e r e   c o n n e c t e d   t o   t h e c h a m b e r s   w i t h   s a m p l e   l i n e s   d e s i g n e d   t o   m i n i m i z e a e r o s o l   p a r t i c l e   l o s s   t h r o u g h   s e t t l i n g   o r   i m p a c t i o n . C H A M B E R   A T M O S P H E R E C H A R A C T E R I Z A T I O N T h e   p a r t i c l e   s i z e   d i s t r i b u t i o n   i n   e a c h   c h a m b e r   w a s d e t e r m i n e d   d u r i n g   t h e   p r e s t u d y   t e s t i n g ,   d u r i n g   t h e   f i r s t w e e k   o f   t h e   s t u d i e s ,   a n d   m o n t h l y   t h e r e a f t e r   u s i n g   a M e r c e r - s t y l e   s e v e n - s t a g e   i m p a c t o r   ( I n - T o x   P r o d u c t s , A l b u q u e r q u e ,   N M ) .     T h e   s t a g e s   ( g l a s s   c o v e r s l i p s   l i g h t l y s p r a y e d   w i t h   s i l i c o n e )   w e r e   a n a l y z e d   b y   I C P / A E S ( 1 4 - w e e k   s t u d i e s )   o r   i n d u c t i v e l y   c o u p l e d   p l a s m a / m a s s s p e c t r o s c o p y   ( I C P / M S )   ( 2 - y e a r   s t u d i e s ) .     T h e   r e l a t i v e m a s s   c o l l e c t e d   o n   e a c h   s t a g e   w a s   a n a l y z e d   b y   p r o b i t a n a l y s i s .     T h e   m a s s   m e d i a n   a e r o d y n a m i c   p a r t i c l e   d i a m - e t e r   a n d   t h e   g e o m e t r i c   s t a n d a r d   d e v i a t i o n   o f   e a c h   s e t   o f s a m p l e s   w e r e   e s t i m a t e d   ( T a b l e s   J 3 ,   J 4 ,   a n d   J 5 ) . B u i l d u p   a n d   d e c a y   r a t e s   f o r   c h a m b e r   a e r o s o l   c o n c e n - t r a t i o n s   w e r e   d e t e r m i n e d   w i t h   a n d   w i t h o u t   a n i m a l s p r e s e n t   i n   t h e   c h a m b e r s .     A t   a   c h a m b e r   a i r f l o w   r a t e   o f 1 5   a i r   c h a n g e s   p e r   h o u r ,   t h e   t h e o r e t i c a l   v a l u e   f o r   t h e t i m e   t o   a c h i e v e   9 0 %   o f   t h e   t a r g e t   c o n c e n t r a t i o n   a f t e r t h e   b e g i n n i n g   o f   a e r o s o l   g e n e r a t i o n   ( T 9 0 )   a n d   t h e   t i m e f o r   t h e   c h a m b e r   c o n c e n t r a t i o n   t o   d e c a y   t o   1 0 %   o f   t h e t a r g e t   c o n c e n t r a t i o n   a f t e r   a e r o s o l   g e n e r a t i o n   w a s   t e r m i - n a t e d   ( T 1 0 )   w a s   a p p r o x i m a t e l y   1 2 . 5   m i n u t e s .     A   T 9 0 v a l u e   o f   1 2   m i n u t e s   w a s   s e l e c t e d   f o r   a l l   s t u d i e s . U n i f o r m i t y   o f   a e r o s o l   c o n c e n t r a t i o n   i n   t h e   1 4 - w e e k s t u d i e s   w a s   e v a l u a t e d   d u r i n g   p r e s t u d y   t e s t i n g   w i t h o u t a n i m a l s   p r e s e n t   a n d   o n c e   d u r i n g   t h e   s t u d i e s   w i t h   a n i - m a l s   p r e s e n t   i n   e x p o s u r e   c h a m b e r s .     D u r i n g   t h e   2 - y e a r s t u d i e s ,   u n i f o r m i t y   w a s   e v a l u a t e d   e v e r y   2   t o   4   m o n t h s . C h a m b e r   c o n c e n t r a t i o n   u n i f o r m i t y   w a s   a c c e p t a b l e t h r o u g h o u t   t h e   s t u d i e s .     T h e   p e r s i s t e n c e   o f   i n d i u m p h o s p h i d e   a e r o s o l   i n   t h e   e x p o s u r e   c h a m b e r s   w a s   m o n i - t o r e d   o v e r n i g h t   a f t e r   a e r o s o l   d e l i v e r y   c e a s e d .     T h e   a v e r - a g e   i n d i u m   p h o s p h i d e   c o n c e n t r a t i o n   d e c a y e d   t o   1 %   o f t a r g e t   c o n c e n t r a t i o n   w i t h i n   a p p r o x i m a t e l y   2 0   ( 1 4 - w e e k s t u d i e s )   o r   2 1   m i n u t e s   ( 2 - y e a r   s t u d i e s ) . T h e   s t a b i l i t y   o f   i n d i u m   p h o s p h i d e   i n   t h e   e x p o s u r e s y s t e m   w a s   a n a l y z e d   w i t h   X R D   a n d   I C P / A E S .     R e s u l t s w e r e   g e n e r a l l y   c o n s i s t e n t   w i t h   t h o s e   e x p e c t e d   f o r i n d i u m   p h o s p h i d e . 1 4 - W E E K   S T U D I E S T h e   1 4 - w e e k   s t u d i e s   w e r e   c o n d u c t e d   t o   e v a l u a t e   t h e c u m u l a t i v e   t o x i c   e f f e c t s   o f   r e p e a t e d   e x p o s u r e   t o   i n d i u m p h o s p h i d e   a n d   t o   d e t e r m i n e   t h e   a p p r o p r i a t e   e x p o s u r e c o n c e n t r a t i o n s   t o   b e   u s e d   i n   t h e   2 - y e a r   s t u d i e s . M a l e   a n d   f e m a l e   F 3 4 4 / N   r a t s   a n d   B 6 C 3 F 1   m i c e   w e r e o b t a i n e d   f r o m   T a c o n i c   F a r m s   ( G e r m a n t o w n ,   N Y ) .     O n r e c e i p t ,   t h e   r a t s   a n d   m i c e   w e r e   a p p r o x i m a t e l y   4   w e e k s o l d .     A n i m a l s   w e r e   q u a r a n t i n e d   f o r   1 2   t o   1 4   d a y s   a n d w e r e   a p p r o x i m a t e l y   6   w e e k s   o l d   o n   t h e   f i r s t   d a y   o f   t h e s t u d i e s .     B e f o r e   t h e   s t u d i e s   b e g a n ,   f i v e   m a l e   a n d   f i v e f e m a l e   r a t s   a n d   m i c e   w e r e   r a n d o m l y   s e l e c t e d   f o r   p a r a - s i t e   e v a l u a t i o n   a n d   g r o s s   o b s e r v a t i o n   f o r   e v i d e n c e   o f d i s e a s e .     A t   t h e   e n d   o f   t h e   s t u d i e s ,   s e r o l o g i c   a n a l y s e s w e r e   p e r f o r m e d   o n   f i v e   m a l e   a n d   f i v e   f e m a l e   c o n t r o l r a t s   a n d   m i c e   u s i n g   t h e   p r o t o c o l s   o f   t h e   N T P   S e n t i n e l A n i m a l   P r o g r a m   ( A p p e n d i x   L ) . G r o u p s   o f   1 0   m a l e   a n d   1 0   f e m a l e   r a t s   a n d   m i c e   w e r e e x p o s e d   t o   p a r t i c u l a t e   a e r o s o l s   o f   i n d i u m   p h o s p h i d e   a t c o n c e n t r a t i o n s   o f   0 ,   1 ,   3 ,   1 0 ,   3 0 ,   o r   1 0 0   m g / m 3 ,   6   h o u r s p l u s   T 9 0   ( 1 2   m i n u t e s )   p e r   d a y ,   5   d a y s   p e r   w e e k ( w e e k s   1   t h r o u g h   4   a n d   w e e k s   1 0   t h r o u g h   1 4 )   o r   7   d a y s p e r   w e e k   ( w e e k s   5   t h r o u g h   9 )   d u r i n g   t h e   c o n c u r r e n t t e r a t o l o g y   s t u d y .     C l i n i c a l   p a t h o l o g y   s t u d y   g r o u p s   o f 1 0   m a l e   a n d   1 0   f e m a l e   r a t s   w e r e   e x p o s e d   t o   t h e   s a m e c o n c e n t r a t i o n s   f o r   1 4   w e e k s   f o r   c l i n i c a l   p a t h o l o g y a n a l y s e s   a n d   p o s t e x p o s u r e   t i s s u e   b u r d e n   a n a l y s e s . G r o u p s   o f   1 5   m a l e   r a t s   d e s i g n a t e d   f o r   t i s s u e   b u r d e n a n a l y s e s   a n d   f i v e   m a l e   r a t s   d e s i g n a t e d   f o r   p o s t e x p o s u r e t i s s u e   b u r d e n   a n a l y s e s   w e r e   e x p o s e d   t o   t h e   s a m e c o n c e n t r a t i o n s   f o r   1 4   w e e k s .     B e g i n n i n g   t h e   f i n a l   w e e k o f   t h e   s t u d i e s ,   a d d i t i o n a l   g r o u p s   o f   1 5   p r e v i o u s l y u n e x p o s e d   m a l e   r a t s   w e r e   e x p o s e d   t o   t h e   s a m e   c o n c e n - t r a t i o n s   f o r   5   d a y s   f o r   a   p o s t e x p o s u r e   l u n g   b u r d e n s t u d y .     T h e s e   a n i m a l s   w e r e   a g e   m a t c h e d   t o   t h e   c o r e s t u d y   a n i m a l s .     F e e d   w a s   a v a i l a b l e   a d   l i b i t u m   e x c e p t d u r i n g   e x p o s u r e   a n d   u r i n e   c o l l e c t i o n   p e r i o d s ;   w a t e r w a s   a v a i l a b l e   a d   l i b i t u m   e x c e p t   d u r i n g   u r i n e   c o l l e c t i o n p e r i o d s .     R a t s   a n d   m i c e   w e r e   h o u s e d   i n d i v i d u a l l y .     T h e a n i m a l s   w e r e   w e i g h e d   a n d   c l i n i c a l   f i n d i n g s   f o r   m i c e w e r e   r e c o r d e d   i n i t i a l l y ,   w e e k l y ,   a n d   a t   t h e   e n d   o f   t h e s t u d i e s ;   c l i n i c a l   f i n d i n g s   f o r   r a t s   w e r e   r e c o r d e d   a t   t h e e n d   o f   w e e k   1 ,   w e e k l y ,   a n d   a t   t h e   e n d   o f   t h e   s t u d y . D e t a i l s   o f   t h e   s t u d y   d e s i g n   a n d   a n i m a l   m a i n t e n a n c e   a r e s u m m a r i z e d   i n   T a b l e   2 . 2 8 I n d i u m   P h o s p h i d e ,   N T P   T R   4 9 9 B l o o d   w a s   c o l l e c t e d   f o r   h e m a t o l o g y   a n d   c l i n i c a l c h e m i s t r y   d e t e r m i n a t i o n s   f r o m   c l i n i c a l   p a t h o l o g y   s t u d y r a t s   o n   d a y s   3   a n d   2 3   a n d   f r o m   c o r e   s t u d y   r a t s   a n d   m i c e ( h e m a t o l o g y   o n l y )   a t   s t u d y   t e r m i n a t i o n .     A t   a l l   t i m e p o i n t s ,   t h e   a n i m a l s   w e r e   a n e s t h e t i z e d   w i t h   a   7 0 % C O 2 / a i r   m i x t u r e   a n d   b l o o d   w a s   c o l l e c t e d   f r o m   t h e r e t r o o r b i t a l   s i n u s .     C l i n i c a l   p a t h o l o g y   s t u d y   f e m a l e   r a t s w e r e   d i s c a r d e d   f o l l o w i n g   t h e   d a y   2 3   b l o o d   c o l l e c t i o n . B l o o d   f o r   h e m a t o l o g y   d e t e r m i n a t i o n s   w a s   p l a c e d   i n t u b e s   c o n t a i n i n g   p o t a s s i u m   E D T A   a s   t h e   a n t i c o a g u l a n t . E r y t h r o c y t e ,   l e u k o c y t e   a n d   p l a t e l e t   c o u n t s ,   h e m o g l o b i n c o n c e n t r a t i o n ,   a u t o m a t e d   h e m a t o c r i t ,   m e a n   c e l l   v o l - u m e ,   m e a n   c e l l   h e m o g l o b i n ,   a n d   m e a n   c e l l   h e m o g l o b i n c o n c e n t r a t i o n   w e r e   d e t e r m i n e d   u s i n g   a   R o c h e   C o b a s H e l i o s   a n a l y z e r   ( R o c h e   D i a g n o s t i c s ,   B r a n c h b u r g ,   N J ) . M a n u a l   h e m a t o c r i t   d e t e r m i n a t i o n s   w e r e   p e r f o r m e d u s i n g   a   D a m o n / I E C   M B   m i c r o c e n t r i f u g e   a n d   a   D a m o n I E C   c a p i l l a r y   r e a d e r   ( I n t e r n a t i o n a l   E q u i p m e n t C o m p a n y ,   N e e d h a m   H e i g h t s ,   M A ) .     L e u k o c y t e   d i f f e r - e n t i a l   a n d   n u c l e a t e d   e r y t h r o c y t e   c o u n t s   w e r e   d e t e r - m i n e d   b y   l i g h t   m i c r o s c o p i c   e x a m i n a t i o n   o f   b l o o d   f i l m s s t a i n e d   w i t h   W r i g h t - G i e m s a   i n   a   W e s c o r   7 1 0 0   a e r o - s p r a y   s t a i n e r   ( W e s c o r ,   I n c . ,   L o g a n ,   V T ) .     R e t i c u l o c y t e s w e r e   s t a i n e d   w i t h   n e w   m e t h y l e n e   b l u e   a n d   e n u m e r a t e d u s i n g   t h e   M i l l e r   d i s c   m e t h o d   ( B r e c h e r   a n d S c h n e i d e r m a n ,   1 9 5 0 ) .     B l o o d   f o r   s e r u m   c h e m i s t r y a n a l y s e s   w a s   p l a c e d   i n   t u b e s   w i t h o u t   a n t i c o a g u l a n t , a l l o w e d   t o   c l o t   a t   r o o m   t e m p e r a t u r e ,   c e n t r i f u g e d ,   a n d t h e   s e r a   w e r e   s e p a r a t e d .     S e r u m   c h e m i s t r y   p a r a m e t e r s w e r e   d e t e r m i n e d   u s i n g   R o c h e   C o b a s   F a r a   m e t h o d - o l o g i e s   ( R o c h e   D i a g n o s t i c s ) .     H e m a t o l o g y   a n d   s e r u m c h e m i s t r y   p a r a m e t e r s   e v a l u a t e d   a r e   l i s t e d   i n   T a b l e   2 . U r i n e   w a s   c o l l e c t e d   f r o m   c o r e   s t u d y   m a l e   r a t s   o n d a y   3 1 .     R a t s   w e r e   p l a c e d   i n   m e t a b o l i s m   c a g e s   f o r 1 6   h o u r s .     A f t e r   4   h o u r s ,   c o l l e c t i o n   v i a l s   w e r e   r e p l a c e d a n d   u r i n e   w a s   e x a m i n e d   b y   d i p s t i c k   a n d   m i c r o s c o p i c a n a l y s e s .     U r i n e   c h e m i s t r y   p a r a m e t e r s   w e r e   e v a l u a t e d u s i n g   R o c h e   C o b a s   F a r a   m e t h o d o l o g i e s   ( R o c h e D i a g n o s t i c s ) ;   v a r i a b l e s   a r e   l i s t e d   i n   T a b l e   2 .   R a t s   d e s i g n a t e d   f o r   t i s s u e   b u r d e n   s t u d y   w e r e   e v a l u a t e d t o   d e t e r m i n e   t h e   e x t e n t   o f   d i s t r i b u t i o n   o f   i n d i u m   i n b l o o d ,   l u n g s ,   s e r u m ,   a n d   t e s t e s   a t   f i v e   t i m e   p o i n t s d u r i n g   t h e   e x p o s u r e   p e r i o d .     T w o   o r   t h r e e   m a l e s   p e r g r o u p   w e r e   e v a l u a t e d   o n   d a y   4 ,   2 4 ,   4 5 ,   7 3 ,   o r   9 6 .     R a t s d e s i g n a t e d   f o r   t h e   p o s t e x p o s u r e   t i s s u e   b u r d e n   s t u d y ( w h i c h   i n c l u d e d   1 0   m a l e   r a t s   f r o m   t h e   c l i n i c a l p a t h o l o g y   s t u d y   g r o u p )   w e r e   e x a m i n e d   a t   f o u r   t i m e p o i n t s   a f t e r   e x p o s u r e   t e r m i n a t i o n   t o   e v a l u a t e   t h e   e l i m - i n a t i o n   o f   i n d i u m   f r o m   b l o o d ,   l u n g s ,   s e r u m ,   a n d   t e s t e s . T h r e e   m a l e   r a t s   p e r   g r o u p   w e r e   e v a l u a t e d   1 4 ,   2 8 ,   5 6 ,   o r 1 1 2   d a y s   a f t e r   e x p o s u r e   t e r m i n a t i o n ,   e x c e p t   a l l   s u r v i v - i n g   m a l e   r a t s   e x p o s e d   t o   1 0 0   m g / m 3   w e r e   e v a l u a t e d   o n p o s t e x p o s u r e   d a y   1 4 .     R a t s   d e s i g n a t e d   f o r   t h e   p o s t - e x p o s u r e   l u n g   b u r d e n   s t u d y   i n   a g e - m a t c h e d   a n i m a l s w e r e   e x p o s e d   t o   i n d i u m   p h o s p h i d e   f o r   5   c o n s e c u t i v e d a y s   b e g i n n i n g   t h e   f i n a l   w e e k   o f   t h e   1 4 - w e e k   s t u d y . L u n g s   f r o m   t h r e e   m a l e s   p e r   e x p o s u r e   g r o u p   w e r e   e v a l - u a t e d   o n   e x p o s u r e   d a y   5   a n d   1 4 ,   2 8 ,   5 6 ,   o r   1 1 2   d a y s a f t e r   e x p o s u r e   t e r m i n a t i o n .     A n i m a l s   a t   e a c h   t i m e   p o i n t w e r e   a n a e s t h e t i z e d   w i t h   s o d i u m   p e n t o b a r b i t a l .     B l o o d w a s   d r a w n   b y   c a r d i a c   p u n c t u r e   a n d   d i v i d e d   i n t o   a   t u b e c o n t a i n i n g   E D T A   a s   a n   a n t i c o a g u l a n t   a n d   a   s e r u m c o l l e c t i o n   t u b e   w i t h o u t   a n t i c o a g u l a n t .     T h e   t e s t e s   a n d l u n g s   w e r e   r e m o v e d   a n d   w e i g h e d .     I n d i u m   i n   l u n g d i g e s t s   w a s   a n a l y z e d   u s i n g   I C P / A E S   ( M i n i t o r c h   M o d e l 3 4 1 0 ,   A p p l i e d   R e s e a r c h   L a b o r a t o r i e s ,   I n c . ,   V a l e n c i a , C A ) .     I n d i u m   i n   b l o o d ,   s e r u m ,   a n d   t e s t e s   d i g e s t s   w a s m e a s u r e d   b y   I C P / M S   ( P l a s m a Q u a d ,   V G   E l e m e n t a l , W i n s f o r d ,   C h e s h i r e ,   U K )   a n d   a n   a u t o s a m p l e r   ( G i l s o n M o d e l   2 2 2 ,   G i l s o n   M e d i c a l   E l e c t r o n i c s ,   M i d d l e t o n , M I ) .     E q u a t i o n s   f o r   c a l c u l a t i o n   o f   l u n g   d e p o s i t i o n   a n d c l e a r a n c e   p a r a m e t e r s   a r e   i n c l u d e d   i n   A p p e n d i x   H . A t   t h e   e n d   o f   t h e   1 4 - w e e k   s t u d i e s ,   s a m p l e s   w e r e   c o l - l e c t e d   f o r   s p e r m   m o t i l i t y   a n d   v a g i n a l   c y t o l o g y   e v a l u a - t i o n s   o n   r a t s   a n d   m i c e   e x p o s e d   t o   0 ,   3 ,   1 0 ,   a n d 3 0   m g / m 3 .     T h e   p a r a m e t e r s   e v a l u a t e d   a r e   l i s t e d   i n T a b l e   2 .     M e t h o d s   u s e d   w e r e   t h o s e   d e s c r i b e d   i n   t h e N T P ’ s   s p e r m   m o r p h o l o g y   a n d   v a g i n a l   c y t o l o g y   e v a l u a - t i o n s   p r o t o c o l   ( N T P ,   1 9 8 7 ) .     F o r   1 2   c o n s e c u t i v e   d a y s p r i o r   t o   s c h e d u l e d   t e r m i n a l   s a c r i f i c e ,   t h e   v a g i n a l   v a u l t s o f   t h e   f e m a l e s   w e r e   m o i s t e n e d   w i t h   s a l i n e ,   i f   n e c e s s a r y , a n d   s a m p l e s   o f   v a g i n a l   f l u i d   a n d   c e l l s   w e r e   s t a i n e d . R e l a t i v e   n u m b e r s   o f   l e u k o c y t e s ,   n u c l e a t e d   e p i t h e l i a l c e l l s ,   a n d   l a r g e   s q u a m o u s   e p i t h e l i a l   c e l l s   w e r e   d e t e r - m i n e d   a n d   u s e d   t o   a s c e r t a i n   e s t r o u s   c y c l e   s t a g e   ( i . e . , d i e s t r u s ,   p r o e s t r u s ,   e s t r u s ,   a n d   m e t e s t r u s ) .     M a l e a n i m a l s   w e r e   e v a l u a t e d   f o r   s p e r m   c o u n t   a n d   m o t i l i t y . T h e   l e f t   t e s t i s   a n d   l e f t   e p i d i d y m i s   w e r e   i s o l a t e d   a n d w e i g h e d .     T h e   t a i l   o f   t h e   e p i d i d y m i s   ( c a u d a   e p i d i d y m i s ) w a s   t h e n   r e m o v e d   f r o m   t h e   e p i d i d y m a l   b o d y   ( c o r p u s e p i d i d y m i s )   a n d   w e i g h e d .     T e s t   y o l k   ( r a t s )   o r   m o d i f i e d T y r o d e ’ s   b u f f e r   ( m i c e )   w a s   a p p l i e d   t o   s l i d e s   a n d   a s m a l l   i n c i s i o n   w a s   m a d e   a t   t h e   d i s t a l   b o r d e r   o f   t h e c a u d a   e p i d i d y m i s .     T h e   s p e r m   e f f l u x i n g   f r o m   t h e   i n c i - s i o n   w e r e   d i s p e r s e d   i n   t h e   b u f f e r   o n   t h e   s l i d e s ,   a n d   t h e n u m b e r s   o f   m o t i l e   a n d   n o n m o t i l e   s p e r m a t o z o a   w e r e I n d i u m   P h o s p h i d e ,   N T P   T R   4 9 9 2 9 c o u n t e d   f o r   f i v e   f i e l d s   p e r   s l i d e   b y   t w o   o b s e r v e r s . F o l l o w i n g   c o m p l e t i o n   o f   s p e r m   m o t i l i t y   e s t i m a t e s ,   e a c h l e f t   c a u d a   e p i d i d y m i s   w a s   p l a c e d   i n   b u f f e r e d   s a l i n e s o l u t i o n .     C a u d a e   w e r e   f i n e l y   m i n c e d ,   a n d   t h e   t i s s u e w a s   i n c u b a t e d   i n   t h e   s a l i n e   s o l u t i o n   a n d   t h e n   h e a t f i x e d   a t   6 5 E   C .     S p e r m   d e n s i t y   w a s   t h e n   d e t e r m i n e d m i c r o s c o p i c a l l y   w i t h   t h e   a i d   o f   a   h e m a c y t o m e t e r .     T o q u a n t i f y   s p e r m a t o g e n e s i s ,   t h e   t e s t i c u l a r   s p e r m a t i d   h e a d c o u n t   w a s   d e t e r m i n e d   b y   r e m o v i n g   t h e   t u n i c a   a l b u g i n e a a n d   h o m o g e n i z i n g   t h e   l e f t   t e s t i s   i n   p h o s p h a t e - b u f f e r e d s a l i n e   c o n t a i n i n g   1 0 %   d i m e t h y l   s u l f o x i d e .     H o m o - g e n i z a t i o n - r e s i s t a n t   s p e r m a t i d   n u c l e i   w e r e   c o u n t e d   w i t h a   h e m a c y t o m e t e r . N e c r o p s i e s   w e r e   p e r f o r m e d   o n   a l l   s u r v i v i n g   c o r e   s t u d y a n i m a l s .     T h e   h e a r t ,   r i g h t   k i d n e y ,   l i v e r ,   l u n g ,   r i g h t t e s t i s ,   a n d   t h y m u s   w e r e   w e i g h e d .     T i s s u e s   f o r   m i c r o - s c o p i c   e x a m i n a t i o n   w e r e   f i x e d   a n d   p r e s e r v e d   i n   1 0 % n e u t r a l   b u f f e r e d   f o r m a l i n ,   p r o c e s s e d   a n d   t r i m m e d , e m b e d d e d   i n   p a r a f f i n ,   s e c t i o n e d   t o   a   t h i c k n e s s   o f   4   t o 6   µ m ,   a n d   s t a i n e d   w i t h   h e m a t o x y l i n   a n d   e o s i n .     A   c o m - p l e t e   h i s t o p a t h o l o g i c   e x a m i n a t i o n   w a s   p e r f o r m e d   o n   0 a n d   1 0 0   m g / m 3   r a t s   a n d   m i c e ,   o n   3 0   m g / m 3   m i c e ,   a n d o n   t a r g e t   o r g a n s   f r o m   a l l   c o r e   s t u d y   r a t s   a n d   m i c e . T a b l e   2   l i s t s   t h e   t i s s u e s   a n d   o r g a n s   r o u t i n e l y   e x a m i n e d . 2 - Y E A R   S T U D I E S S t u d y   D e s i g n G r o u p s   o f   6 0   m a l e   a n d   6 0   f e m a l e   r a t s   a n d   m i c e   w e r e e x p o s e d   t o   p a r t i c u l a t e   a e r o s o l s   o f   i n d i u m   p h o s p h i d e   a t c o n c e n t r a t i o n s   o f   0 ,   0 . 0 3 ,   0 . 1 ,   o r   0 . 3   m g / m 3 ,   6   h o u r s p l u s   T 9 0   ( 1 2   m i n u t e s )   p e r   d a y ,   5   d a y s   p e r   w e e k   f o r 2 2   w e e k s   ( r a t s )   a n d   2 1   w e e k s   ( m i c e )   ( 0 . 1   a n d 0 . 3   m g / m 3   g r o u p s )   o r   1 0 5   w e e k s   ( 0   a n d   0 . 0 3   m g / m 3 g r o u p s ) .     A n i m a l s   i n   t h e   0 . 1   a n d   0 . 3   m g / m 3   g r o u p s w e r e   m a i n t a i n e d   o n   f i l t e r e d   a i r   f r o m   e x p o s u r e t e r m i n a t i o n   u n t i l   t h e   e n d   o f   t h e   s t u d i e s .     M a l e   a n d f e m a l e   r a t s   a n d   m i c e   ( 1 0   p e r   g r o u p )   w e r e   r a n d o m l y s e l e c t e d   a n d   e v a l u a t e d   a t   3   m o n t h s .     A d d i t i o n a l   g r o u p s o f   2 0   m a l e   r a t s   a n d   2 0   m a l e   m i c e   w e r e   d e s i g n a t e d   f o r t i s s u e   b u r d e n   a n a l y s e s . S o u r c e   a n d   S p e c i f i c a t i o n   o f   A n i m a l s M a l e   a n d   f e m a l e   F 3 4 4 / N   r a t s   a n d   B 6 C 3 F 1   m i c e   w e r e o b t a i n e d   f r o m   T a c o n i c   F a r m s   ( G e r m a n t o w n ,   N Y )   f o r u s e   i n   t h e   2 - y e a r   s t u d i e s .     R a t s   a n d   m i c e   w e r e   q u a r a n - t i n e d   f o r   1 3   ( m i c e )   o r   1 5   ( r a t s )   d a y s   b e f o r e   t h e   b e g i n - n i n g   o f   t h e   s t u d i e s .     F i v e   m a l e   a n d   f i v e   f e m a l e   r a t s   a n d m i c e   w e r e   r a n d o m l y   s e l e c t e d   f o r   p a r a s i t e   e v a l u a t i o n a n d   g r o s s   o b s e r v a t i o n   o f   d i s e a s e .     R a t s   a n d   m i c e   w e r e a p p r o x i m a t e l y   6   w e e k s   o l d   a t   t h e   b e g i n n i n g   o f   t h e s t u d i e s .     T h e   h e a l t h   o f   t h e   a n i m a l s   w a s   m o n i t o r e d d u r i n g   t h e   s t u d i e s   a c c o r d i n g   t o   t h e   p r o t o c o l s   o f   t h e N T P   S e n t i n e l   A n i m a l   P r o g r a m   ( A p p e n d i x   L ) . A n i m a l   M a i n t e n a n c e R a t s   a n d   m i c e   w e r e   h o u s e d   i n d i v i d u a l l y .     F e e d   w a s a v a i l a b l e   a d   l i b i t u m   e x c e p t   d u r i n g   e x p o s u r e   p e r i o d s ; w a t e r   w a s   a v a i l a b l e   a d   l i b i t u m .     C a g e s   a n d   r a c k s   w e r e r o t a t e d   w e e k l y .     F u r t h e r   d e t a i l s   o f   a n i m a l   m a i n t e n a n c e a r e   g i v e n   i n   T a b l e   2 .     I n f o r m a t i o n   o n   f e e d   c o m p o s i t i o n a n d   c o n t a m i n a n t s   i s   p r o v i d e d   i n   A p p e n d i x   K . T i s s u e   B u r d e n   S t u d i e s   L u n g s   a n d   s e r a   w e r e   c o l l e c t e d   f r o m   f i v e   r a t s   a n d   f i v e m i c e   i n   t h e   0   a n d   0 . 0 3   m g / m 3   t i s s u e   b u r d e n   s t u d y g r o u p s   a t   3 ,   5   ( 0 . 0 3   m g / m 3   g r o u p   o n l y ) ,   9 ,   o r   1 2   m o n t h s f o r   l u n g   b u r d e n   a n d   s e r u m   i n d i u m   c o n c e n t r a t i o n   a n a l y - s e s .     A d d i t i o n a l l y ,   a   c o m p l e t e   n e c r o p s y   a n d   c o m p l e t e h i s t o p a t h o l o g i c   e x a m i n a t i o n   w a s   p e r f o r m e d   o n   a n i m a l s i n   t h e   0 . 0 3   m g / m 3   g r o u p   a t   5   m o n t h s   a n d   t h e   l e f t   l u n g s f r o m   a n i m a l s   i n   t h e   0   a n d   0 . 0 3   m g / m 3   g r o u p s   w e r e c o l l e c t e d   f o r   h i s t o p a t h o l o g i c   e x a m i n a t i o n   a t   1 2   m o n t h s . L u n g s   a n d   s e r a   w e r e   c o l l e c t e d   f r o m   f i v e   r a t s   a n d   f i v e m i c e   i n   t h e   0 . 1   a n d   0 . 3   m g / m 3   g r o u p s   a t   3   m o n t h s   f o r l u n g   b u r d e n   a n d   s e r u m   i n d i u m   c o n c e n t r a t i o n   e v a l u a - t i o n .     T h r e e   o r   f o u r   s e n t i n e l   r a t s   a n d   m i c e   p e r   g e n d e r f r o m   e a c h   g r o u p   w e r e   s a c r i f i c e d   a t   5   m o n t h s   f o r   n e c - r o p s y ,   c o m p l e t e   h i s t o p a t h o l o g i c   e x a m i n a t i o n ,   a n d   l u n g b u r d e n   a n d   s e r u m   i n d i u m   c o n c e n t r a t i o n   e v a l u a t i o n s .     A c o m p l e t e   n e c r o p s y ,   l e f t   l u n g   h i s t o p a t h o l o g i c   e x a m i n a - t i o n ,   a n d   l u n g   b u r d e n   a n d   s e r u m   c o n c e n t r a t i o n   e v a l u a - t i o n   w e r e   p e r f o r m e d   o n   t w o   t o   t h r e e   r a t s   a n d   o n e   t o t h r e e   m i c e   f r o m   t h e   0 . 1   a n d   0 . 3   m g / m 3   g r o u p s   2 ,   4 ,   6 , 8 ,   o r   1 2   m o n t h s   a f t e r   e x p o s u r e   t e r m i n a t i o n .     I n   a d d i - t i o n ,   t w o   o r   t h r e e   r a t s   a n d   m i c e   f r o m   t h e   0   m g / m 3   g r o u p w e r e   e x a m i n e d   f o r   t h e   s a m e   p a r a m e t e r s   a t   2   o r 1 2   m o n t h s   a f t e r   e x p o s u r e .   M e t h o d o l o g i e s   f o r d e t e r m i n a t i o n   o f   l u n g   b u r d e n   a n d   s e r u m   i n d i u m c o n c e n t r a t i o n   w e r e   t h e   s a m e   a s   t h o s e   d e s c r i b e d   f o r   t h e 1 4 - w e e k   s t u d i e s ,   e x c e p t   i n d i u m   i n   l u n g   d i g e s t s   w a s a n a l y z e d   u s i n g   i n d u c t i v e l y   c o u p l e d   p l a s m a / m a s s s p e c t r o s c o p y   ( P l a s m a Q u a d ,   V G   E l e m e n t a l ,   W i n s f o r d , C h e s h i r e ,   U K ) .     E q u a t i o n s   f o r   c a l c u l a t i o n   o f   l u n g d e p o s i t i o n   a n d   c l e a r a n c e   p a r a m e t e r s   a r e   i n c l u d e d   i n A p p e n d i x   H . 3 0 I n d i u m   P h o s p h i d e ,   N T P   T R   4 9 9 C l i n i c a l   E x a m i n a t i o n s   a n d   P a t h o l o g y A l l   a n i m a l s   w e r e   o b s e r v e d   t w i c e   d a i l y .     A n i m a l s   w e r e w e i g h e d   a t   t h e   b e g i n n i n g   o f   t h e   s t u d i e s .     C l i n i c a l   f i n d - i n g s   a n d   b o d y   w e i g h t s   f o r   r a t s   w e r e   r e c o r d e d   e v e r y 4   w e e k s   f r o m   w e e k   4   t h r o u g h   9 2 ,   e x c e p t   b e t w e e n w e e k s   4 4   a n d   5 2 ,   a n d   a p p r o x i m a t e l y   e v e r y   2   w e e k s t h e r e a f t e r .     C l i n i c a l   f i n d i n g s   a n d   b o d y   w e i g h t s   f o r   m i c e w e r e   r e c o r d e d   e v e r y   4   w e e k s   f r o m   w e e k   5   t h r o u g h   9 3 a n d   a p p r o x i m a t e l y   e v e r y   2   w e e k s   t h e r e a f t e r .     A t   t h e 3 - m o n t h   i n t e r i m   e v a l u a t i o n ,   b l o o d   w a s   c o l l e c t e d   f o r h e m a t o l o g y   a n d   c l i n i c a l   c h e m i s t r y   a n a l y s e s .     M e t h o - d o l o g i e s   u s e d   w e r e   t h e   s a m e   a s   t h o s e   d e s c r i b e d   f o r   t h e 1 4 - w e e k   s t u d i e s .     T h e   p a r a m e t e r s   m e a s u r e d   a r e   l i s t e d i n   T a b l e   2 . C o m p l e t e   n e c r o p s i e s   a n d   m i c r o s c o p i c   e x a m i n a t i o n s w e r e   p e r f o r m e d   o n   0   a n d   0 . 3   m g / m 3   c o r e   s t u d y   r a t s   a n d m i c e   a t   3   m o n t h s   a n d   a l l   c o r e   s t u d y   r a t s   a n d   m i c e   a t   t h e e n d   o f   t h e   s t u d i e s .     T a r g e t   o r g a n s   w e r e   e x a m i n e d   i n 0 . 0 3   a n d   0 . 1   m g / m 3   c o r e   s t u d y   r a t s   a n d   m i c e   a t 3   m o n t h s .     A t     3   m o n t h s ,   t h e   h e a r t ,   r i g h t   k i d n e y ,   l i v e r , l u n g ,   r i g h t   t e s t i s ,   a n d   t h y m u s   o f   r a t s   a n d   m i c e   w e r e w e i g h e d .     A t   n e c r o p s y ,   a l l   o r g a n s   a n d   t i s s u e s   w e r e e x a m i n e d   f o r   g r o s s l y   v i s i b l e   l e s i o n s ,   a n d   a l l   m a j o r t i s s u e s   w e r e   f i x e d   a n d   p r e s e r v e d   i n   1 0 %   n e u t r a l   b u f - f e r e d   f o r m a l i n ,   p r o c e s s e d   a n d   t r i m m e d ,   e m b e d d e d   i n p a r a f f i n ,   s e c t i o n e d   t o   a   t h i c k n e s s   o f   4   t o   6   µ m ,   a n d s t a i n e d   w i t h   h e m a t o x y l i n   a n d   e o s i n   f o r   m i c r o s c o p i c e x a m i n a t i o n .     F o r   a l l   p a i r e d   o r g a n s   ( e . g . ,   a d r e n a l   g l a n d , k i d n e y ,   o v a r y ) ,   s a m p l e s   f r o m   e a c h   o r g a n   w e r e   e x a m - i n e d .     T i s s u e s   e x a m i n e d   m i c r o s c o p i c a l l y   a r e   l i s t e d   i n T a b l e   2 . M i c r o s c o p i c   e v a l u a t i o n s   w e r e   c o m p l e t e d   b y   t h e   s t u d y l a b o r a t o r y   p a t h o l o g i s t ,   a n d   t h e   p a t h o l o g y   d a t a   w e r e e n t e r e d   i n t o   t h e   T o x i c o l o g y   D a t a   M a n a g e m e n t   S y s t e m . T h e   s l i d e s ,   p a r a f f i n   b l o c k s ,   a n d   r e s i d u a l   w e t   t i s s u e s w e r e   s e n t   t o   t h e   N T P   A r c h i v e s   f o r   i n v e n t o r y ,   s l i d e / b l o c k   m a t c h ,   a n d   w e t   t i s s u e   a u d i t .     T h e   s l i d e s ,   i n d i v i d - u a l   a n i m a l   d a t a   r e c o r d s ,   a n d   p a t h o l o g y   t a b l e s   w e r e e v a l u a t e d   b y   a n   i n d e p e n d e n t   q u a l i t y   a s s e s s m e n t   l a b o r a - t o r y .     T h e   i n d i v i d u a l   a n i m a l   r e c o r d s   a n d   t a b l e s   w e r e c o m p a r e d   f o r   a c c u r a c y ,   t h e   s l i d e   a n d   t i s s u e   c o u n t s   w e r e v e r i f i e d ,   a n d   t h e   h i s t o t e c h n i q u e   w a s   e v a l u a t e d .     F o r   t h e 2 - y e a r   s t u d i e s ,   a   q u a l i t y   a s s e s s m e n t   p a t h o l o g i s t   e v a l - u a t e d   s l i d e s   f r o m   a l l   t u m o r s   ( e x c e p t   f o r   t e s t i s   i n t e r s t i t i a l c e l l   a d e n o m a )   a n d   a l l   p o t e n t i a l   t a r g e t   o r g a n s ,   w h i c h i n c l u d e d   t h e   l a r y n x ,   l u n g ,   l y m p h   n o d e s ( m e d i a s t i n a l ) a n d   b r o n c h i a l ) ,   n o s e ,   a n d   t r a c h e a   o f   r a t s a n d   m i c e ;   t h e   m a m m a r y   g l a n d   i n   r a t s ;   a n d   t h e   l i v e r   i n m i c e .     A d d i t i o n a l l y ,   t h e   o r a l   c a v i t y   i n   r a t s   w a s e v a l u a t e d   f o r   h y p e r p l a s i a   a n d   n e o p l a s m s ;   i n   m i c e ,   t h e s p l e e n   w a s   e v a l u a t e d   f o r   h e m a t o p o i e t i c   c e l l   p r o l i f - e r a t i o n   a n d   t h e   b o n e   m a r r o w   w a s   e v a l u a t e d   f o r h y p e r p l a s i a .     T h e   q u a l i t y   a s s e s s m e n t   r e p o r t   a n d   t h e   r e v i e w e d   s l i d e s w e r e   s u b m i t t e d   t o   t h e   N T P   P a t h o l o g y   W o r k i n g   G r o u p ( P W G )   c h a i r p e r s o n ,   w h o   r e v i e w e d   t h e   s e l e c t e d   t i s s u e s a n d   a d d r e s s e d   a n y   i n c o n s i s t e n c i e s   i n   t h e   d i a g n o s e s m a d e   b y   t h e   l a b o r a t o r y   a n d   q u a l i t y   a s s e s s m e n t   p a t h o - l o g i s t s .     R e p r e s e n t a t i v e   h i s t o p a t h o l o g y   s l i d e s   c o n t a i n - i n g   e x a m p l e s   o f   l e s i o n s   r e l a t e d   t o   c h e m i c a l   a d m i n i s t r a - t i o n ,   e x a m p l e s   o f   d i s a g r e e m e n t s   i n   d i a g n o s e s   b e t w e e n t h e   l a b o r a t o r y   a n d   q u a l i t y   a s s e s s m e n t   p a t h o l o g i s t s ,   o r l e s i o n s   o f   g e n e r a l   i n t e r e s t   w e r e   p r e s e n t e d   b y   t h e   c h a i r - p e r s o n   t o   t h e   P W G   f o r   r e v i e w .     T h e   P W G   c o n s i s t e d   o f t h e   q u a l i t y   a s s e s s m e n t   p a t h o l o g i s t   a n d   o t h e r   p a t h o l - o g i s t s   e x p e r i e n c e d   i n   r o d e n t   t o x i c o l o g i c   p a t h o l o g y . W h e n   t h e   P W G   c o n s e n s u s   d i f f e r e d   f r o m   t h e   o p i n i o n   o f t h e   l a b o r a t o r y   p a t h o l o g i s t ,   t h e   d i a g n o s i s   w a s   c h a n g e d . F i n a l   d i a g n o s e s   f o r   r e v i e w e d   l e s i o n s   r e p r e s e n t   a   c o n - s e n s u s   b e t w e e n   t h e   l a b o r a t o r y   p a t h o l o g i s t ,   r e v i e w i n g p a t h o l o g i s t ( s ) ,   a n d   t h e   P W G .     D e t a i l s   o f   t h e s e   r e v i e w p r o c e d u r e s   h a v e   b e e n   d e s c r i b e d ,   i n   p a r t ,   b y   M a r o n p o t a n d   B o o r m a n   ( 1 9 8 2 )   a n d   B o o r m a n   e t   a l .   ( 1 9 8 5 ) .     F o r s u b s e q u e n t   a n a l y s e s   o f   t h e   p a t h o l o g y   d a t a ,   t h e   d e c i s i o n o f   w h e t h e r   t o   e v a l u a t e   t h e   d i a g n o s e d   l e s i o n s   f o r   e a c h t i s s u e   t y p e   s e p a r a t e l y   o r   c o m b i n e d   w a s   g e n e r a l l y   b a s e d o n   t h e   g u i d e l i n e s   o f   M c C o n n e l l   e t   a l .   ( 1 9 8 6 ) . I n d i u m   P h o s p h i d e ,   N T P   T R   4 9 9 3 1 T A B L E   2 E x p e r i m e n t a l   D e s i g n   a n d   M a t e r i a l s   a n d   M e t h o d s   i n   t h e   I n h a l a t i o n   S t u d i e s   o f   I n d i u m   P h o s p h i d e 1 4 - W e e k   S t u d i e s 2 - Y e a r   S t u d i e s S t u d y   L a b o r a t o r y B a t t e l l e   P a c i f i c   N o r t h w e s t   L a b o r a t o r i e s   ( R i c h l a n d ,   W A ) B a t t e l l e   P a c i f i c   N o r t h w e s t   L a b o r a t o r i e s   ( R i c h l a n d ,   W A ) S t r a i n   a n d   S p e c i e s F 3 4 4 / N   r a t s B 6 C 3 F 1   m i c e F 3 4 4 / N   r a t s B 6 C 3 F 1   m i c e A n i m a l   S o u r c e T a c o n i c   F a r m s   ( G e r m a n t o w n ,   N Y ) T a c o n i c   F a r m s   ( G e r m a n t o w n ,   N Y ) T i m e   H e l d   B e f o r e   S t u d i e s R a t s : 1 2   d a y s   ( m a l e s )   o r   1 3   d a y s   ( f e m a l e s ) M i c e : 1 3   d a y s   ( m a l e s )   o r   1 4   d a y s   ( f e m a l e s ) R a t s : 1 5   d a y s M i c e : 1 3   d a y s A v e r a g e   A g e   W h e n   S t u d i e s   B e g a n 6   w e e k s 6   w e e k s D a t e   o f   F i r s t   E x p o s u r e 3   ( m a l e s )   o r   4   ( f e m a l e s )   A p r i l   1 9 9 5 1 8   ( r a t s )   o r   2 5   ( m i c e )   J a n u a r y   1 9 9 6 D u r a t i o n   o f   E x p o s u r e 6   h o u r s   p l u s   T 9 0   ( 1 2   m i n u t e s )   p e r   d a y ,   5   d a y s   p e r   w e e k   ( w e e k s   1 - 4 a n d   1 0 - 1 4 )   o r   7   d a y s   p e r   w e e k   ( w e e k s   5 - 9 )   6   h o u r s   p l u s   T 9 0   ( 1 2   m i n u t e s )   p e r   d a y ,   5   d a y s   p e r   w e e k   f o r   2 2   w e e k s   ( r a t s )   a n d   2 1   w e e k s   (   m i c e )   ( 0 . 1   a n d   0 . 3   m g / m 3   g r o u p s )   o r 1 0 5   w e e k s   ( 0   a n d   0 . 0 3   m g / m 3   g r o u p s ) D a t e   o f   L a s t   E x p o s u r e R a t s : 4   ( m a l e s )   o r   5   ( f e m a l e s )   J u l y   1 9 9 5 M i c e : 6   ( m a l e s )   o r   7   ( f e m a l e s )   J u l y   1 9 9 5 R a t s : 1 4   J u n e   1 9 9 6   ( 0 . 1   a n d   0 . 3   m g / m 3   g r o u p s )   o r   1 6   J a n u a r y   1 9 9 8   ( 0   a n d   0 . 0 3   m g / m 3   g r o u p s ) M i c e : 1 4   J u n e   1 9 9 6   ( 0 . 1   a n d   0 . 3   m g / m 3   g r o u p s )   o r   2 3   J a n u a r y   1 9 9 8   ( 0   a n d   0 . 0 3   m g / m 3   g r o u p s ) N e c r o p s y   D a t e s R a t s : 5   ( m a l e s )   o r   6   ( f e m a l e s )   J u l y   1 9 9 5 M i c e : 7   ( m a l e s )   o r   8   ( f e m a l e s )   J u l y   1 9 9 5 R a t s :         3 - M o n t h   i n t e r i m   e v a l u a t i o n : 1 7   ( m a l e s )   o r   1 8   ( f e m a l e s )   A p r i l   1 9 9 6             T e r m i n a l   s a c r i f i c e : 1 9 - 2 3   J a n u a r y   1 9 9 8 M i c e :         3 - M o n t h   i n t e r i m   e v a l u a t i o n : 2 5   ( m a l e s )   o r   2 6   ( f e m a l e s )   A p r i l   1 9 9 6         T e r m i n a l   s a c r i f i c e : 2 6 - 3 0   J a n u a r y   1 9 9 8 A v e r a g e   A g e   a t   N e c r o p s y 2 0   w e e k s 3 - M o n t h   i n t e r i m   e v a l u a t i o n :     1 9   w e e k s T e r m i n a l   s a c r i f i c e :     1 1 1   w e e k s S i z e   o f   S t u d y   G r o u p s C o r e   s t u d i e s :     1 0   m a l e s   a n d   1 0   f e m a l e s C l i n i c a l   p a t h o l o g y   s t u d y :     1 0   m a l e   a n d   1 0   f e m a l e   r a t s T i s s u e   b u r d e n   s t u d y :     1 5   m a l e   r a t s P o s t e x p o s u r e   t i s s u e   b u r d e n   s t u d y :     1 5   m a l e   r a t s   ( i n c l u d e s   1 0   m a l e s     f r o m   t h e   c l i n i c a l   p a t h o l o g y   s t u d y ) P o s t e x p o s u r e   l u n g   b u r d e n   s t u d y   i n   a g e - m a t c h e d   a n i m a l s :     1 5   m a l e   r a t s C o r e   s t u d i e s :     6 0   m a l e s   a n d   6 0   f e m a l e s T i s s u e   b u r d e n   s t u d i e s :     2 0   m a l e s 3 2 I n d i u m   P h o s p h i d e ,   N T P   T R   4 9 9 T A B L E   2 E x p e r i m e n t a l   D e s i g n   a n d   M a t e r i a l s   a n d   M e t h o d s   i n   t h e   I n h a l a t i o n   S t u d i e s   o f   I n d i u m   P h o s p h i d e 1 4 - W e e k   S t u d i e s 2 - Y e a r   S t u d i e s M e t h o d   o f   D i s t r i b u t i o n A n i m a l s   w e r e   d i s t r i b u t e d   r a n d o m l y   i n t o   g r o u p s   o f   a p p r o x i m a t e l y e q u a l   i n i t i a l   m e a n   b o d y   w e i g h t s . S a m e   a s   1 4 - w e e k   s t u d i e s A n i m a l s   p e r   C a g e 1 1 M e t h o d   o f   A n i m a l   I d e n t i f i c a t i o n T a i l   t a t t o o T a i l   t a t t o o D i e t N T P - 2 0 0 0   o p e n   f o r m u l a   p e l l e t e d   d i e t   ( Z e i g l e r   B r o t h e r s ,   I n c . , G a r d n e r s ,   P A ) ,   a v a i l a b l e   a d   l i b i t u m   e x c e p t   d u r i n g   e x p o s u r e   a n d u r i n e   c o l l e c t i o n   p e r i o d s   ,   c h a n g e d   d a i l y   o n   e x p o s u r e   d a y s   ( r a t s )   o r w e e k l y   ( m i c e ) N T P - 2 0 0 0   p e l l e t e d   d i e t   ( Z e i g l e r   B r o t h e r s ,   I n c . ,   G a r d n e r s ,   P A ) , a v a i l a b l e   a d   l i b i t u m ,   e x c e p t   d u r i n g   e x p o s u r e   p e r i o d s ,   c h a n g e d w e e k l y ,   i r r a d i a t e d   f r o m   M a y   1 9 9 6   t o   s t u d y   t e r m i n a t i o n W a t e r S o f t e n e d   t a p   w a t e r   ( R i c h l a n d   m u n i c i p a l   s u p p l y )   v i a   a u t o m a t i c w a t e r i n g   s y s t e m   ( E d s t r o m   I n d u s t r i e s ,   W a t e r f o r d ,   W I ) ,   a v a i l a b l e a d   l i b i t u m   e x c e p t   d u r i n g   u r i n e   c o l l e c t i o n   p e r i o d s ,   c h a n g e d   w e e k l y S a m e   a s   1 4 - w e e k   s t u d i e s ,   e x c e p t   w a t e r   s o f t e n i n g   t e r m i n a t e d J a n u a r y   1 9 9 7 C a g e s S t a i n l e s s   s t e e l   w i r e   b o t t o m   ( H a z l e t o n   S y s t e m ,   I n c . ,   A b e r d e e n ,   M D ) c h a n g e d   w e e k l y S a m e   a s   1 4 - w e e k   s t u d i e s C h a m b e r   A i r   S u p p l y   F i l t e r s S i n g l e   H E P A   ( N o r t h l a n d   F i l t e r   S y s t e m   I n t e r n a t i o n a l ,   I n c . , M e c h a n i c v i l l e ,   N Y ) ;   C h a r c o a l   ( R S E ,   I n c . ,   N e w   B a l t i m o r e ,   M I ) ; P u r a f i l   ( E n v i r o n m e n t a l   S y s t e m s ,   L y n n w o o d ,   W A ) S a m e   a s   1 4 - w e e k   s t u d i e s C h a m b e r s S t a i n l e s s   s t e e l   ( L a b   P r o d u c t s ,   I n c . ,   H a r f o r d   S y s t e m   D i v i s i o n , A b e r d e e n ,   M D ) ,   c h a n g e d   w e e k l y S a m e   a s   1 4 - w e e k   s t u d i e s C h a m b e r   E n v i r o n m e n t T e m p e r a t u r e :     7 5 E   ±   3 E   F R e l a t i v e   h u m i d i t y :     5 5 %   ±   1 5 % R o o m   f l u o r e s c e n t   l i g h t :     1 2   h o u r s / d a y C h a m b e r   a i r   c h a n g e s :     1 5 / h o u r T e m p e r a t u r e :     7 5 E   ±   3 E   F R e l a t i v e   h u m i d i t y :     5 5 %   ±   1 5 % R o o m   f l u o r e s c e n t   l i g h t :     1 2   h o u r s / d a y C h a m b e r   a i r   c h a n g e s :     1 5 / h o u r E x p o s u r e   C o n c e n t r a t i o n s 0 ,   1 ,   3 ,   1 0 ,   3 0 ,   o r   1 0 0   m g / m 3 0 ,   0 . 0 3 ,   0 . 1 ,   o r   0 . 3   m g / m 3 T y p e   a n d   F r e q u e n c y   o f   O b s e r v a t i o n O b s e r v e d   t w i c e   d a i l y ;   r a t s   a n d   m i c e   w e r e   w e i g h e d   a n d   c l i n i c a l f i n d i n g s   f o r   m i c e   w e r e   r e c o r d e d   i n i t i a l l y ,   w e e k l y ,   a n d   a t   t h e   e n d   o f t h e   s t u d i e s ;   c l i n i c a l   f i n d i n g s   f o r   r a t s   w e r e   r e c o r d e d   a t   t h e   e n d   o f w e e k   1 ,   w e e k l y ,   a n d   a t   t h e   e n d   o f   t h e   s t u d y . O b s e r v e d   t w i c e   d a i l y ;   b o d y   w e i g h t s   f o r   r a t s   w e r e   r e c o r d e d   i n i t i a l l y a n d   c l i n i c a l   f i n d i n g s   a n d   b o d y   w e i g h t s   w e r e   t h e n   r e c o r d e d   e v e r y 4   w e e k s   f r o m   w e e k   4   t h r o u g h   9 2 ,   e x c e p t   b e t w e e n   w e e k s   4 4   a n d   5 2 , a n d   e v e r y   2   w e e k s   t h e r e a f t e r ;   b o d y   w e i g h t s   f o r   m i c e   w e r e   r e c o r d e d i n i t i a l l y   a n d   c l i n i c a l   f i n d i n g s   a n d   b o d y   w e i g h t s   w e r e   t h e n   r e c o r d e d e v e r y   4   w e e k s   f r o m   w e e k   5   t h r o u g h   9 3   a n d   a p p r o x i m a t e l y   e v e r y 2   w e e k s   t h e r e a f t e r . I n d i u m   P h o s p h i d e ,   N T P   T R   4 9 9 3 3 T A B L E   2 E x p e r i m e n t a l   D e s i g n   a n d   M a t e r i a l s   a n d   M e t h o d s   i n   t h e   I n h a l a t i o n   S t u d i e s   o f   I n d i u m   P h o s p h i d e 1 4 - W e e k   S t u d i e s 2 - Y e a r   S t u d i e s M e t h o d   o f   S a c r i f i c e C O 2   a s p h y x i a t i o n C O 2   a s p h y x i a t i o n N e c r o p s y N e c r o p s y   w a s   p e r f o r m e d   o n   a l l   c o r e   s t u d y   a n i m a l s .     O r g a n s   w e i g h e d w e r e   t h e     h e a r t ,   r i g h t   k i d n e y ,   l i v e r ,   l u n g ,   r i g h t   t e s t i s ,   a n d   t h y m u s . N e c r o p s y   w a s   p e r f o r m e d   o n   a l l   c o r e   s t u d y   a n i m a l s .     O r g a n s   w e i g h e d a t   3   m o n t h s   w e r e   t h e   h e a r t ,   r i g h t   k i d n e y ,   l i v e r ,   l u n g ,   r i g h t   t e s t i s ,   a n d t h y m u s . C l i n i c a l   P a t h o l o g y B l o o d   w a s   c o l l e c t e d   f r o m   t h e   r e t r o o r b i t a l   s i n u s   o f   c l i n i c a l   p a t h o l o g y s t u d y   r a t s   o n   d a y s   3   a n d   2 3   a n d   c o r e   s t u d y   r a t s   s u r v i v i n g   t o   t h e   e n d o f   t h e   s t u d y   f o r   h e m a t o l o g y   a n d   c l i n i c a l   c h e m i s t r y   a n a l y s e s .     B l o o d w a s   c o l l e c t e d   f r o m   a l l   m i c e   s u r v i v i n g   t o   t h e   e n d   o f   t h e   s t u d y   f o r h e m a t o l o g y   a n a l y s e s .     C o r e   s t u d y   m a l e   r a t s   w e r e   p l a c e d   i n m e t a b o l i s m   c a g e s   f o r   u r i n e   c o l l e c t i o n   o n   d a y   3 1 . H e m a t o l o g y :     h e m a t o c r i t ;   p a c k e d   c e l l   v o l u m e ;   h e m o g l o b i n c o n c e n t r a t i o n ;   e r y t h r o c y t e ,   r e t i c u l o c y t e ,   a n d   p l a t e l e t   c o u n t s ; e r y t h r o c y t e   m o r p h o l o g y ;   m e a n   c e l l   v o l u m e ;   m e a n   c e l l   h e m o g l o b i n ; m e a n   c e l l   h e m o g l o b i n   c o n c e n t r a t i o n ;   l e u k o c y t e   c o u n t s   a n d d i f f e r e n t i a l s C l i n i c a l   c h e m i s t r y :     u r e a   n i t r o g e n ,   c r e a t i n i n e ,   t o t a l   p r o t e i n ,   a l b u m i n , g l o b u l i n ,   a l b u m i n / g l o b u l i n   r a t i o ,   a l a n i n e   a m i n o t r a n s f e r a s e ,   c r e a t i n e k i n a s e ,   a l k a l i n e   p h o s p h a t a s e ,   s o r b i t o l   d e h y d r o g e n a s e ,   b i l e   a c i d s U r i n a l y s i s :     c r e a t i n i n e ,   g l u c o s e ,   p r o t e i n ,   a l k a l i n e   p h o s p h a t a s e , a s p a r t a t e   a m i n o t r a n s f e r a s e ,   l a c t a t e   d e h y d r o g e n a s e , ( - g l u t a m y l - t r a n s f e r a s e ,   N - a c e t y l - $ - D - g l u c o s a m i n i d a s e ,   v o l u m e , s p e c i f i c   g r a v i t y ,   p H B l o o d   w a s   c o l l e c t e d   f r o m   t h e   r e t r o o r b i t a l   s i n u s   o f   a n i m a l s   d e s i g n a t e d f o r   t h e   3 - m o n t h   i n t e r i m   e v a l u a t i o n   f o r   h e m a t o l o g y   a n d   c l i n i c a l c h e m i s t r y   a n a l y s e s .     H e m a t o l o g y :     m a n u a l   h e m a t o c r i t ;   a u t o m a t e d   h e m a t o c r i t ; h e m o g l o b i n   c o n c e n t r a t i o n ;   e r y t h r o c y t e ,   r e t i c u l o c y t e ,   a n d   p l a t e l e t c o u n t s ;   e r y t h r o c y t e   m o r p h o l o g y ;   m e a n   c e l l   v o l u m e ;   m e a n   c e l l h e m o g l o b i n ;   m e a n   c e l l   h e m o g l o b i n   c o n c e n t r a t i o n ;   l e u k o c y t e   c o u n t s a n d   d i f f e r e n t i a l s C l i n i c a l   c h e m i s t r y :     t o t a l   i r o n   b i n d i n g   c a p a c i t y ,   u n b o u n d   i r o n b i n d i n g   c a p a c i t y ,   i r o n H i s t o p a t h o l o g y C o m p l e t e   h i s t o p a t h o l o g y   w a s   p e r f o r m e d   o n   c o r e   s t u d y   0   a n d 1 0 0   m g / m 3   r a t s   a n d   o n   0 ,   3 0 ,   a n d   1 0 0   m g / m 3   m i c e .     I n   a d d i t i o n   t o g r o s s   l e s i o n s   a n d   t i s s u e   m a s s e s ,   t h e   f o l l o w i n g   t i s s u e s   w e r e   e x a m i n e d :   a d r e n a l   g l a n d ,   b o n e   w i t h   m a r r o w ,   b r a i n ,   c l i t o r a l   g l a n d ,   e s o p h a g u s , g a l l b l a d d e r   ( m i c e   o n l y ) ,   h e a r t ,   l a r g e   i n t e s t i n e   ( c e c u m ,   c o l o n ,   r e c t u m ) , s m a l l   i n t e s t i n e   ( d u o d e n u m ,   j e j u n u m ,   i l e u m ) ,   k i d n e y ,   l a r y n x ,   l i v e r , l u n g ,   l y m p h   n o d e s   ( m a n d i b u l a r ,   m e d i a s t i n a l ,   m e s e n t e r i c ,   b r o n c h i a l ) , m a m m a r y   g l a n d   w i t h   a d j a c e n t   s k i n ,   n o s e ,   o v a r y ,   p a n c r e a s , p a r a t h y r o i d   g l a n d ,   p i t u i t a r y   g l a n d ,   p r e p u t i a l   g l a n d ,   p r o s t a t e   g l a n d , s a l i v a r y   g l a n d ,   s k i n   ( r a t s   o n l y ) ,   s p l e e n ,   s t o m a c h   ( f o r e s t o m a c h   a n d g l a n d u l a r ) ,   t e s t i s   w i t h   e p i d i d y m i s   a n d   s e m i n a l   v e s i c l e ,   t h y m u s , t h y r o i d   g l a n d ,   t r a c h e a ,   u r i n a r y   b l a d d e r ,   a n d   u t e r u s .     I n   a d d i t i o n ,   t h e a d r e n a l   g l a n d ,   b o n e   w i t h   m a r r o w ,   h e a r t ,   k i d n e y ,   l a r y n x ,   l u n g ,   l y m p h n o d e s   ( m e d i a s t i n a l ,   m e s e n t e r i c ,   a n d   b r o n c h i a l ) ,   n o s e ,   o v a r y ,   p r o s t a t e g l a n d ,   s p l e e n ,   t e s t i s   w i t h   e p i d i d y m i s   a n d   s e m i n a l   v e s i c l e ,   t h y m u s , t r a c h e a ,   a n d   u t e r u s   f r o m   r a t s   i n   a l l   r e m a i n i n g   e x p o s u r e   g r o u p s   a n d t h e   m a n d i b u l a r   l y m p h   n o d e   f r o m   c o r e   s t u d y   r a t s   i n   t h e   3 0   m g / m 3 g r o u p   w e r e   e x a m i n e d .     T h e   a d r e n a l   g l a n d ,   b o n e   m a r r o w ,   h e a r t , l a r y n x ,   l u n g ,   l y m p h   n o d e s   ( m e d i a s t i n a l   a n d   b r o n c h i a l ) ,   m a m m a r y g l a n d   ( f e m a l e s   o n l y ) ,   n o s e ,   o v a r y ,   s a l i v a r y   g l a n d ,   s p l e e n ,   t h y m u s , t r a c h e a ,   a n d   u t e r u s   f r o m   m i c e   i n   a l l   r e m a i n i n g   e x p o s u r e   g r o u p s   w e r e e x a m i n e d . C o m p l e t e   h i s t o p a t h o l o g y   w a s   p e r f o r m e d   o n   0   a n d   0 . 3   m g / m 3   c o r e s t u d y   r a t s   a n d   m i c e   a t   3   m o n t h s   a n d   a l l   c o r e   s t u d y   r a t s   a n d   m i c e   a t t h e   e n d   o f   t h e   s t u d i e s .     I n   a d d i t i o n   t o   g r o s s   l e s i o n s   a n d   t i s s u e   m a s s e s , t h e   f o l l o w i n g   t i s s u e s   w e r e   e x a m i n e d :     a d r e n a l   g l a n d ,   b o n e   w i t h m a r r o w ,   b r a i n ,   c l i t o r a l   g l a n d ,   e s o p h a g u s ,   g a l l b l a d d e r   ( m i c e   o n l y ) , h e a r t ,   l a r g e   i n t e s t i n e   ( c e c u m ,   c o l o n ,   r e c t u m ) ,   s m a l l   i n t e s t i n e ( d u o d e n u m ,   j e j u n u m ,   i l e u m ) ,   k i d n e y ,   l a r y n x ,   l i v e r ,   l u n g ,   l y m p h n o d e s   ( m a n d i b u l a r ,   m e d i a s t i n a l ,   m e s e n t e r i c ,   b r o n c h i a l ) ,   m a m m a r y g l a n d   ( e x c e p t   m a l e   m i c e ) ,   n o s e ,   o v a r y ,   p a n c r e a s ,   p a r a t h y r o i d   g l a n d , p i t u i t a r y   g l a n d ,   p r e p u t i a l   g l a n d ,   p r o s t a t e   g l a n d ,   s a l i v a r y   g l a n d ,   s k i n , s p l e e n ,   s t o m a c h   ( f o r e s t o m a c h   a n d   g l a n d u l a r ) ,   t e s t i s   w i t h   e p i d i d y m i s a n d   s e m i n a l   v e s i c l e ,   t h y m u s ,   t h y r o i d   g l a n d ,   t r a c h e a ,   u r i n a r y   b l a d d e r , a n d   u t e r u s .     T h e   l a r y n x ,   l u n g ,   l y m p h   n o d e s   ( m e d i a s t i n a l   a n d b r o n c h i a l ) ,   m a m m a r y   g l a n d ,   n o s e ,   a n d   t r a c h e a   o f   c o r e   s t u d y   r a t s   i n t h e   r e m a i n i n g   e x p o s u r e   g r o u p s   w e r e   e x a m i n e d   a t   3   m o n t h s .     T h e l i v e r   ( f e m a l e s   o n l y ) ,   l y m p h   n o d e s   ( m e d i a s t i n a l   a n d   b r o n c h i a l ) ,   a n d s p l e e n   f r o m   c o r e   s t u d y   m i c e   i n   t h e   r e m a i n i n g   e x p o s u r e   g r o u p s   w e r e e x a m i n e d .     3 4 I n d i u m   P h o s p h i d e ,   N T P   T R   4 9 9 T A B L E   2 E x p e r i m e n t a l   D e s i g n   a n d   M a t e r i a l s   a n d   M e t h o d s   i n   t h e   I n h a l a t i o n   S t u d i e s   o f   I n d i u m   P h o s p h i d e 1 4 - W e e k   S t u d i e s 2 - Y e a r   S t u d i e s S p e r m   M o t i l i t y   a n d   V a g i n a l   C y t o l o g y A t   t h e   e n d   o f   t h e   s t u d i e s ,   s p e r m   s a m p l e s   w e r e   c o l l e c t e d   f r o m   m a l e r a t s   a n d   m i c e   i n   t h e   0 ,   3 ,   1 0 ,   a n d   3 0   m g / m 3   g r o u p s   f o r   s p e r m m o t i l i t y   e v a l u a t i o n s .     T h e   f o l l o w i n g   p a r a m e t e r s   w e r e   e v a l u a t e d :   s p e r m a t i d   h e a d s   p e r   t e s t i s   a n d   p e r   g r a m   t e s t i s ,   s p e r m a t i d   c o u n t s ,   a n d e p i d i d y m a l   s p e r m a t o z o a l   m o t i l i t y   a n d   c o n c e n t r a t i o n .     T h e   l e f t   c a u d a , l e f t   e p i d i d y m i s ,   a n d   l e f t   t e s t i s   w e r e   w e i g h e d .     V a g i n a l   s a m p l e s   w e r e c o l l e c t e d   f o r   1 2   c o n s e c u t i v e   d a y s   p r i o r   t o   t h e   e n d   o f   t h e   s t u d i e s   f r o m f e m a l e s   e x p o s e d   t o   0 ,   3 ,   1 0 ,   o r   3 0   m g / m 3   f o r   v a g i n a l   c y t o l o g y e v a l u a t i o n s .     T h e   p e r c e n t a g e   o f   t i m e   s p e n t   i n   t h e   v a r i o u s   e s t r o u s c y c l e   s t a g e s   a n d   e s t r o u s   c y c l e   l e n g t h   w e r e   e v a l u a t e d . N o n e T i s s u e   B u r d e n   S t u d i e s L u n g ,   t e s t i s ,   b l o o d ,   a n d   s e r u m   f r o m   m a l e   r a t s   i n   t i s s u e   b u r d e n   s t u d y g r o u p s   w e r e   e v a l u a t e d   a t   f i v e   t i m e   p o i n t s .     T i s s u e s   f r o m   u p   t o   t h r e e r a t s   p e r   g r o u p   w e r e   c o l l e c t e d   o n   d a y   4 ,   2 4 ,   4 5 ,   7 3 ,   o r   9 6 .   P o s t e x p o s u r e   L u n g   B u r d e n   S t u d y :     L u n g ,   t e s t e s ,   b l o o d ,   a n d   s e r u m f r o m   m a l e   r a t s   d e s i g n a t e d   f o r   p o s t e x p o s u r e   t i s s u e   b u r d e n   s t u d y   a n d m a l e   r a t s   f r o m   c l i n i c a l   p a t h o l o g y   s t u d y   g r o u p s   w e r e   e v a l u a t e d   a t   f o u r t i m e   p o i n t s .     T i s s u e s   f r o m   t h r e e   t o   f i v e   r a t s   p e r   g r o u p   w e r e   c o l l e c t e d o n   p o s t e x p o s u r e   d a y   1 4 ,   2 8 ,   5 6 ,   o r   1 1 2 . P o s t e x p o s u r e   L u n g   B u r d e n   S t u d y   i n   A g e - M a t c h e d   A n i m a l s : M a l e   r a t s ,   a p p r o x i m a t e l y   2 0   w e e k s   o l d   a n d   d e s i g n a t e d   f o r   l u n g b u r d e n   s t u d y   i n   a g e d   a n i m a l s ,   w e r e   e x p o s e d   t o   i n d i u m   p h o s p h i d e   f o r f i v e   c o n s e c u t i v e   d a y s ,   a n d   l u n g s   w e r e   e v a l u a t e d   a t   f i v e   t i m e   p o i n t s a f t e r   e x p o s u r e   t e r m i n a t i o n .     L u n g s   f r o m   t h r e e   r a t s   p e r   e x p o s u r e g r o u p   w e r e   c o l l e c t e d   o n   d a y   5   a n d   1 4 ,   2 8 ,   5 6 ,   o r   1 1 2   d a y s   a f t e r e x p o s u r e   t e r m i n a t i o n . L u n g   a n d   s e r u m   f r o m   t w o   t o   f i v e   m a l e   r a t s   a n d   m i c e   i n   t i s s u e   b u r d e n s t u d y   g r o u p s   w e r e   e v a l u a t e d   a t   3 ,   5 ,   9 ,   o r   1 2   m o n t h s   o r   2 ,   4 ,   6 ,   8 ,   o r 1 2   m o n t h s   a f t e r   e x p o s u r e   t e r m i n a t i o n .     A   c o m p l e t e   n e c r o p s y , h i s t o p a t h o l o g i c   e x a m i n a t i o n   o f   t h e   l u n g ,   o r   l u n g   b u r d e n   a n d   s e r u m i n d i u m   c o n c e n t r a t i o n   e v a l u a t i o n   w e r e   p e r f o r m e d .     T h r e e   o r   f o u r   m a l e a n d   f e m a l e   s e n t i n e l   r a t s   a n d   m i c e   f r o m   e a c h   g r o u p   w e r e   s a c r i f i c e d   a t 5   m o n t h s   f o r   c o m p l e t e   n e c r o p s y ,   h i s t o p a t h o l o g i c   e x a m i n a t i o n   o f   t h e l u n g ,   a n d   l u n g   b u r d e n   a n d   s e r u m   i n d i u m   c o n c e n t r a t i o n   e v a l u a t i o n .   S T A T I S T I C A L   M E T H O D S S u r v i v a l   A n a l y s e s T h e   p r o b a b i l i t y   o f   s u r v i v a l   w a s   e s t i m a t e d   b y   t h e p r o d u c t - l i m i t   p r o c e d u r e   o f   K a p l a n   a n d   M e i e r   ( 1 9 5 8 ) a n d   i s   p r e s e n t e d   i n   t h e   f o r m   o f   g r a p h s .     A n i m a l s   f o u n d d e a d   o f   o t h e r   t h a n   n a t u r a l   c a u s e s   w e r e   c e n s o r e d   f r o m t h e   s u r v i v a l   a n a l y s e s ;   a n i m a l s   d y i n g   f r o m   n a t u r a l c a u s e s   w e r e   n o t   c e n s o r e d .     S t a t i s t i c a l   a n a l y s e s   f o r p o s s i b l e   d o s e - r e l a t e d   e f f e c t s   o n   s u r v i v a l   u s e d   C o x ’ s ( 1 9 7 2 )   m e t h o d   f o r   t e s t i n g   t w o   g r o u p s   f o r   e q u a l i t y   a n d T a r o n e ’ s   ( 1 9 7 5 )   l i f e   t a b l e   t e s t   t o   i d e n t i f y   d o s e - r e l a t e d t r e n d s .     A l l   r e p o r t e d   P   v a l u e s   f o r   t h e   s u r v i v a l   a n a l y s e s a r e   t w o   s i d e d . C a l c u l a t i o n   o f   I n c i d e n c e T h e   i n c i d e n c e s   o f   n e o p l a s m s   o r   n o n n e o p l a s t i c   l e s i o n s a r e   p r e s e n t e d   i n   T a b l e s   A 1 ,   A 5 ,   B 1 ,   B 5 ,   C 1 ,   C 5 ,   D 1 , a n d   D 5   a s   t h e   n u m b e r s   o f   a n i m a l s   b e a r i n g   s u c h   l e s i o n s a t   a   s p e c i f i c   a n a t o m i c   s i t e   a n d   t h e   n u m b e r s   o f   a n i m a l s w i t h   t h a t   s i t e   e x a m i n e d   m i c r o s c o p i c a l l y .     F o r   c a l c u l a - t i o n   o f   s t a t i s t i c a l   s i g n i f i c a n c e ,   t h e   i n c i d e n c e s   o f   m o s t n e o p l a s m s   ( T a b l e s   A 3 ,   B 3 ,   C 3 ,   a n d   D 3 )   a n d   a l l n o n n e o p l a s t i c   l e s i o n s   a r e   g i v e n   a s   t h e   n u m b e r s   o f   a n i - m a l s   a f f e c t e d   a t   e a c h   s i t e   e x a m i n e d   m i c r o s c o p i c a l l y . H o w e v e r ,   w h e n   m a c r o s c o p i c   e x a m i n a t i o n   w a s   r e q u i r e d t o   d e t e c t   n e o p l a s m s   i n   c e r t a i n   t i s s u e s   ( e . g . ,   h a r d e r i a n g l a n d ,   i n t e s t i n e ,   m a m m a r y   g l a n d ,   a n d   s k i n )   b e f o r e m i c r o s c o p i c   e v a l u a t i o n ,   o r   w h e n   n e o p l a s m s   h a d   m u l - t i p l e   p o t e n t i a l   s i t e s   o f   o c c u r r e n c e   ( e . g . ,   l e u k e m i a   o r l y m p h o m a ) ,   t h e   d e n o m i n a t o r s   c o n s i s t   o f   t h e   n u m b e r   o f a n i m a l s   o n   w h i c h   a   n e c r o p s y   w a s   p e r f o r m e d . T a b l e s   A 3 ,   B 3 ,   C 3 ,   a n d   D 3   a l s o   g i v e   t h e   s u r v i v a l - a d j u s t e d   n e o p l a s m   r a t e   f o r   e a c h   g r o u p   a n d   e a c h   s i t e - s p e c i f i c   n e o p l a s m .     T h i s   s u r v i v a l - a d j u s t e d   r a t e   ( b a s e d o n   t h e   P o l y - 3   m e t h o d   d e s c r i b e d   b e l o w )   a c c o u n t s   f o r d i f f e r e n t i a l   m o r t a l i t y   b y   a s s i g n i n g   a   r e d u c e d   r i s k   o f n e o p l a s m ,   p r o p o r t i o n a l   t o   t h e   t h i r d   p o w e r   o f   t h e f r a c t i o n   o f   t i m e   o n   s t u d y ,   t o   a n i m a l s   t h a t   d o   n o t   r e a c h t e r m i n a l   s a c r i f i c e . I n d i u m   P h o s p h i d e ,   N T P   T R   4 9 9 3 5 A n a l y s i s   o f   N e o p l a s m a n d   N o n n e o p l a s t i c   L e s i o n   I n c i d e n c e s T h e   P o l y - k   t e s t   ( B a i l e r   a n d   P o r t i e r ,   1 9 8 8 ;   P o r t i e r   a n d B a i l e r ,   1 9 8 9 ;   P i e g o r s c h   a n d   B a i l e r ,   1 9 9 7 )   w a s   u s e d   t o a s s e s s   n e o p l a s m   a n d   n o n n e o p l a s t i c   l e s i o n   p r e v a l e n c e . T h i s   t e s t   i s   a   s u r v i v a l - a d j u s t e d   q u a n t a l - r e s p o n s e   p r o c e - d u r e   t h a t   m o d i f i e s   t h e   C o c h r a n - A r m i t a g e   l i n e a r   t r e n d t e s t   t o   t a k e   s u r v i v a l   d i f f e r e n c e s   i n t o   a c c o u n t .     M o r e s p e c i f i c a l l y ,   t h i s   m e t h o d   m o d i f i e s   t h e   d e n o m i n a t o r   i n t h e   q u a n t a l   e s t i m a t e   o f   l e s i o n   i n c i d e n c e   t o   a p p r o x i m a t e m o r e   c l o s e l y   t h e   t o t a l   n u m b e r   o f   a n i m a l   y e a r s   a t   r i s k . F o r   a n a l y s i s   o f   a   g i v e n   s i t e ,   e a c h   a n i m a l   i s   a s s i g n e d   a r i s k   w e i g h t .     T h i s   v a l u e   i s   o n e   i f   t h e   a n i m a l   h a d   a   l e s i o n a t   t h a t   s i t e   o r   i f   i t   s u r v i v e d   u n t i l   t e r m i n a l   s a c r i f i c e ;   i f   t h e a n i m a l   d i e d   p r i o r   t o   t e r m i n a l   s a c r i f i c e   a n d   d i d   n o t   h a v e a   l e s i o n   a t   t h a t   s i t e ,   i t s   r i s k   w e i g h t   i s   t h e   f r a c t i o n   o f   t h e e n t i r e   s t u d y   t i m e   t h a t   i t   s u r v i v e d ,   r a i s e d   t o   t h e   k t h p o w e r . T h i s   m e t h o d   y i e l d s   a   l e s i o n   p r e v a l e n c e   r a t e   t h a t d e p e n d s   o n l y   u p o n   t h e   c h o i c e   o f   a   s h a p e   p a r a m e t e r   f o r a   W e i b u l l   h a z a r d   f u n c t i o n   d e s c r i b i n g   c u m u l a t i v e   l e s i o n i n c i d e n c e   o v e r   t i m e   ( B a i l e r   a n d   P o r t i e r ,   1 9 8 8 ) .     U n l e s s o t h e r w i s e   s p e c i f i e d ,   a   v a l u e   o f   k = 3   w a s   u s e d   i n   t h e a n a l y s i s   o f   s i t e - s p e c i f i c   l e s i o n s .     T h i s   v a l u e   w a s   r e c o m - m e n d e d   b y   B a i l e r   a n d   P o r t i e r   ( 1 9 8 8 )   f o l l o w i n g   a n   e v a l - u a t i o n   o f   n e o p l a s m   o n s e t   t i m e   d i s t r i b u t i o n s   f o r   a   v a r i e t y o f   s i t e - s p e c i f i c   n e o p l a s m s   i n   c o n t r o l   F 3 4 4   r a t s   a n d B 6 C 3 F 1   m i c e   ( P o r t i e r   e t   a l . ,   1 9 8 6 ) .     B a i l e r   a n d   P o r t i e r ( 1 9 8 8 )   s h o w e d   t h a t   t h e   P o l y - 3   t e s t   g a v e   v a l i d   r e s u l t s   i f t h e   t r u e   v a l u e   o f   k   w a s   a n y w h e r e   i n   t h e   r a n g e   f r o m 1   t o   5 .     A   f u r t h e r   a d v a n t a g e   o f   t h e   P o l y - 3   m e t h o d   i s   t h a t i t   d o e s   n o t   r e q u i r e   l e s i o n   l e t h a l i t y   a s s u m p t i o n s . V a r i a t i o n   i n t r o d u c e d   b y   t h e   u s e   o f   r i s k   w e i g h t s ,   w h i c h r e f l e c t   d i f f e r e n t i a l   m o r t a l i t y ,   w a s   a c c o m m o d a t e d   b y a d j u s t i n g   t h e   v a r i a n c e   o f   t h e   P o l y - 3   s t a t i s t i c   a s   r e c o m - m e n d e d   b y   B i e l e r   a n d   W i l l i a m s   ( 1 9 9 3 ) . T e s t s   o f   s i g n i f i c a n c e   i n c l u d e d   p a i r w i s e   c o m p a r i s o n s   o f e a c h   e x p o s e d   g r o u p   w i t h   c o n t r o l s   a n d   a   t e s t   f o r   a n o v e r a l l   e x p o s u r e - r e l a t e d   t r e n d .     T h e   t r e n d   w a s   b a s e d o n l y   o n   t h o s e   g r o u p s   w i t h   e q u i v a l e n t   e x p o s u r e   d u r a t i o n ( i . e . ,   t h e   t w o   h i g h e r   e x p o s u r e - c o n c e n t r a t i o n s ,   s t o p - e x p o s u r e   g r o u p s )   a n d   c o n t r o l s .     C o n t i n u i t y - c o r r e c t e d P o l y - 3   t e s t s   w e r e   u s e d   i n   t h e   a n a l y s i s   o f   l e s i o n i n c i d e n c e   a n d   r e p o r t e d   P   v a l u e s   a r e   o n e   s i d e d .   T h e s i g n i f i c a n c e   o f   l o w e r   i n c i d e n c e s   o r   d e c r e a s i n g   t r e n d s   i n l e s i o n s   a r e   r e p r e s e n t e d   a s   1 ! P   w i t h   t h e   l e t t e r   N   a d d e d ( e . g . ,   P = 0 . 9 9   i s   p r e s e n t e d   a s   P = 0 . 0 1 N ) .     F o r   n e o p l a s m s a n d   n o n n e o p l a s t i c   l e s i o n s   d e t e c t e d   a t   t h e   i n t e r i m e v a l u a t i o n ,   t h e   F i s h e r   e x a c t   t e s t   ( G a r t   e t   a l . ,   1 9 7 9 ) ,   a p r o c e d u r e   b a s e d   o n   t h e   o v e r a l l   p r o p o r t i o n   o f   a f f e c t e d a n i m a l s ,   w a s   u s e d .     A n a l y s i s   o f   C o n t i n u o u s   V a r i a b l e s T w o   a p p r o a c h e s   w e r e   e m p l o y e d   t o   a s s e s s   t h e   s i g n i f i - c a n c e   o f   p a i r w i s e   c o m p a r i s o n s   b e t w e e n   e x p o s e d   a n d c o n t r o l   g r o u p s   i n   t h e   a n a l y s i s   o f   c o n t i n u o u s   v a r i a b l e s . O r g a n   a n d   b o d y   w e i g h t   d a t a ,   w h i c h   h i s t o r i c a l l y   h a v e a p p r o x i m a t e l y   n o r m a l   d i s t r i b u t i o n s ,   w e r e   a n a l y z e d   w i t h t h e   p a r a m e t r i c   m u l t i p l e   c o m p a r i s o n   p r o c e d u r e s   o f D u n n e t t   ( 1 9 5 5 )   a n d   W i l l i a m s   ( 1 9 7 1 ,   1 9 7 2 ) .     H e m a - t o l o g y ,   c l i n i c a l   c h e m i s t r y ,   u r i n a l y s i s ,   s p e r m a t i d ,   a n d e p i d i d y m a l   s p e r m a t o z o a l   d a t a ,   w h i c h   h a v e   t y p i c a l l y s k e w e d   d i s t r i b u t i o n s ,   w e r e   a n a l y z e d   u s i n g   t h e   n o n p a r a - m e t r i c   m u l t i p l e   c o m p a r i s o n   m e t h o d s   o f   S h i r l e y   ( 1 9 7 7 ) a n d   D u n n   ( 1 9 6 4 ) .     J o n c k h e e r e ’ s   t e s t   ( J o n c k h e e r e , 1 9 5 4 )   w a s   u s e d   t o   a s s e s s   t h e   s i g n i f i c a n c e   o f   t h e   d o s e - r e l a t e d   t r e n d s   a n d   t o   d e t e r m i n e   w h e t h e r   a   t r e n d - s e n s i t i v e   t e s t   ( W i l l i a m s ’   o r   S h i r l e y ’ s   t e s t )   w a s   m o r e a p p r o p r i a t e   f o r   p a i r w i s e   c o m p a r i s o n s   t h a n   a   t e s t   t h a t d o e s   n o t   a s s u m e   a   m o n o t o n i c   d o s e - r e l a t e d   t r e n d ( D u n n e t t ’ s   o r   D u n n ’ s   t e s t ) .     P r i o r   t o   s t a t i s t i c a l   a n a l y s i s , e x t r e m e   v a l u e s   i d e n t i f i e d   b y   t h e   o u t l i e r   t e s t   o f   D i x o n a n d   M a s s e y   ( 1 9 5 1 )   w e r e   e x a m i n e d   b y   N T P   p e r s o n n e l , a n d   i m p l a u s i b l e   v a l u e s   w e r e   e l i m i n a t e d   f r o m   t h e a n a l y s i s .     A v e r a g e   s e v e r i t y   v a l u e s   w e r e   a n a l y z e d   f o r s i g n i f i c a n c e   w i t h   t h e   M a n n - W h i t n e y   U   t e s t   ( H o l l a n d e r a n d   W o l f e ,   1 9 7 3 ) .     B e c a u s e   v a g i n a l   c y t o l o g y   d a t a   a r e p r o p o r t i o n s   ( t h e   p r o p o r t i o n   o f   t h e   o b s e r v a t i o n   p e r i o d t h a t   a n   a n i m a l   w a s   i n   a   g i v e n   e s t r o u s   s t a g e ) ,   a n   a r c s i n e t r a n s f o r m a t i o n   w a s   u s e d   t o   b r i n g   t h e   d a t a   i n t o   c l o s e r c o n f o r m a n c e   w i t h   a   n o r m a l i t y   a s s u m p t i o n .     T r e a t m e n t e f f e c t s   w e r e   i n v e s t i g a t e d   b y   a p p l y i n g   a   m u l t i v a r i a t e a n a l y s i s   o f   v a r i a n c e   ( M o r r i s o n ,   1 9 7 6 )   t o   t h e   t r a n s - f o r m e d   d a t a   t o   t e s t   f o r   s i m u l t a n e o u s   e q u a l i t y   o f   m e a - s u r e m e n t s   a c r o s s   e x p o s u r e   c o n c e n t r a t i o n s . H i s t o r i c a l   C o n t r o l   D a t a T h e   c o n c u r r e n t   c o n t r o l   g r o u p   r e p r e s e n t s   t h e   m o s t   v a l i d c o m p a r i s o n   t o   t h e   t r e a t e d   g r o u p s   a n d   i s   t h e   o n l y   c o n t r o l g r o u p   a n a l y z e d   s t a t i s t i c a l l y   i n   N T P   b i o a s s a y s .     H o w - e v e r ,   h i s t o r i c a l   c o n t r o l   d a t a   a r e   o f t e n   h e l p f u l   i n i n t e r p r e t i n g   p o t e n t i a l   t r e a t m e n t - r e l a t e d   e f f e c t s ,   p a r t i c - u l a r l y   f o r   u n c o m m o n   o r   r a r e   n e o p l a s m   t y p e s .     F o r m e a n i n g f u l   c o m p a r i s o n s ,   t h e   c o n d i t i o n s   f o r   s t u d i e s   i n t h e   h i s t o r i c a l   d a t a b a s e   m u s t   b e   g e n e r a l l y   s i m i l a r .     U n t i l r e c e n t l y ,   t h e   N T P   h i s t o r i c a l   c o n t r o l   d a t a b a s e   c o n - s i s t e d   o f   a n i m a l s   f e d   N I H - 0 7   d i e t .     I n   1 9 9 5 ,   t h e   N T P c h a n g e d   t h e   d i e t   f e d   t o   a n i m a l s   u s e d   i n   t o x i c i t y   a n d 3 6 I n d i u m   P h o s p h i d e ,   N T P   T R   4 9 9 c a r c i n o g e n e s i s   s t u d i e s   c o n d u c t e d   b y   t h e   N T P .     T h i s n e w   d i e t   ( N T P - 2 0 0 0 )   c o n t a i n s   l e s s   p r o t e i n   a n d   m o r e f i b e r   a n d   f a t   t h a n   t h e   N I H - 0 7   d i e t   p r e v i o u s l y   u s e d ( R a o ,   1 9 9 6 ,   1 9 9 7 ) .     T h i s   d i e t a r y   c h a n g e   w a s   i n s t i t u t e d p r i m a r i l y   t o   i n c r e a s e   l o n g e v i t y   a n d   d e c r e a s e   t h e i n c i d e n c e   a n d / o r   s e v e r i t y   o f   s o m e   s p o n t a n e o u s n e o p l a s t i c   a n d   n o n n e o p l a s t i c   l e s i o n s   i n   t h e   r a t s   a n d m i c e   u s e d   i n   N T P   s t u d i e s .   T h i s   s t u d y   o f   i n d i u m p h o s p h i d e   i s   o n e   o f   t h e   f i r s t   i n   w h i c h   t h e   a n i m a l s   o n s t u d y   w e r e   f e d   t h e   N T P - 2 0 0 0   d i e t .     B e c a u s e   t h e i n c i d e n c e   o f   s o m e   n e o p l a s t i c   a n d   n o n n e o p l a s t i c   l e s i o n s a r e   a f f e c t e d   b y   t h e   d i e t a r y   c h a n g e ,   u s e   o f   t h e   e x i s t i n g h i s t o r i c a l   c o n t r o l   d a t a b a s e   ( N I H - 0 7 )   d i e t   i s   n o t a p p r o p r i a t e   f o r   a l l   n e o p l a s m   t y p e s . C u r r e n t l y ,   t h e   n u m b e r   o f   s t u d i e s   i n   w h i c h   t h e N T P - 2 0 0 0   d i e t   w a s   u s e d   i s   l i m i t e d .     T h i s   d i e t   w a s   u s e d i n   f o u r   s t u d i e s   ( i n d i u m   p h o s p h i d e ,   s o d i u m   n i t r i t e , p , p N - d i c h l o r o p h e n y l   s u l f o n e ,   a n d   n a p h t h a l e n e )   r e p o r t e d a t   t h e   M a y   1 8 ,   2 0 0 0 ,   p e e r   r e v i e w   a n d   i n   t w o   o t h e r s ( m e t h a c r y l o n i t r i l e   a n d   p - n i t r o t o l u e n e )   r e p o r t e d   a t   t h e M a y   3 ,   2 0 0 1   p e e r   r e v i e w .     T h e r e f o r e ,   a   d a t a b a s e   o f i n c i d e n c e s   o f   n e o p l a s t i c   l e s i o n s   w a s   c r e a t e d   f o r   t h i s g r o u p   o f   s i x   s t u d i e s .     F o u r   r o u t e s   o f   a d m i n i s t r a t i o n w e r e   u s e d   i n   t h e s e   s i x   s t u d i e s :   p - n i t r o t o l u e n e   a n d p , p N - d i c h l o r o p h e n y l   s u l f o n e   w e r e   a d m i n i s t e r e d   b y d o s e d   f e e d ;   s o d i u m   n i t r i t e   w a s   a d m i n i s t e r e d   i n   t h e d r i n k i n g   w a t e r ;   m e t h a c r y l o n i t r i l e   w a s   a d m i n i s t e r e d   b y g a v a g e   u s i n g   d e i o n i z e d   w a t e r ;   a n d   n a p h t h a l e n e   a n d i n d i u m   p h o s p h i d e   w e r e   a d m i n i s t e r e d   v i a   w h o l e   b o d y i n h a l a t i o n .     B a s e d   o n   t h e   e x t e n s i v e   N T P   h i s t o r i c a l d a t a b a s e   u s i n g   t h e   N I H - 0 7   d i e t ,   i n c i d e n c e s   o f   t h e   v a s t m a j o r i t y   o f   s p o n t a n e o u s   n e o p l a s m s   a r e   n o t   s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t   b e t w e e n   c o n t r o l   g r o u p s   i r r e s p e c t i v e   o f   t h e r o u t e   o f   a d m i n i s t r a t i o n .     T h e r e   i s   n o   r e a s o n   t o   e x p e c t t h i s   t o   b e   d i f f e r e n t   w i t h   t h e   N T P - 2 0 0 0   d i e t .     C l e a r l y , c o n t r o l   a n i m a l s   f r o m   d o s e d   f e e d   a n d   d o s e d   w a t e r s t u d i e s   a r e   t r e a t e d   n o   d i f f e r e n t l y   a n d   n o   d i f f e r e n c e s   i n i n c i d e n c e   o f   n e o p l a s m s   a r e   e x p e c t e d .     T h e r e   a r e   s o m e e x c e p t i o n s ,   a n d   i f   c o m p a r i s o n s   a r e   n e c e s s a r y   f o r   t h e s e n e o p l a s m   t y p e s ,   o n l y   s t u d i e s   w i t h   s i m i l a r   r o u t e s   o f a d m i n i s t r a t i o n   w i l l   b e   u s e d . T h e   s e t   o f   s i x   s t u d i e s   u s i n g   t h e   N T P - 2 0 0 0   d i e t   w i l l   b e t h e   p r i m a r y   h i s t o r i c a l   c o n t r o l   g r o u p   u s e d   f o r   c o m p a r - i s o n .     H o w e v e r ,   w h e r e   a p p r o p r i a t e ,   t h e   l a r g e r   h i s t o r i c a l d a t a b a s e   ( N I H - 0 7 )   m a y   b e   u s e d   t o   a u g m e n t   t h e   s m a l l e r N T P - 2 0 0 0   d a t a b a s e . Q U A L I T Y   A S S U R A N C E   M E T H O D S T h e   1 4 - w e e k   a n d   2 - y e a r   s t u d i e s   w e r e   c o n d u c t e d   i n c o m p l i a n c e   w i t h   F o o d   a n d   D r u g   A d m i n i s t r a t i o n   G o o d L a b o r a t o r y   P r a c t i c e   R e g u l a t i o n s   ( 2 1   C F R ,   P a r t   5 8 ) .     I n a d d i t i o n ,   a s   r e c o r d s   f r o m   t h e   2 - y e a r   s t u d i e s   w e r e s u b m i t t e d   t o   t h e   N T P   A r c h i v e s ,   t h e s e   s t u d i e s   w e r e a u d i t e d   r e t r o s p e c t i v e l y   b y   a n   i n d e p e n d e n t   q u a l i t y a s s u r a n c e   c o n t r a c t o r .     S e p a r a t e   a u d i t s   c o v e r e d   c o m - p l e t e n e s s   a n d   a c c u r a c y   o f   t h e   p a t h o l o g y   d a t a ,   p a t h o l o g y s p e c i m e n s ,   f i n a l   p a t h o l o g y   t a b l e s ,   a n d   a   d r a f t   o f   t h i s N T P   T e c h n i c a l   R e p o r t .     A u d i t   p r o c e d u r e s   a n d   f i n d i n g s a r e   p r e s e n t e d   i n   t h e   r e p o r t s   a n d   a r e   o n   f i l e   a t   N I E H S . T h e   a u d i t   f i n d i n g s   w e r e   r e v i e w e d   a n d   a s s e s s e d   b y   N T P s t a f f ,   a n d   a l l   c o m m e n t s   w e r e   r e s o l v e d   o r   o t h e r w i s e a d d r e s s e d   d u r i n g   t h e   p r e p a r a t i o n   o f   t h i s   T e c h n i c a l R e p o r t . G E N E T I C   T O X I C O L O G Y T h e   g e n e t i c   t o x i c i t y   o f   i n d i u m   p h o s p h i d e   w a s a s s e s s e d   i n   a   m o u s e   p e r i p h e r a l   b l o o d   m i c r o n u c l e u s a s s a y .     T h e   p r o t o c o l   f o r   t h i s   s t u d y   a n d   t h e   r e s u l t s   a r e g i v e n   i n   A p p e n d i x   E . C l e a r l y   p o s i t i v e   r e s p o n s e s   i n   l o n g - t e r m   p e r i p h e r a l b l o o d   m i c r o n u c l e u s   t e s t s   a r e   a s s o c i a t e d   w i t h   h i g h p r e d i c t i v i t y   f o r   r o d e n t   c a r c i n o g e n i c i t y   ( W i t t   e t   a l . , 2 0 0 0 ) ;   n e g a t i v e   r e s u l t s   i n   t h i s   a s s a y   d o   n o t   c o r r e l a t e w e l l   w i t h   e i t h e r   n e g a t i v e   o r   p o s i t i v e   r e s u l t s   i n   r o d e n t c a r c i n o g e n i c i t y   s t u d i e s .     B e c a u s e   o f   t h e   t h e o r e t i c a l   a n d o b s e r v e d   a s s o c i a t i o n s   b e t w e e n   i n d u c e d   g e n e t i c   d a m a g e a n d   a d v e r s e   e f f e c t s   i n   s o m a t i c   a n d   g e r m   c e l l s ,   t h e d e t e r m i n a t i o n   o f   i n   v i v o   g e n e t i c   e f f e c t s   i s   i m p o r t a n t t o   t h e   o v e r a l l   u n d e r s t a n d i n g   o f   t h e   r i s k s   a s s o c i a t e d   w i t h e x p o s u r e   t o   a   p a r t i c u l a r   c h e m i c a l .   3 7 R E S U L T S R A T S 1 4 - W E E K   S T U D Y O n e   m a l e   i n   t h e   1 0 0   m g / m 3   g r o u p   d i e d   b e f o r e   t h e   e n d o f   t h e   s t u d y   ( T a b l e   3 ) .     F i n a l   m e a n   b o d y   w e i g h t s   a n d b o d y   w e i g h t   g a i n s   o f   a l l   e x p o s e d   g r o u p s   o f   m a l e s a n d   o f   f e m a l e s   i n   t h e   1 0 0   m g / m 3   g r o u p   w e r e s i g n i f i c a n t l y   l e s s   t h a n   t h o s e   o f   t h e   c h a m b e r   c o n t r o l s . S h a l l o w ,   r a p i d ,   a b n o r m a l   b r e a t h i n g   w a s   o b s e r v e d   i n m a l e s   a n d   f e m a l e s   e x p o s e d   t o   3 0   o r   1 0 0   m g / m 3 . A n i m a l s   i n   t h e   1 0 0   m g / m 3   g r o u p s   e x h i b i t e d   l e t h a r g y , t h i n n e s s ,   a n d   r u f f l e d   f u r . I n   a l l   e x p o s e d   g r o u p s   o f   m a l e   a n d   f e m a l e   r a t s   o n   d a y   2 3 a n d   a t   w e e k   1 4 ,   t h e r e   w a s   e v i d e n c e   o f   a n   e x p o s u r e c o n c e n t r a t i o n - r e l a t e d   e r y t h r o c y t o s i s ,   d e m o n s t r a t e d   b y i n c r e a s e d   h e m a t o c r i t   v a l u e s ,   h e m o g l o b i n   c o n c e n - t r a t i o n s ,   a n d   e r y t h r o c y t e   c o u n t s   ( T a b l e s   4   a n d   F 1 ) .     A t w e e k   1 4 ,   t h e   e r y t h r o c y t o s i s   w a s   a c c o m p a n i e d   b y i n c r e a s e d   r e t i c u l o c y t e   a n d   n u c l e a t e d   e r y t h r o c y t e   c e l l c o u n t s   i n   t h e   1 0 0   m g / m 3   g r o u p s ,   w h i c h   i s   c o n s i s t e n t w i t h   i n c r e a s e d   e r y t h r o p o i e t i c   a c t i v i t y .     A t   w e e k   1 4 ,   t h e e r y t h r o c y t e   i n d i c e s   ( m e a n   c e l l   v o l u m e ,   m e a n   c e l l h e m o g l o b i n ,   a n d   m e a n   c e l l   h e m o g l o b i n   c o n c e n t r a t i o n ) d e m o n s t r a t e d   e x p o s u r e   c o n c e n t r a t i o n - r e l a t e d   d e c r e a s e s T A B L E   3 S u r v i v a l   a n d   B o d y   W e i g h t s   o f   R a t s   i n   t h e   1 4 - W e e k   I n h a l a t i o n   S t u d y   o f   I n d i u m   P h o s p h i d e   M e a n   B o d y   W e i g h t b   ( g ) F i n a l   W e i g h t C o n c e n t r a t i o n S u r v i v a l a I n i t i a l F i n a l C h a n g e R e l a t i v e   t o   C o n t r o l s ( m g / m 3 ) ( % ) M a l e 0 1 0 / 1 0 1 2 8   ±   1 3 6 5   ±   6 2 3 8   ±   5 1 1 0 / 1 0 1 2 4   ±   3 3 4 1   ±   7 * * 2 1 7   ±   6 * * 9 3 3 1 0 / 1 0 1 2 5   ±   3   3 2 0   ±   5 * * 1 9 5   ±   3 * * 8 8 1 0 1 0 / 1 0 1 2 1   ±   3 3 3 0   ±   4 * * 2 0 9   ±   3 * * 9 0 3 0 1 0 / 1 0 1 2 4   ±   2 3 2 4   ±   9 * *   2 0 0   ±   8 * * 8 9 1 0 0 9 / 1 0 c 1 2 6   ±   2 1 7 6   ±   5 * * 5 0   ±   5 * * 4 8 F e m a l e 0 1 0 / 1 0 1 0 6   ±   1 2 0 3   ±   3 9 7   ±   2 1 1 0 / 1 0 1 0 7   ±   2 2 0 3   ±   3 9 6   ±   3 1 0 0 3 1 0 / 1 0 1 0 5   ±   1 1 9 5   ±   4 8 9   ±   4 9 6 1 0 1 0 / 1 0 1 0 9   ±   2 2 0 4   ±   3 9 5   ±   3 1 0 1 3 0 1 0 / 1 0 1 0 5   ±   2 1 9 4   ±   5 8 9   ±   4 9 5 1 0 0 1 0 / 1 0 1 0 6   ±   2 1 2 1   ±   3 * * 1 5   ±   3 * * 6 0 * * S i g n i f i c a n t l y   d i f f e r e n t   ( P # 0 . 0 1 )   f r o m   t h e   c h a m b e r   c o n t r o l   g r o u p   b y   W i l l i a m s ’   o r   D u n n e t t ’ s   t e s t a N u m b e r   o f   a n i m a l s   s u r v i v i n g   a t   1 4   w e e k s / n u m b e r   i n i t i a l l y   i n   g r o u p b W e i g h t s   a n d   w e i g h t   c h a n g e s   a r e   g i v e n   a s   m e a n   ±   s t a n d a r d   e r r o r .     S u b s e q u e n t   c a l c u l a t i o n s   a r e   b a s e d   o n   a n i m a l s   s u r v i v i n g   t o   t h e   e n d   o f   t h e   s t u d y . c W e e k   o f   d e a t h :     1 3 3 8 I n d i u m   P h o s p h i d e ,   N T P   T R   4 9 9 T A B L E   4 S e l e c t e d   H e m a t o l o g y   D a t a   f o r   R a t s   i n   t h e   1 4 - W e e k   I n h a l a t i o n   S t u d y   o f   I n d i u m   P h o s p h i d e a C h a m b e r C o n t r o l 1   m g / m 3 3   m g / m 3 1 0   m g / m 3 3 0   m g / m 3 1 0 0   m g / m 3 M a l e n D a y   3 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 D a y   2 3 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 W e e k   1 4 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0     9 H e m a t o l o g y M a n u a l   h e m a t o c r i t   ( % )   D a y   3 4 7 . 2   ±   0 . 4 4 7 . 5   ±   0 . 4 4 7 . 4   ±   0 . 4 4 7 . 0   ±   0 . 4 4 7 . 5   ±   0 . 4 4 7 . 0   ±   0 . 4   D a y   2 3 5 1 . 7   ±   0 . 3 5 3 . 2   ±   0 . 4 5 3 . 1   ±   0 . 6 * 5 2 . 7   ±   0 . 3 5 3 . 5   ±   0 . 3 * * 5 3 . 0   ±   0 . 3 W e e k   1 4 4 7 . 0   ±   0 . 3 4 9 . 6   ±   0 . 2 * * 5 1 . 4   ±   0 . 4 * * 5 0 . 4   ±   0 . 3 * * 5 0 . 5   ±   0 . 5 * * 5 5 . 3   ±   1 . 6 * *         A u t o m a t e d   h e m a t o c r i t   ( % )   D a y   3 4 4 . 6   ±   0 . 3 4 5 . 1   ±   0 . 5 4 4 . 8   ±   0 . 4 4 4 . 4   ±   0 . 4 4 5 . 5   ±   0 . 5 4 5 . 0   ±   0 . 4   D a y   2 3 4 9 . 5   ±   0 . 2 5 2 . 0   ±   0 . 4 * * 5 1 . 3   ±   0 . 5 * 5 1 . 1   ±   0 . 2 * 5 2 . 5   ±   0 . 4 * * 5 1 . 1   ±   0 . 2 *   W e e k   1 4 4 5 . 4   ±   0 . 4 4 8 . 1   ±   0 . 3 * * 4 9 . 5   ±   0 . 4 * * 4 9 . 3   ±   0 . 5 * * 4 9 . 7   ±   0 . 7 * * 5 4 . 0   ±   1 . 7 * * H e m o g l o b i n   ( g / d L )   D a y   3 1 4 . 9   ±   0 . 1 1 5 . 3   ±   0 . 1 1 5 . 1   ±   0 . 2 1 4 . 9   ±   0 . 1 1 5 . 2   ±   0 . 1 1 5 . 0   ±   0 . 1 D a y   2 3 1 6 . 7   ±   0 . 1 1 7 . 5   ±   0 . 1 * * 1 7 . 4   ±   0 . 1 * * 1 7 . 3   ±   0 . 1 * 1 7 . 7   ±   0 . 2 * * 1 7 . 2   ±   0 . 1 W e e k   1 4 1 5 . 2   ±   0 . 2 1 6 . 3   ±   0 . 1 * * 1 7 . 0   ±   0 . 2 * * 1 6 . 6   ±   0 . 2 * * 1 6 . 5   ±   0 . 2 * * 1 6 . 6   ±   0 . 4 * * E r y t h r o c y t e s   ( 1 0 6 / µ L   )   D a y   3 7 . 0 6   ±   0 . 0 8 7 . 1 7   ±   0 . 1 0 7 . 1 7   ±   0 . 1 1 7 . 1 1   ±   0 . 0 8 7 . 2 5   ±   0 . 0 9 7 . 2 4   ±   0 . 1 0   D a y   2 3 7 . 9 7   ±   0 . 0 5 8 . 4 1   ±   0 . 0 7 * * 8 . 2 7   ±   0 . 1 0 * * 8 . 2 5   ±   0 . 0 4 * * 8 . 4 8   ±   0 . 0 7 * * 8 . 2 9   ±   0 . 0 5 * *   W e e k   1 4 8 . 3 4   ±   0 . 0 9 8 . 8 3   ±   0 . 0 6 * * 9 . 2 5   ±   0 . 0 7 * * 9 . 3 7   ±   0 . 1 0 * * 9 . 7 5   ±   0 . 1 5 * * 1 0 . 5 2   ±   0 . 1 3 * *   R e t i c u l o c y t e s   ( 1 0 6 / µ L   )   D a y   3 0 . 3 5   ±   0 . 0 4 0 . 2 5   ±   0 . 0 2 0 . 2 6   ±   0 . 0 4 0 . 1 7   ±   0 . 0 2 * * 0 . 2 1   ±   0 . 0 2 * * 0 . 1 7   ±   0 . 0 3 * *   D a y   2 3 0 . 1 3   ±   0 . 0 2 0 . 1 2   ±   0 . 0 2 0 . 1 2   ±   0 . 0 2 0 . 1 4   ±   0 . 0 2 0 . 1 3   ±   0 . 0 2 0 . 1 1   ±   0 . 0 1   W e e k   1 4 0 . 1 0   ±   0 . 0 1 0 . 0 8   ±   0 . 0 1 0 . 0 9   ±   0 . 0 1 0 . 0 9   ±   0 . 0 1 0 . 1 2   ±   0 . 0 2 0 . 4 4   ±   0 . 0 5 * *   M e a n   c e l l   v o l u m e   ( f L )   D a y   3 6 3 . 1   ±   0 . 4 6 2 . 9   ±   0 . 3 6 2 . 6   ±   0 . 3 6 2 . 4   ±   0 . 4 6 2 . 8   ±   0 . 4 6 2 . 1   ±   0 . 3   D a y   2 3 6 2 . 1   ±   0 . 3 6 1 . 9   ±   0 . 3 6 2 . 3   ±   0 . 3 6 2 . 0   ±   0 . 2 6 2 . 0   ±   0 . 3 6 1 . 7   ±   0 . 3   W e e k   1 4 5 4 . 3   ±   0 . 3 5 4 . 5   ±   0 . 2 5 3 . 6   ±   0 . 2 5 2 . 5   ±   0 . 2 * * 5 0 . 9   ±   0 . 2 * * 5 1 . 2   ±   1 . 0 * * M e a n   c e l l   h e m o g l o b i n   ( p g )   D a y   3 2 1 . 1   ±   0 . 1 2 1 . 3   ±   0 . 1 2 1 . 0   ±   0 . 2 2 1 . 0   ±   0 . 1 2 0 . 9   ±   0 . 2 2 0 . 8   ±   0 . 2   D a y   2 3 2 1 . 0   ±   0 . 1 2 0 . 8   ±   0 . 1 2 1 . 0   ±   0 . 1 2 0 . 9   ±   0 . 1 2 0 . 8   ±   0 . 1 2 0 . 8   ±   0 . 2   W e e k   1 4 1 8 . 3   ±   0 . 1 1 8 . 5   ±   0 . 1 1 8 . 3   ±   0 . 1 1 7 . 7   ±   0 . 1 * * 1 6 . 9   ±   0 . 1 * * 1 5 . 8   ±   0 . 2 * *   M e a n   c e l l   h e m o g l o b i n   c o n c e n t r a t i o n   ( g / d L )   D a y   3 3 3 . 4   ±   0 . 2 3 3 . 9   ±   0 . 1 3 3 . 6   ±   0 . 2 3 3 . 6   ±   0 . 2 3 3 . 3   ±   0 . 2 3 3 . 4   ±   0 . 3   D a y   2 3 3 3 . 8   ±   0 . 1 3 3 . 6   ±   0 . 2 3 3 . 9   ±   0 . 1 3 3 . 7   ±   0 . 1 3 3 . 6   ±   0 . 1 3 3 . 7   ±   0 . 1   W e e k   1 4 3 3 . 6   ±   0 . 2 3 4 . 0   ±   0 . 2 3 4 . 2   ±   0 . 2 3 3 . 6   ±   0 . 1 3 3 . 1   ±   0 . 2 3 0 . 8   ±   0 . 3 * * I n d i u m   P h o s p h i d e ,   N T P   T R   4 9 9 3 9 T A B L E   4 S e l e c t e d   H e m a t o l o g y   D a t a   f o r   R a t s   i n   t h e   1 4 - W e e k   I n h a l a t i o n   S t u d y   o f   I n d i u m   P h o s p h i d e C h a m b e r C o n t r o l 1   m g / m 3 3   m g / m 3 1 0   m g / m 3 3 0   m g / m 3 1 0 0   m g / m 3 F e m a l e n 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 H e m a t o l o g y M a n u a l   h e m a t o c r i t   ( % )   D a y   3 5 0 . 5   ±   0 . 6 4 8 . 9   ±   0 . 5 4 8 . 7   ±   0 . 6 4 8 . 6   ±   0 . 5 4 9 . 2   ±   0 . 7 4 9 . 3   ±   0 . 5   D a y   2 3 5 0 . 6   ±   0 . 7 5 2 . 0   ±   0 . 2 * 5 1 . 6   ±   0 . 3 5 1 . 9   ±   0 . 4 5 2 . 6   ±   0 . 4 * * 5 3 . 2   ±   0 . 3 * *   W e e k   1 4 4 6 . 0   ±   0 . 4 4 8 . 5   ±   0 . 4 * * 4 9 . 4   ±   0 . 5 * * 5 0 . 6   ±   0 . 5 * * 5 0 . 4   ±   0 . 4 * * 4 8 . 4   ±   1 . 4 * *   A u t o m a t e d   h e m a t o c r i t   ( % )   D a y   3 4 8 . 7   ±   0 . 7 4 6 . 7   ±   0 . 4 4 6 . 5   ±   0 . 7 4 6 . 2   ±   0 . 5 * 4 7 . 3   ±   0 . 6 4 7 . 4   ±   0 . 5   D a y   2 3 5 0 . 4   ±   0 . 5 5 2 . 1   ±   0 . 4 * * 5 2 . 0   ±   0 . 4 * 5 1 . 8   ±   0 . 4 * 5 2 . 8   ±   0 . 4 * * 5 3 . 2   ±   0 . 3 * *   W e e k   1 4 4 5 . 0   ±   0 . 3 4 7 . 3   ±   0 . 5 * * 4 8 . 0   ±   0 . 3 * * 4 9 . 7   ±   0 . 3 * * 4 9 . 3   ±   0 . 3 * * 4 8 . 4   ±   1 . 3 * *   H e m o g l o b i n   ( g / d L )   D a y   3 1 6 . 2   ±   0 . 2 1 5 . 9   ±   0 . 1 1 5 . 7   ±   0 . 2 1 5 . 6   ±   0 . 2 1 6 . 0   ±   0 . 2 1 6 . 1   ±   0 . 2   D a y   2 3 1 7 . 1   ±   0 . 2 1 7 . 7   ±   0 . 1 * 1 7 . 8   ±   0 . 2 * 1 7 . 7   ±   0 . 1 * 1 8 . 0   ±   0 . 1 * * 1 8 . 1   ±   0 . 1 * *   W e e k   1 4 1 5 . 6   ±   0 . 1 1 6 . 5   ±   0 . 1 1 6 . 6   ±   0 . 2 * 1 7 . 2   ±   0 . 1 * * 1 6 . 9   ±   0 . 1 * * 1 5 . 3   ±   0 . 3   E r y t h r o c y t e s   ( 1 0 6 / µ L )   D a y   3 7 . 8 4   ±   0 . 1 3 7 . 5 6   ±   0 . 0 8 7 . 6 5   ±   0 . 1 3 7 . 4 5   ±   0 . 1 3 7 . 6 9   ±   0 . 0 9 7 . 7 9   ±   0 . 1 0   D a y   2 3 8 . 1 4   ±   0 . 0 9 8 . 3 4   ±   0 . 0 6 8 . 3 3   ±   0 . 0 6 8 . 3 3   ±   0 . 1 0 8 . 5 6   ±   0 . 0 9 * * 8 . 5 3   ±   0 . 0 8 * *   W e e k   1 4 7 . 7 7   ±   0 . 0 7 8 . 0 8   ±   0 . 0 8 * 8 . 2 7   ±   0 . 0 6 * * 8 . 6 9   ±   0 . 0 6 * * 8 . 7 1   ±   0 . 0 7 * * 1 0 . 2 6   ±   0 . 1 9 * *   R e t i c u l o c y t e s   ( 1 0 6 / µ L )   D a y   3 0 . 1 1   ±   0 . 0 1 0 . 1 1   ±   0 . 0 1 0 . 1 2   ±   0 . 0 1 0 . 1 3   ±   0 . 0 1 0 . 1 1   ±   0 . 0 1 0 . 0 9   ±   0 . 0 1   D a y   2 3 0 . 0 7   ±   0 . 0 1 0 . 0 9   ±   0 . 0 2 0 . 1 1   ±   0 . 0 2 0 . 0 8   ±   0 . 0 1 0 . 0 6   ±   0 . 0 0 0 . 0 7   ±   0 . 0 1   W e e k   1 4 0 . 0 8   ±   0 . 0 1 0 . 0 5   ±   0 . 0 1 0 . 0 5   ±   0 . 0 1 0 . 0 8   ±   0 . 0 1 0 . 1 0   ±   0 . 0 1 0 . 3 6   ±   0 . 0 9 * *   M e a n   c e l l   v o l u m e   ( f L ) D a y   3 6 2 . 1   ±   0 . 3 6 1 . 6   ±   0 . 2 6 0 . 9   ±   0 . 3 * 6 1 . 9   ±   0 . 5 6 1 . 5   ±   0 . 3 6 0 . 9   ±   0 . 3 * D a y   2 3 6 1 . 8   ±   0 . 4 6 2 . 5   ±   0 . 3 6 2 . 5   ±   0 . 3 6 2 . 2   ±   0 . 4 6 1 . 8   ±   0 . 3 6 2 . 4   ±   0 . 3 W e e k   1 4 5 8 . 1   ±   0 . 2 5 8 . 5   ±   0 . 2 5 7 . 9   ±   0 . 2 5 7 . 1   ±   0 . 2 * * 5 6 . 6   ±   0 . 4 * * 4 7 . 2   ±   0 . 7 * * M e a n   c e l l   h e m o g l o b i n   ( p g )   D a y   3 2 0 . 7   ±   0 . 1 2 1 . 0   ±   0 . 1 2 0 . 6   ±   0 . 1 2 1 . 0   ±   0 . 2 2 0 . 8   ±   0 . 2 2 0 . 7   ±   0 . 1   D a y   2 3 2 1 . 1   ±   0 . 1 2 1 . 2   ±   0 . 1 2 1 . 4   ±   0 . 1 2 1 . 3   ±   0 . 2 2 1 . 0   ±   0 . 1 2 1 . 1   ±   0 . 1   W e e k   1 4 2 0 . 1   ±   0 . 1 2 0 . 3   ±   0 . 1 2 0 . 1   ±   0 . 1 1 9 . 8   ±   0 . 1 1 9 . 4   ±   0 . 2 * * 1 4 . 9   ±   0 . 2 * *   M e a n   c e l l   h e m o g l o b i n   c o n c e n t r a t i o n   ( g / d L )   D a y   3 3 3 . 3   ±   0 . 2 3 4 . 0   ±   0 . 2 3 3 . 8   ±   0 . 2 3 3 . 8   ±   0 . 2 3 3 . 7   ±   0 . 2 3 4 . 0   ±   0 . 2   D a y   2 3 3 3 . 9   ±   0 . 1 3 3 . 9   ±   0 . 1 3 4 . 2   ±   0 . 2 3 4 . 2   ±   0 . 1 3 4 . 0   ±   0 . 2 3 3 . 9   ±   0 . 1   W e e k   1 4 3 4 . 7   ±   0 . 2 3 4 . 8   ±   0 . 2 3 4 . 6   ±   0 . 1 3 4 . 6   ±   0 . 2 3 4 . 3   ±   0 . 2 3 1 . 7   ±   0 . 2 * *   * S i g n i f i c a n t l y   d i f f e r e n t   ( P # 0 . 0 5 )   f r o m   t h e   c h a m b e r   c o n t r o l   g r o u p   b y   D u n n ’ s   o r   S h i r l e y ’ s   t e s t   * * P # 0 . 0 1 a M e a n   ±   s t a n d a r d   e r r o r .     S t a t i s t i c a l   t e s t s   w e r e   p e r f o r m e d   o n   u n r o u n d e d   d a t a . 4 0 I n d i u m   P h o s p h i d e ,   N T P   T R   4 9 9 i n   t h e   1 0   m g / m 3   o r   g r e a t e r   f e m a l e   a n d / o r   m a l e   g r o u p s s u g g e s t i n g   t h a t   f o r   t h e   h i g h - e x p o s u r e   a n i m a l s ,   t h e c i r c u l a t i n g   e r y t h r o c y t e s   w e r e   s m a l l e r   a n d   c o n t a i n e d   l e s s h e m o g l o b i n   t h a n   w o u l d   b e   e x p e c t e d . O n   d a y s   3   a n d   2 3 ,   t h e r e   w a s   e v i d e n c e   o f   a   t r a n s i e n t , e x p o s u r e - r e l a t e d   d e c r e a s e   i n   t h e   l e u k o c y t e   c o u n t ( T a b l e   F 1 ) .     B y   d a y   2 3 ,   t h i s   e f f e c t   o c c u r r e d   i n   a l l e x p o s e d   g r o u p s   o f   m a l e s   a n d   i n   3 0   a n d   1 0 0   m g / m 3 f e m a l e s .     T h e   d e c r e a s e d   l e u k o c y t e   c o u n t s   a p p e a r e d   t o b e   r e l a t e d   t o   t h e   d e c r e a s e d   l y m p h o c y t e   c o u n t s .     T h i s a l t e r a t i o n   i n   l y m p h o c y t e   c o u n t s   s u g g e s t s   a   t r a n s i e n t p h y s i o l o g i c a l   r e s p o n s e   a n d   w o u l d   b e   c o n s i s t e n t   w i t h   a s t r e s s - r e l a t e d / c o r t i c o s t e r o i d - i n d u c e d   l y m p h o p e n i a . R a t s   a r e   c o n s i d e r e d   a   s t e r o i d - s e n s i t i v e   s p e c i e s   a n d c o r t i c o s t e r o i d - i n d u c e d   l y m p h o p e n i a   m a y   b e   r e l a t e d   t o l y m p h o l y s i s   i n   b l o o d   a n d   a l t e r e d   d i s t r i b u t i o n   ( J a i n , 1 9 8 6 ) .     I n   c o n t r a s t ,   a t   w e e k   1 4 ,   l e u k o c y t e   c o u n t s   w e r e i n c r e a s e d   i n   1 0   m g / m 3   m a l e s   a n d   3 0   a n d   1 0 0   m g / m 3 m a l e s   a n d   f e m a l e s .     T h e   i n c r e a s e d   l e u k o c y t e   c o u n t s a p p e a r e d   t o   b e   r e l a t e d   t o   a n   a l t e r a t i o n   i n   n e u t r o p h i l n u m b e r s .     N e u t r o p h i l   c o u n t s   d e m o n s t r a t e d   e x p o s u r e - r e l a t e d   i n c r e a s e s   i n   a l l   e x p o s e d   g r o u p s   o f   m a l e s   a n d f e m a l e s   a n d   m a y ,   i n   p a r t ,   b e   a t t r i b u t e d   t o   t h e   p u l m o n a r y i n f l a m m a t i o n   o b s e r v e d   m i c r o s c o p i c a l l y . P l a t e l e t   c o u n t s   d e m o n s t r a t e d   d e c r e a s e s   i n   v a r i o u s h i g h e r   e x p o s u r e   g r o u p s   ( T a b l e   F 1 ) .     B e c a u s e   o f   t h e m i n i m a l   t o   m i l d   s e v e r i t y   a n d   t h e   l a c k   o f   a n   e x p o s u r e - c o n c e n t r a t i o n   r e l a t i o n s h i p ,   a l t e r a t i o n s   i n   p l a t e l e t   c o u n t s w e r e   n o t   c o n s i d e r e d   c l i n i c a l l y   o r   t o x i c o l o g i c a l l y r e l e v a n t . T h e   s e r u m   a n d   u r i n e   c h e m i s t r y   d a t a   f o r   r a t s   i n   t h e 1 4 - w e e k   s t u d y   o f   i n d i u m   p h o s p h i d e   a r e   l i s t e d   i n T a b l e   F 1 .     O n   d a y   2 3   a n d   a t   w e e k   1 4 ,   t h e r e   w a s   e v i - d e n c e   o f   a   h e p a t o c e l l u l a r   e f f e c t   d e m o n s t r a t e d   b y i n c r e a s e s   i n   s e r u m   a l a n i n e   a m i n o t r a n s f e r a s e   a n d   s o r b i - t o l   d e h y d r o g e n a s e   a c t i v i t i e s .     B y   w e e k   1 4 ,   i n c r e a s e d a l a n i n e   a m i n o t r a n s f e r a s e   a n d   s o r b i t o l   d e h y d r o g e n a s e a c t i v i t i e s   o c c u r r e d   i n   1 0   m g / m 3   o r   g r e a t e r   f e m a l e s   a n d i n   a l l   g r o u p s   o f   e x p o s e d   m a l e s ,   w h i c h   i s   c o n s i s t e n t   w i t h t h e   h e p a t o c e l l u l a r   n e c r o s i s   o b s e r v e d   m i c r o s c o p i c a l l y . A l s o   a t   w e e k   1 4 ,   d e c r e a s e d   t o t a l   p r o t e i n ,   a l b u m i n ,   a n d c r e a t i n i n e ,   a n d   i n c r e a s e d   u r e a   n i t r o g e n   c o n c e n t r a t i o n s o c c u r r e d   i n   1 0 0   m g / m 3   m a l e s   a n d   f e m a l e s ,   w h i c h   i s c o n s i s t e n t   w i t h   t h e   d e c r e a s e d   w e i g h t   g a i n   i n   t h e s e e x p o s e d   g r o u p s   a n d   p o s s i b l y   r e f l e c t s   a   c o m p r o m i s e d n u t r i t i o n a l   s t a t u s . L u n g   w e i g h t s   o f   a l l   e x p o s e d   g r o u p s   o f   m a l e s   a n d f e m a l e s   w e r e   s i g n i f i c a n t l y   g r e a t e r   t h a n   t h o s e   o f   t h e c h a m b e r   c o n t r o l s   a n d   g e n e r a l l y   i n c r e a s e d   w i t h   i n c r e a s - i n g   e x p o s u r e   c o n c e n t r a t i o n   ( T a b l e s   5   a n d   G 1 ) .     T h e 2 . 7 -   t o   4 . 4 - f o l d   i n c r e a s e s   i n   t h e   a b s o l u t e   l u n g   w e i g h t s w e r e   a t t r i b u t e d   p r i m a r i l y   t o   t h e   a c c u m u l a t i o n   o f p r o t e i n a c e o u s   f l u i d   ( a l v e o l a r   p r o t e i n o s i s )   w i t h i n   t h e a l v e o l i . R e l a t i v e   h e a r t   w e i g h t s   w e r e   s i g n i f i c a n t l y   i n c r e a s e d   i n 3 0   a n d   1 0 0   m g / m 3   m a l e s   a n d   f e m a l e s ,   a n d   a b s o l u t e h e a r t   w e i g h t s   w e r e   i n c r e a s e d   i n   1 0   m g / m 3   o r   g r e a t e r f e m a l e s .     T h e   i n c r e a s e d   h e a r t   w e i g h t s   w e r e   l i k e l y   a c o m b i n a t i o n   o f   d i s p r o p o r t i o n a t e l y   l o w e r   b o d y   w e i g h t s a n d   p h y s i o l o g i c a l   h y p e r t r o p h y   d u e   t o   p o s s i b l e c o m p r o m i s e d   p u l m o n a r y   f u n c t i o n   ( c o r   p u l m o n a l e s e c o n d a r y   t o   h y p e r t e n s i o n   c a u s e d   b y   t h e   l u n g   l e s i o n s ) . T h y m u s   w e i g h t s   w e r e   d e c r e a s e d   i n   1 0 0   m g / m 3   m a l e s a n d   f e m a l e s   c o m p a r e d   t o   t h o s e   o f   t h e   c h a m b e r   c o n t r o l s ; t h e s e   d e c r e a s e s   w e r e   c o n s i d e r e d   t o   b e   r e l a t e d   t o   t h e d e b i l i t a t e d   s t a t e   o f   t h e   a n i m a l s .     A l t e r a t i o n s   i n   o t h e r o r g a n   w e i g h t s   w e r e   a t t r i b u t e d   p r i m a r i l y   t o   t h e s i g n i f i c a n t   b o d y   w e i g h t   d e c r e a s e s . G r o s s   e x p o s u r e - r e l a t e d   l e s i o n s   w e r e   o b s e r v e d   i n   t h e l u n g s   a n d   g e n e r a l l y   i n c r e a s e d   i n   s e v e r i t y   w i t h   i n c r e a s - i n g   e x p o s u r e   c o n c e n t r a t i o n .     L u n g s   o f   a l l   e x p o s e d   r a t s w e r e   e n l a r g e d   a n d   h a d   a   g r a y   t o   b l a c k   d i s c o l o r a t i o n   a n d a   g r a n u l a r   t o   d i m p l e d   a p p e a r a n c e . I n d i u m   P h o s p h i d e ,   N T P   T R   4 9 9 4 1 T A B L E   5 L u n g   W e i g h t s   a n d   L u n g - W e i g h t - t o - B o d y - W e i g h t   R a t i o s   f o r   R a t s   i n   t h e   1 4 - W e e k   I n h a l a t i o n   S t u d y   o f   I n d i u m   P h o s p h i d e a C h a m b e r C o n t r o l 1   m g / m 3 3   m g / m 3 1 0   m g / m 3 3 0   m g / m 3 1 0 0   m g / m 3 M a l e n 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 9 N e c r o p s y   b o d y   w t 3 6 5   ±   6 3 4 1   ±   7 * * 3 2 2   ±   5 * * 3 3 1   ±   4 * * 3 2 5   ±   9 * * 1 7 2   ±   6 * *   L u n g A b s o l u t e 1 . 9 6 9   ±   0 . 1 3 0 5 . 3 2 6   ±   0 . 1 4 5 * * 6 . 4 5 1   ±   0 . 1 6 9 * * 6 . 3 4 1   ±   0 . 1 1 3 * * 7 . 1 5 9   ±   0 . 1 9 0 * * 5 . 0 8 0   ±   0 . 1 6 2 * *   R e l a t i v e 0 . 5 4 0   ±   0 . 0 3 4 1 . 5 6 3   ±   0 . 0 2 3 * * 2 . 0 0 1   ±   0 . 0 4 5 * * 1 . 9 1 4   ±   0 . 0 2 3 * * 2 . 2 0 5   ±   0 . 0 4 1 * * 2 . 9 5 7   ±   0 . 0 3 9 * *   F e m a l e n 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 N e c r o p s y   b o d y   w t 2 0 6   ±   3 2 0 5   ±   3 1 9 9   ±   4 2 0 6   ±   3 1 9 6   ±   5 1 1 7   ±   3 * *   L u n g A b s o l u t e 1 . 2 2 0   ±   0 . 0 5 1 3 . 4 4 1   ±   0 . 1 0 4 * * 3 . 8 7 6   ±   0 . 0 8 9 * * 4 . 6 2 1   ±   0 . 0 9 9 * * 5 . 3 0 3   ±   0 . 2 0 0 * * 3 . 8 9 9   ±   0 . 1 2 3 * *   R e l a t i v e 0 . 5 9 0   ±   0 . 0 1 9 1 . 6 7 8   ±   0 . 0 4 7 * * 1 . 9 5 3   ±   0 . 0 5 2 * * 2 . 2 4 6   ±   0 . 0 6 3 * * 2 . 7 0 9   ±   0 . 0 8 0 * * 3 . 3 3 4   ±   0 . 0 6 3 * *   * * S i g n i f i c a n t l y   d i f f e r e n t   ( P # 0 . 0 1 )   f r o m   t h e   c h a m b e r   c o n t r o l   g r o u p   b y   W i l l i a m s ’   o r   D u n n e t t ’ s   t e s t a O r g a n   w e i g h t s   ( a b s o l u t e   w e i g h t s )   a n d   b o d y   w e i g h t s   a r e   g i v e n   i n   g r a m s ;   o r g a n - w e i g h t - t o - b o d y - w e i g h t   r a t i o s   ( r e l a t i v e   w e i g h t s )   a r e   g i v e n a s   g   o r g a n   w e i g h t / g   b o d y   w e i g h t   a s   a   p e r c e n t a g e   ( m e a n   ±   s t a n d a r d   e r r o r ) . T h e   d i s c o l o r a t i o n ,   w h i c h   w a s   a t t r i b u t e d   t o   t h e   p r e s e n c e o f   i n d i u m   p h o s p h i d e   p a r t i c l e s ,   w a s   d i a g n o s e d     m i c r o - s c o p i c a l l y   a s   f o r e i g n   b o d y   a n d   c h a r a c t e r i z e d   b y   b l a c k - i s h   g r a n u l e s   l e s s   t h a n   1   µ m   i n   d i a m e t e r   ( T a b l e   6 ) .     T h e g r a n u l e s   w e r e   l o c a t e d   w i t h i n   e p i t h e l i a l   a n d   i n f l a m - m a t o r y   c e l l s   a n d   f r e e   w i t h i n   t h e   l u n g   p a r e n c h y m a   a n d a l v e o l i   ( P l a t e   2 ) .     M a r k e d   a l v e o l a r   p r o t e i n o s i s   w a s p r e s e n t   i n   a l l   e x p o s e d   a n i m a l s   a n d   l i k e l y   c o n t r i b u t e d   t o t h e   i n c r e a s e d   l u n g   w e i g h t s .     A l v e o l a r   p r o t e i n o s i s   w a s   a d i f f u s e   c h a n g e   c h a r a c t e r i z e d   b y   a l v e o l i   o f t e n   p a r t i a l l y f i l l e d   w i t h   a   p a l e ,   e o s i n o p h i l i c ,   p r o t e i n a c e o u s   f l u i d ( P l a t e s   1   a n d   2 ) . C h r o n i c   a c t i v e   i n f l a m m a t i o n   o f   t h e   l u n g   o c c u r r e d   i n   a l l e x p o s e d   a n i m a l s   ( P l a t e s   1   a n d   2 ) .     T h e   i n f l a m m a t i o n w a s   m u l t i f o c a l   t o   d i f f u s e   a n d   w a s   c o m p o s e d   o f   m i x e d i n f l a m m a t o r y   c e l l s   ( l y m p h o c y t e s ,   m a c r o p h a g e s ,   a n d f e w e r   n e u t r o p h i l s )   w i t h i n   t h e   a l v e o l i   a n d   i n t e r s t i t i u m . W i t h i n   a r e a s   o f   i n f l a m m a t i o n ,   t h e r e   w a s   r e g e n e r a t i v e a l v e o l a r   e p i t h e l i a l   h y p e r p l a s i a ;   t h e   s e v e r i t y   g e n e r a l l y i n c r e a s e d   w i t h   i n c r e a s i n g   e x p o s u r e   c o n c e n t r a t i o n   i n m a l e s .     T h e   h y p e r p l a s i a   w a s   m u l t i f o c a l   a n d   w a s   c o m - p o s e d   o f   w e l l - d i f f e r e n t i a t e d   c u b o i d a l   e p i t h e l i a l   c e l l s ( t y p e   I I )   ( P l a t e   2 ) .     I n t e r s t i t i a l   f i b r o s i s   o c c u r r e d   i n a l m o s t   a l l   m a l e s   a n d   i n   a l l   f e m a l e s   e x p o s e d   t o   3   m g / m 3 o r   g r e a t e r ,   a n d   t h e   s e v e r i t i e s   g e n e r a l l y   i n c r e a s e d   w i t h i n c r e a s i n g   e x p o s u r e   c o n c e n t r a t i o n   ( P l a t e   2 ) .     T h i s c h a n g e   v a r i e d   f r o m   b a r e l y   d e t e c t a b l e   s t r a n d s   o f   c o l l a - g e n   t o   a n   i n c r e a s e d   p r o m i n e n c e   o f   f i b r o b l a s t s   a n d d e n s e   b a n d s   o f   c o l l a g e n   t h i c k e n i n g   t h e   i n t e r s t i t i u m . I n   t h e   n o s e ,   l a r y n x ,   a n d   t r a c h e a   o f   e x p o s e d   m a l e s   a n d f e m a l e s ,   m i n i m a l   t o   m i l d   a c c u m u l a t i o n   o f   f o r e i g n b o d i e s   ( i n d i u m   p h o s p h i d e   p a r t i c l e s )   o c c u r r e d   i n   t h e m u c o s a l   e p i t h e l i a l   c e l l s   o r   t h e   u n d e r l y i n g   s u b s t a n t i a p r o p r i a ,   e i t h e r   f r e e   o r   w i t h i n   m a c r o p h a g e s   ( T a b l e   6 ) . A d d i t i o n a l l y ,   w i t h i n   t h e   b a s e   o f   t h e   e p i g l o t t i s   o f   m a l e a n d   f e m a l e   r a t s   i n   t h e   3 ,   1 0 ,   o r   3 0   m g / m 3   g r o u p s ,   t h e r e w e r e   m i n i m a l l y   s e v e r e   c o l l e c t i o n s   o f   m o n o n u c l e a r   c e l l s ( i n f l a m m a t i o n )   a s s o c i a t e d   w i t h   t h e   p a r t i c l e s . 4 2 I n d i u m   P h o s p h i d e ,   N T P   T R   4 9 9 T A B L E   6 I n c i d e n c e s   o f   S e l e c t e d   N o n n e o p l a s t i c   L e s i o n s   o f   t h e   R e s p i r a t o r y   S y s t e m   a n d   A s s o c i a t e d   L y m p h   N o d e s i n   R a t s   i n   t h e   1 4 - W e e k   I n h a l a t i o n   S t u d y   o f   I n d i u m   P h o s p h i d e C h a m b e r C o n t r o l 1   m g / m 3 3   m g / m 3 1 0   m g / m 3 3 0   m g / m 3 1 0 0   m g / m 3 M a l e L u n g a 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 F o r e i g n   B o d y b 0 1 0 * * ( 1 . 0 ) c 1 0 * * ( 1 . 5 ) 1 0 * * ( 2 . 0 ) 1 0 * * ( 2 . 0 ) 1 0 * * ( 3 . 0 ) A l v e o l u s ,   P r o t e i n o s i s 0 1 0 * * ( 3 . 6 ) 1 0 * * ( 3 . 9 ) 1 0 * * ( 3 . 9 ) 1 0 * * ( 4 . 0 ) 1 0 * * ( 4 . 0 ) C h r o n i c   A c t i v e   I n f l a m m a t i o n 0 1 0 * * ( 2 . 0 ) 1 0 * * ( 2 . 6 ) 1 0 * * ( 3 . 0 ) 1 0 * * ( 3 . 0 ) 1 0 * * ( 2 . 9 ) A l v e o l a r   E p i t h e l i u m ,   H y p e r p l a s i a 0 1 0 * * ( 2 . 0 ) 1 0 * * ( 2 . 6 ) 1 0 * * ( 3 . 0 ) 1 0 * * ( 3 . 1 ) 1 0 * * ( 3 . 6 ) I n t e r s t i t i u m ,   F i b r o s i s 0 0 1 0 * * ( 1 . 2 ) 1 0 * * ( 2 . 0 ) 9 * * ( 2 . 0 ) 1 0 * * ( 3 . 0 ) N o s e 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 F o r e i g n   B o d y 0 1 ( 1 . 0 ) 1 ( 1 . 0 ) 8 * * ( 1 . 0 ) 8 * * ( 1 . 0 ) 1 0 * * ( 1 . 0 ) L a r y n x 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 F o r e i g n   B o d y 0 1 0 * * ( 1 . 1 ) 1 0 * * ( 1 . 6 ) 1 0 * * ( 1 . 7 ) 1 0 * * ( 2 . 0 ) 9 * * ( 1 . 3 ) C h r o n i c   I n f l a m m a t i o n 0 0 5 * ( 1 . 4 ) 8 * * ( 1 . 4 ) 9 * * ( 1 . 3 ) 0 T r a c h e a 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 F o r e i g n   B o d y 0 0 1 ( 1 . 0 ) 2 ( 1 . 0 ) 5 * ( 1 . 0 ) 8 * * ( 1 . 0 ) L y m p h   N o d e ,   B r o n c h i a l 9 1 0 8 1 0 1 0 9 H y p e r p l a s i a 0 5 * ( 1 . 2 ) 4 * ( 2 . 0 ) 3 ( 2 . 0 ) 6 * * ( 2 . 0 ) 3 ( 2 . 3 ) P i g m e n t a t i o n 0 9 * * ( 1 . 2 ) 8 * * ( 1 . 4 ) 1 0 * * ( 1 . 3 ) 1 0 * * ( 1 . 8 ) 9 * * ( 2 . 9 ) L y m p h   N o d e ,   M e d i a s t i n a l 9 5 8 1 0 8 1 0 H y p e r p l a s i a 0 3 * ( 2 . 0 ) 7 * * ( 2 . 0 ) 8 * * ( 2 . 0 ) 6 * * ( 2 . 0 ) 8 * * ( 2 . 4 ) P i g m e n t a t i o n 0 4 * * ( 1 . 0 ) 8 * * ( 1 . 4 ) 9 * * ( 1 . 8 ) 7 * * ( 2 . 0 ) 9 * * ( 3 . 2 ) I n d i u m   P h o s p h i d e ,   N T P   T R   4 9 9 4 3 T A B L E   6 I n c i d e n c e s   o f   S e l e c t e d   N o n n e o p l a s t i c   L e s i o n s   o f   t h e   R e s p i r a t o r y   S y s t e m   a n d   A s s o c i a t e d   L y m p h   N o d e s i n   R a t s   i n   t h e   1 4 - W e e k   I n h a l a t i o n   S t u d y   o f   I n d i u m   P h o s p h i d e C h a m b e r C o n t r o l 1   m g / m 3 3   m g / m 3 1 0   m g / m 3 3 0   m g / m 3 1 0 0   m g / m 3 F e m a l e L u n g 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 F o r e i g n   B o d y 0 9 * * ( 1 . 0 ) 1 0 * * ( 2 . 0 ) 1 0 * * ( 2 . 1 ) 1 0 * * ( 2 . 9 ) 1 0 * * ( 3 . 0 ) A l v e o l u s ,   P r o t e i n o s i s 0 1 0 * * ( 3 . 8 ) 1 0 * * ( 4 . 0 ) 1 0 * * ( 4 . 0 ) 1 0 * * ( 4 . 0 ) 1 0 * * ( 4 . 0 ) C h r o n i c   A c t i v e   I n f l a m m a t i o n 0 1 0 * * ( 2 . 0 ) 1 0 * * ( 2 . 4 ) 1 0 * * ( 2 . 4 ) 1 0 * * ( 2 . 3 ) 1 0 * * ( 3 . 0 ) A l v e o l a r   E p i t h e l i u m ,   H y p e r p l a s i a 0 1 0 * * ( 2 . 0 ) 1 0 * * ( 2 . 4 ) 1 0 * * ( 2 . 3 ) 1 0 * * ( 2 . 3 ) 1 0 * * ( 3 . 3 ) I n t e r s t i t i u m ,   F i b r o s i s 0 0 1 0 * * ( 1 . 3 ) 1 0 * * ( 2 . 0 ) 1 0 * * ( 1 . 8 ) 1 0 * * ( 3 . 3 ) N o s e 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 F o r e i g n   B o d y 0 3 ( 1 . 0 ) 2 ( 1 . 0 ) 7 * * ( 1 . 0 ) 9 * * ( 1 . 0 ) 1 0 * * ( 1 . 0 ) L a r y n x 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 F o r e i g n   B o d y 0 1 0 * * ( 1 . 3 ) 1 0 * * ( 1 . 5 ) 1 0 * * ( 1 . 6 ) 9 * * ( 1 . 7 ) 9 * * ( 1 . 0 ) C h r o n i c   I n f l a m m a t i o n 0 2 ( 1 . 0 ) 6 * * ( 1 . 3 ) 9 * * ( 1 . 2 ) 9 * * ( 1 . 3 ) 0 T r a c h e a 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 F o r e i g n   B o d y 0 0 0 3 ( 1 . 0 ) 7 * * ( 1 . 0 ) 7 * * ( 1 . 0 ) L y m p h   N o d e ,   B r o n c h i a l 7 9 1 0 1 0 1 0 9 H y p e r p l a s i a 0 7 * * ( 2 . 0 ) 7 * * ( 1 . 9 ) 9 * * ( 1 . 6 ) 1 0 * * ( 2 . 2 ) 5 * ( 1 . 2 ) P i g m e n t a t i o n 0 8 * * ( 1 . 1 ) 1 0 * * ( 1 . 8 ) 9 * * ( 1 . 8 ) 1 0 * * ( 2 . 1 ) 9 * * ( 2 . 8 ) L y m p h   N o d e ,   M e d i a s t i n a l 7 9 8 5 9 8 H y p e r p l a s i a 0 8 * * ( 2 . 0 ) 8 * * ( 2 . 0 ) 4 * ( 2 . 3 ) 5 * ( 2 . 2 ) 7 * * ( 2 . 4 ) P i g m e n t a t i o n 0 8 * * ( 1 . 3 ) 8 * * ( 1 . 8 ) 5 * * ( 1 .