Super-resolution microscopy
ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯು ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯಲ್ಲಿನ ತಂತ್ರಗಳ ಸರಣಿಯಾಗಿದ್ದು, ಅಂತಹ ಚಿತ್ರಗಳು ಬೆಳಕಿನ ವಿವರ್ತನೆಯ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿ ವಿವರ್ತನದ ಮಿತಿಯಿಂದ ವಿಧಿಸಲಾದ ನಿರ್ಣಯಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ. ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್ ತಂತ್ರಗಳು ಸಮೀಪದ-ಕ್ಷೇತ್ರ (ಫೋಟಾನ್-ಟನಲಿಂಗ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ಮತ್ತು ಪೆಂಡ್ರಿ ಸೂಪರ್ಲೆನ್ಸ್ ಮತ್ತು ಸಮೀಪದ ಕ್ಷೇತ್ರ ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು ಬಳಸುವವು) ಅಥವಾ ದೂರದ-ಕ್ಷೇತ್ರವನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿವೆ. ಎರಡನೆಯದರ ಮೇಲೆ ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿರುವ ತಂತ್ರಗಳಲ್ಲಿ ವಿವರ್ತನ-ಮಿತಿಯನ್ನು ಮೀರಿ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಸಾಧಾರಣವಾಗಿ (ಸುಮಾರು ಎರಡು ಅಂಶಗಳವರೆಗೆ) ಸುಧಾರಿಸುವ ತಂತ್ರಗಳು ಸೇರಿವೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಮುಚ್ಚಿದ ಪಿನ್ ಹೋಲ್ನೊಂದಿಗೆ ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಅಥವಾ ಡೀಕನ್ವಲ್ಯೂಷನ್ ಅಥವಾ ಡಿಟೆಕ್ಟರ್ ಆಧಾರಿತ ಪಿಕ್ಸೆಲ್ ಮರುಹೊಂದಿಸುವಿಕೆಯಂತಹ ಕಂಪ್ಯೂಟೇಶನಲ್ ವಿಧಾನಗಳ ಸಹಾಯದಿಂದ (ಉದಾಹರಣೆಗೆ. ರೀ-ಸ್ಕ್ಯಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ, ಪಿಕ್ಸೆಲ್ ರೀಅಸೈನ್ಮೆಂಟ್), 4ಪಿಐ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ ಮತ್ತು ಸಿಮ್ ಮತ್ತು ಎಸ್ಎಂಐನಂತಹ ಸ್ಟ್ರಕ್ಚರ್ಡ್-ಇಲ್ಯೂಮಿನೇಷನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳು. ದೂರದ ಕ್ಷೇತ್ರದಲ್ಲಿ ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಎರಡು ಪ್ರಮುಖ ಗುಂಪುಗಳಿವೆ, ಅವು ಹೆಚ್ಚು ದೊಡ್ಡ ಅಂಶದಿಂದ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಬಹುದುಃ ನಿರ್ಣಾಯಕ ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ಃ ಜೈವಿಕ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆಯಾದ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳು, ಪ್ರಚೋದನೆಗೆ ರೇಖಾತ್ಮಕವಲ್ಲದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ, ಇದನ್ನು ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಬಳಸಿಕೊಳ್ಳಬಹುದು. ಅಂತಹ ವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ ಎಸ್ಟಿಇಡಿ, ಜಿಎಸ್ಡಿ, ರೆಸೊಲ್ಫ್ಟ್ ಮತ್ತು ಎಸ್ಎಸ್ಐಎಂ ಸೇರಿವೆ. ಸಾಂದರ್ಭಿಕ ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ಃ ಅನೇಕ ಆಣ್ವಿಕ ಬೆಳಕಿನ ಮೂಲಗಳ ರಾಸಾಯನಿಕ ಸಂಕೀರ್ಣತೆಯು ಅವುಗಳಿಗೆ ಸಂಕೀರ್ಣವಾದ ತಾತ್ಕಾಲಿಕ ನಡವಳಿಕೆಯನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ, ಇದನ್ನು ಹತ್ತಿರದ ಹಲವಾರು ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಸಮಯಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳಕನ್ನು ಹೊರಸೂಸುವಂತೆ ಮಾಡಲು ಬಳಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಆ ಮೂಲಕ ಸಮಯಕ್ಕೆ ಸರಿಯಾಗಿ ಪರಿಹರಿಸಬಹುದು. ಈ ವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಫ್ಲಕ್ಯುಯೇಷನ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್ (ಎಸ್ಒಎಫ್ಐ) ಮತ್ತು ಎಲ್ಲಾ ಏಕ-ಅಣು ಸ್ಥಳೀಕರಣ ವಿಧಾನಗಳು (ಎಸ್ಎಂಎಲ್ಎಂ), ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಎಸ್. ಪಿ. ಡಿ. ಎಂ., ಎಸ್. ಪಿ. ಡಿ. ಎಂ. ಫೈಮಾಡ್, ಪಿ. ಎ. ಎಲ್. ಎಂ., ಎಫ್. ಪಿ. ಎ. ಎಲ್. ಎಂ., ಎಸ್. ಟಿ. ಓ. ಆರ್. ಎಂ. ಮತ್ತು ಡಿ. ಎಸ್. ಟಿ. ಓ. ಆರ್. ಎಂ. ಸೇರಿವೆ. 2014ರ ಅಕ್ಟೋಬರ್ 8ರಂದು, ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರದ ನೊಬೆಲ್ ಪ್ರಶಸ್ತಿಯನ್ನು ಡಬ್ಲ್ಯೂ. ಇ. ಎರಿಕ್ ಬೆಟ್ಜಿಗ್ಗೆ ನೀಡಲಾಯಿತು. "ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯನ್ನು ನ್ಯಾನೊಡಿಮೆನ್ಷನ್ಗೆ ತರುವ" "ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಗಾಗಿ" ಮೋರ್ನರ್ ಮತ್ತು ಸ್ಟೀಫನ್ ಹೆಲ್. ಬಯೋಮೆಡಿಕಲ್ ಸಂಶೋಧನಾ ಸಮುದಾಯವು ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯ ವಿವಿಧ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಅಳವಡಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತಿದೆ ಮತ್ತು ಆಣ್ವಿಕ ಮಟ್ಟದಲ್ಲಿ ಜೈವಿಕ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಈ ತಂತ್ರಗಳು ಅನಿವಾರ್ಯ ಸಾಧನಗಳಾಗುತ್ತಿವೆ. 1978ರ ಹೊತ್ತಿಗೆ, ಅಬ್ಬೆ ಮಿತಿಯನ್ನು ಮುರಿಯಲು ಮೊದಲ ಸೈದ್ಧಾಂತಿಕ ವಿಚಾರಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಯಿತು, ಇದು 4ಪಿಐ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಲೇಸರ್-ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವಾಗಿ ಬಳಸಲು ಕರೆ ನೀಡಿತು, ಅಲ್ಲಿ ಬೆಳಕನ್ನು ಎಲ್ಲಾ ಬದಿಗಳಿಂದ ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸಿ ಸಾಮಾನ್ಯ ಫೋಕಸ್ಗೆ ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದನ್ನು 'ಪಾಯಿಂಟ್-ಬೈ-ಪಾಯಿಂಟ್' ಪ್ರಚೋದನೆಯಿಂದ 'ಪಾಯಿಂಟ್-ಬೈ-ಪಾಯಿಂಟ್' ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಸ್ಕ್ಯಾನ್ ಮಾಡಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, 1978ರ ಪ್ರಕಟಣೆಯು ಅಸಮರ್ಪಕ ಭೌತಿಕ ತೀರ್ಮಾನಕ್ಕೆ ಬಂದಿತ್ತು (ಅಂದರೆ. ಒಂದು ಬಿಂದುವಿನಂತಹ ಬೆಳಕಿನ ಸ್ಥಳ) ಮತ್ತು ಘನ ಕೋನದ ಇನ್ನೊಂದು ಬದಿಯನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ನಿಜವಾದ ಪ್ರಯೋಜನವಾಗಿ ಅಕ್ಷೀಯ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಹೆಚ್ಚಳವನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ತಪ್ಪಿಸಿಕೊಂಡಿತ್ತು. ಕೆಮಿಸ್ಟ್ರಿ ಬ್ಲಾಗ್ನ ಉಪ-ವಿವರ್ತನ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ತಂತ್ರಗಳ ವಿಮರ್ಶೆಯಿಂದ ಈ ಕೆಳಗಿನ ಕೆಲವು ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು (ಅನುಮತಿಯೊಂದಿಗೆ) ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗಿದೆ. 1986 ರಲ್ಲಿ, ಪ್ರಚೋದಿತ ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಆಧರಿಸಿದ ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ ಅನ್ನು ಓಖೋನಿನ್ ಪೇಟೆಂಟ್ ಮಾಡಿತು. ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ತಂತ್ರಗಳು ಫೋಟಾನ್ ಟನಲಿಂಗ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಪಿಟಿಎಂ) ಸ್ಥಳೀಯ ವರ್ಧನೆ/ಎಎನ್ಎಸ್ಒಎಂ/ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ನ್ಯಾನೋ-ಆಂಟೆನ್ನಾಸ್ ನಿಯರ್-ಫೀಲ್ಡ್ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ರಾಂಡಮ್ ಮ್ಯಾಪಿಂಗ್ (ಎನ್ಒಆರ್ಎಂ) ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ನಿಯರ್-ಫೀಲ್ಡ್ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ರಾಂಡಮ್ ಮ್ಯಾಪಿಂಗ್ (ಎನ್ಒಆರ್ಎಂ) ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯು ದೂರದ-ಕ್ಷೇತ್ರದ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಮೂಲಕ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ನಿಯರ್-ಫೀಲ್ಡ್ ಸ್ವಾಧೀನದ ಒಂದು ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ. NORM ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್ಸ್ಗಳನ್ನು ಯಾದೃಚ್ಛಿಕವಾಗಿ ಚಲಿಸುವ ಮೂಲಕ ವಸ್ತುವಿನ ಮೇಲ್ಮೈ ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ. ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಮೂಲಕ, ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್ಸ್ಗಳು ಸಮ್ಮಿತೀಯ ದುಂಡಾದ ಕಲೆಗಳಂತೆ ಕಾಣುತ್ತವೆ. ಸ್ಪಾಟ್ ಅಗಲವು ಪಾಯಿಂಟ್ ಸ್ಪ್ರೆಡ್ ಫಂಕ್ಷನ್ಗೆ (~ 250 ಎನ್ಎಂ) ಸಮನಾಗಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಇದನ್ನು ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸುತ್ತದೆ. ನೀಡಲಾದ ಕಣದ ಪಾರ್ಶ್ವ ನಿರ್ದೇಶಾಂಕಗಳನ್ನು ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿಖರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಬಹುದು. ಅನೇಕ ಚೌಕಟ್ಟುಗಳಿಂದ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸುವ ಮೂಲಕ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಸಂಪೂರ್ಣ ವೀಕ್ಷಣೆಯ ಕ್ಷೇತ್ರದಲ್ಲಿ ಹತ್ತಿರದ ಕ್ಷೇತ್ರದ ತೀವ್ರತೆಯ ವಿತರಣೆಯನ್ನು ನಕ್ಷೆ ಮಾಡಬಹುದು. ಎನ್. ಎಸ್. ಓ. ಎಂ. ಮತ್ತು ಎ. ಎನ್. ಎಸ್. ಓ. ಎಂ. ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಈ ವಿಧಾನಕ್ಕೆ ತುದಿ ಸ್ಥಾನಕ್ಕಾಗಿ ಯಾವುದೇ ವಿಶೇಷ ಸಾಧನಗಳ ಅಗತ್ಯವಿರುವುದಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಇದು ದೊಡ್ಡ ವೀಕ್ಷಣಾ ಕ್ಷೇತ್ರ ಮತ್ತು ಗಮನದ ಆಳವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್ "ಸಂವೇದಕಗಳ" ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಚಿತ್ರ ಸ್ವಾಧೀನವನ್ನು ಸಾಧಿಸಬಹುದು. 4ಪಿಐ ಎ 4ಪಿಐ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವು ಸುಧಾರಿತ ಅಕ್ಷೀಯ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಹೊಂದಿರುವ ಲೇಸರ್-ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವಾಗಿದೆ. 500-700 nm ನ ವಿಶಿಷ್ಟ ಮೌಲ್ಯವನ್ನು 100-150 nm ಗೆ ಸುಧಾರಿಸಬಹುದು, ಇದು ಪ್ರಮಾಣಿತ ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕಕ್ಕಿಂತ 5-7 ಪಟ್ಟು ಕಡಿಮೆ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಬಹುತೇಕ ಗೋಳಾಕಾರದ ಫೋಕಲ್ ಸ್ಪಾಟ್ಗೆ ಅನುರೂಪವಾಗಿದೆ. ಎರಡು ಎದುರಾಳಿ ವಸ್ತುನಿಷ್ಠ ಮಸೂರಗಳನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೂಲಕ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಸುಧಾರಣೆಯನ್ನು ಸಾಧಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇವೆರಡೂ ಒಂದೇ ಜ್ಯಾಮಿತೀಯ ಸ್ಥಳಕ್ಕೆ ಕೇಂದ್ರೀಕೃತವಾಗಿವೆ. ಅಲ್ಲದೆ, ಎರಡು ವಸ್ತುನಿಷ್ಠ ಮಸೂರಗಳ ಮೂಲಕ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಪಥದ ಉದ್ದದಲ್ಲಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ಮೂಲಕ, ಎರಡೂ ಉದ್ದೇಶಗಳ ಸಾಮಾನ್ಯ ಕೇಂದ್ರ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿ ವಾಸಿಸುವ ಅಣುಗಳನ್ನು ಎರಡೂ ಬದಿಗಳಿಂದ ಸುಸಂಬದ್ಧವಾಗಿ ಬೆಳಗಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಫಲಿತ ಅಥವಾ ಹೊರಸೂಸುವ ಬೆಳಕನ್ನು ಸುಸಂಬದ್ಧವಾಗಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದು, ಅಂದರೆ. ಡಿಟೆಕ್ಟರ್ನ ಮೇಲೆ ಹೊರಸೂಸುವ ಬೆಳಕಿನ ಸುಸಂಬದ್ಧ ಸೂಪರ್ಪೋಸಿಷನ್ ಸಾಧ್ಯವಿದೆ. ಬೆಳಕು ಮತ್ತು ಪತ್ತೆಗಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ಘನ ಕೋನವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆದರ್ಶ ಪ್ರಕರಣವನ್ನು ಸಮೀಪಿಸುತ್ತದೆ, ಅಲ್ಲಿ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಬೆಳಗಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಎಲ್ಲಾ ಬದಿಗಳಿಂದ ಏಕಕಾಲದಲ್ಲಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲಾಗುತ್ತದೆ. ಇಲ್ಲಿಯವರೆಗೆ, ಸ್ಥಿರ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ STED ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ಮತ್ತು ಜೀವಂತ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಬದಲಾಯಿಸಬಹುದಾದ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳೊಂದಿಗಿನ RESOLFT ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಸಂಯೋಜನೆಯೊಂದಿಗೆ 4Pi ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದಲ್ಲಿನ ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ಸಾಧಿಸಲಾಗಿದೆ. ಸ್ಟ್ರಕ್ಚರ್ಡ್ ಇಲ್ಯೂಮಿನೇಷನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (SIM) ಸ್ಟ್ರಕ್ಚರ್ಡ್ ಇಲ್ಯೂಮಿನೇಷನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (SIM) ವೀಕ್ಷಿಸಬಹುದಾದ ಪ್ರದೇಶದ ಹೊರಗಿನ ಆವರ್ತನ ಸ್ಥಳದಿಂದ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪರಸ್ಪರ ಜಾಗದಲ್ಲಿ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆಃ ಎಸ್. ಐ. ಚಿತ್ರದ ಫೋರಿಯರ್ ರೂಪಾಂತರವು (ಎಫ್ಟಿ) ಪರಸ್ಪರ ಜಾಗದ ವಿವಿಧ ಪ್ರದೇಶಗಳಿಂದ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ; ಕೆಲವು ಹಂತಗಳಿಂದ ಬೆಳಕನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುವ ಹಲವಾರು ಚೌಕಟ್ಟುಗಳೊಂದಿಗೆ, ಎಫ್ಟಿ ಚಿತ್ರವನ್ನು ಗಣನೆಗೆ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಮತ್ತು ಪುನರ್ನಿರ್ಮಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಿದೆ, ಇದು ಹೆಚ್ಚು ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ರಿವರ್ಸ್ ಎಫ್ಟಿ ಪುನರ್ನಿರ್ಮಿಸಿದ ಚಿತ್ರವನ್ನು ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಚಿತ್ರಕ್ಕೆ ಹಿಂದಿರುಗಿಸುತ್ತದೆ. ಸಿಮ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವು ಕೆಲವು ವೈದ್ಯಕೀಯ ರೋಗನಿರ್ಣಯಗಳಿಗೆ ಒಂದು ಸಾಧನವಾಗಿ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು ಸಂಭಾವ್ಯವಾಗಿ ಬದಲಾಯಿಸಬಹುದು. ಇವುಗಳಲ್ಲಿ ಮೂತ್ರಪಿಂಡದ ಅಸ್ವಸ್ಥತೆಗಳು, ಮೂತ್ರಪಿಂಡದ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಮತ್ತು ರಕ್ತ ರೋಗಗಳ ರೋಗನಿರ್ಣಯವೂ ಸೇರಿದೆ. "ಸ್ಟ್ರಕ್ಚರ್ಡ್ ಇಲ್ಯೂಮಿನೇಷನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ" ಎಂಬ ಪದವನ್ನು ನಂತರದ ವರ್ಷಗಳಲ್ಲಿ ಇತರರು ಸೃಷ್ಟಿಸಿದರೂ, ಗುಯೆರಾ (1995) ಮೊದಲ ಬಾರಿಗೆ ಪ್ರಕಟಿಸಿದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ 50 ಎನ್ಎಂ ಪಿಚ್ ಗ್ರೇಟಿಂಗ್ನಿಂದ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾದ ಬೆಳಕು 50 ಎನ್ಎಂ ಪಿಚ್ನ ಎರಡನೇ ಗ್ರೇಟಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಬೆಳಗಿಸಿತು, ಗ್ರೇಟಿಂಗ್ಗಳು ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧಿಸಿದಂತೆ ತಿರುಗುತ್ತವೆ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಅಗತ್ಯವಾದ ಕೋನೀಯ ಪ್ರಮಾಣದಿಂದ. ಪ್ರಕಾಶಮಾನವಾದ ತರಂಗಾಂತರವು 650 ಎನ್ಎಂ ಆಗಿದ್ದರೂ, 50 ಎನ್ಎಂ ಗ್ರೇಟಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಸುಲಭವಾಗಿ ಪರಿಹರಿಸಲಾಯಿತು. ಇದು ಅಬೆ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಮಿತಿಯಾದ 232 ಎನ್. ಎಂ. ಗಿಂತ ಸುಮಾರು 5 ಪಟ್ಟು ಸುಧಾರಣೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ, ಇದು ಸಂಖ್ಯಾತ್ಮಕ ದ್ಯುತಿರಂಧ್ರ ಮತ್ತು ತರಂಗಾಂತರಕ್ಕಾಗಿ ಪಡೆಯಬೇಕಾದ ಅತ್ಯಂತ ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ. ಈ ಕೃತಿಯ ಮತ್ತಷ್ಟು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯಲ್ಲಿ, ಅವನತ ಕ್ಷೇತ್ರವನ್ನು ಹಂತ ಹಂತವಾಗಿ ಬದಲಾಯಿಸುವ ಮೂಲಕ ಅತಿ-ಪರಿಹರಿಸಿದ ಪಾರ್ಶ್ವದ ಸ್ಥಳಾಕೃತಿಯನ್ನು ಸಾಧಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ಗುಯೆರಾ ತೋರಿಸಿದರು. ಹಲವಾರು ಯು. ಎಸ್. ಪೇಟೆಂಟ್ಗಳನ್ನು ಗುರ್ರಾಗೆ ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ಅಥವಾ ಸಹೋದ್ಯೋಗಿಗಳೊಂದಿಗೆ ನೀಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಪೋಲರಾಯ್ಡ್ ಕಾರ್ಪೊರೇಷನ್ಗೆ ನಿಯೋಜಿಸಲಾಯಿತು. ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ದತ್ತಾಂಶ ಸಂಗ್ರಹಣೆ ಮತ್ತು ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದಲ್ಲಿ ಈ ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ತಂತ್ರವನ್ನು ಬಳಸಲು ಡೈಯರ್ ಎನರ್ಜಿ ಸಿಸ್ಟಮ್ಸ್, ಕ್ಯಾಲಿಮೆಟ್ರಿಕ್ಸ್ ಇಂಕ್ ಮತ್ತು ನ್ಯಾನೊಪ್ಟೆಕ್ ಕಾರ್ಪ್ ಈ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದ ಪರವಾನಗಿಗಳನ್ನು ಪಡೆದುಕೊಂಡಿವೆ. ಪ್ರಾದೇಶಿಕವಾಗಿ ಮಾಡ್ಯುಲೇಟೆಡ್ ಇಲ್ಯುಮಿನೇಶನ್ (ಎಸ್ಎಂಐ) ರಚನಾತ್ಮಕ ಬೆಳಕಿನ ಒಂದು ಅನುಷ್ಠಾನವನ್ನು ಪ್ರಾದೇಶಿಕವಾಗಿ ಮಾಡ್ಯುಲೇಟೆಡ್ ಇಲ್ಯುಮಿನೇಶನ್ (ಎಸ್ಎಂಐ) ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪ್ರಮಾಣಿತ ರಚನಾತ್ಮಕ ಬೆಳಕಿನಂತೆ, ಎಸ್ಎಂಐ ತಂತ್ರವು ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಪಾಯಿಂಟ್ ಸ್ಪ್ರೆಡ್ ಫಂಕ್ಷನ್ (ಪಿಎಸ್ಎಫ್) ಅನ್ನು ಸೂಕ್ತ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ಮಾರ್ಪಡಿಸುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ, "ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಸ್ವತಃ ವರ್ಧಿತವಾಗಿಲ್ಲ"; ಬದಲಿಗೆ "ಕೆಲವು ಹತ್ತಾರು ನ್ಯಾನೊಮೀಟರ್ಗಳ ಆಣ್ವಿಕ ಆಯಾಮಗಳಲ್ಲಿ ಗಾತ್ರದ ಅಳತೆಗಳನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲು", ಪ್ರತಿದೀಪಕ ವಸ್ತುಗಳ ದೂರ ಮಾಪನಗಳ ನಿಖರತೆಯನ್ನು ಗರಿಷ್ಠಗೊಳಿಸಲು ರಚನಾತ್ಮಕ ಬೆಳಕನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಲಂಬ ಎಸ್ಎಂಐ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವು ಅಕ್ಷದ ಉದ್ದಕ್ಕೂ ಒಂದು ಅಥವಾ ಎರಡು ವಿರುದ್ಧ ಮಧ್ಯಪ್ರವೇಶಿಸುವ ಲೇಸರ್ ಕಿರಣಗಳನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೂಲಕ ರಚನಾತ್ಮಕ ಬೆಳಕನ್ನು ಸಾಧಿಸುತ್ತದೆ. ಚಿತ್ರಿಸಲಾಗುತ್ತಿರುವ ವಸ್ತುವನ್ನು ನಂತರ ತರಂಗ ಕ್ಷೇತ್ರದ ಮೂಲಕ ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿಖರವಾದ ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ ಚಲಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅಥವಾ ತರಂಗ ಕ್ಷೇತ್ರವನ್ನು ಸ್ವತಃ ವಸ್ತುವಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಹಂತದ ಶಿಫ್ಟ್ಗಳ ಮೂಲಕ ಚಲಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಇದು ಸುಧಾರಿತ ಅಕ್ಷೀಯ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ದೂರ ನಿರ್ಣಯಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ಎಸ್ಎಂಐ ಅನ್ನು ಇತರ ಸೂಪರ್ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಬಹುದು, ಉದಾಹರಣೆಗೆ 3ಡಿ ಲಿಮೋನ್ ಅಥವಾ ಎಲ್ಎಸ್ಐ-ಟಿಐಆರ್ಎಫ್ ಅನ್ನು ಪಾರ್ಶ್ವ ರಚನೆಯ ಪ್ರಕಾಶದೊಂದಿಗೆ ಒಟ್ಟು ಆಂತರಿಕ ಪ್ರತಿಫಲನ ಇಂಟರ್ಫೆರೋಮೀಟರ್ ಆಗಿ (ಈ ಕೊನೆಯ ಉಪಕರಣ ಮತ್ತು ತಂತ್ರವು ಮೂಲಭೂತವಾಗಿ ಒಂದು ಹಂತ-ಬದಲಾಯಿಸಿದ ಫೋಟಾನ್ ಟನಲಿಂಗ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವಾಗಿದೆ, ಇದು ಹಂತ-ಬದಲಾಯಿಸಿದ ಇವಾನೆಸೆಂಟ್ ಕ್ಷೇತ್ರದೊಂದಿಗೆ ಒಟ್ಟು ಆಂತರಿಕ ಪ್ರತಿಫಲನ ಬೆಳಕಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ (ಗುಯೆರಾ, 1996). ಈ ಎಸ್ಎಂಐ ತಂತ್ರವು ಮಾನವನ ಕಣ್ಣಿನ ಅಂಗಾಂಶದ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ ಆಟೋಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ ವಿತರಣೆಗಳ ಬೆಳಕಿನ-ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಹಿಂದೆ ಹೋಲಿಸಲಾಗದ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ನೊಂದಿಗೆ ಪಡೆಯಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ. ಮೂರು ವಿಭಿನ್ನ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ತರಂಗಾಂತರಗಳ (488,568, ಮತ್ತು 647 ಎನ್. ಎಂ.) ಬಳಕೆಯು ಸ್ವಯಂ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಂಕೇತದ ಬಗ್ಗೆ ವರ್ಣಪಟಲದ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ. ಮ್ಯಾಕ್ಯುಲರ್ ಡಿಜೆನೇಶನ್ನಿಂದ ಪ್ರಭಾವಿತವಾದ ಮಾನವ ಕಣ್ಣಿನ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ಇದನ್ನು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ. ನಿರ್ಣಾಯಕ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ತಂತ್ರಗಳು ರಿವರ್ಸಿಬಲ್ ಸ್ಯಾಚುರೇಟಬಲ್ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸಿಷನ್ಸ್ (ರೆಸೊಲ್ಫ್ಟ್) ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯು ಹೆಚ್ಚಿನ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಹೊಂದಿರುವ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯಾಗಿದ್ದು, ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಅಥವಾ ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯಿಂದ ಚಿತ್ರಿಸಲಾಗದ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ವಿವರಗಳನ್ನು ಚಿತ್ರಿಸಬಹುದು. ರಿಸೊಲ್ಫ್ಟ್ನೊಳಗೆ ಎಸ್ಟಿಇಡಿ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಮತ್ತು ಜಿಎಸ್ಡಿ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯ ತತ್ವಗಳನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಅಲ್ಲದೆ, ರೆಸೊಲ್ಫ್ಟ್ ಅಥವಾ ಎಸ್ಎಸ್ಐಎಂ ಅನ್ನು ಹೊರತುಪಡಿಸಿ ಇತರ ಪರಿಕಲ್ಪನೆಗಳೊಂದಿಗೆ ತಂತ್ರಗಳಿವೆ. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಸಾರಜನಕ-ಖಾಲಿ ಕೇಂದ್ರದ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಮತ್ತು ಗೇಟ್ ಗುಣಲಕ್ಷಣವನ್ನು ಬಳಸುವ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ, ಅಥವಾ ಉಷ್ಣ ವಿಕಿರಣದ ಪ್ರಚೋದಿತ ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆಯಿಂದ (ಎಸ್. ಇ. ಟಿ. ಆರ್) ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್, ಇದು ಕಪ್ಪು-ದೇಹದ ವಿಕಿರಣದ ಆಂತರಿಕ ಸೂಪರ್-ರೇಖಾತ್ಮಕತೆಯನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು ಮೀರಿ ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಪರಿಕಲ್ಪನೆಯನ್ನು ವಿಸ್ತರಿಸುತ್ತದೆ. ಸ್ಟಿಮ್ಯುಲೇಟೆಡ್ ಎಮಿಷನ್ ಡಿಪ್ಲೀಷನ್ (ಎಸ್ಟಿಇಡಿ) ಸ್ಟಿಮ್ಯುಲೇಟೆಡ್ ಎಮಿಷನ್ ಡಿಪ್ಲೀಷನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಎಸ್ಟಿಇಡಿ) ಎರಡು ಲೇಸರ್ ಪಲ್ಸ್ಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳನ್ನು ಅವುಗಳ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸ್ಥಿತಿಗೆ ಪ್ರಚೋದಿಸಲು ಎಕ್ಸೈಟೇಶನ್ ಪಲ್ಸ್ ಮತ್ತು ಸ್ಟಿಮ್ಯುಲೇಟೆಡ್ ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆಯ ಮೂಲಕ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳ ಡಿ-ಎಕ್ಸೈಟೇಶನ್ಗಾಗಿ ಎಸ್ಟಿಇಡಿ ಪಲ್ಸ್. ಪ್ರಾಯೋಗಿಕವಾಗಿ, ಎಕ್ಸೈಟೇಶನ್ ಲೇಸರ್ ಪಲ್ಸ್ ಅನ್ನು ಮೊದಲು ಅನ್ವಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅದರ ನಂತರ ಶೀಘ್ರದಲ್ಲೇ ಎಸ್ಟಿಇಡಿ ಪಲ್ಸ್ ಅನ್ನು ಅನುಸರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ (ನಿರಂತರ ತರಂಗ ಲೇಸರ್ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪಲ್ಸ್ಗಳಿಲ್ಲದ ಎಸ್ಟಿಇಡಿ ಅನ್ನು ಸಹ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ). ಇದಲ್ಲದೆ, ಎಸ್ಟಿಇಡಿ ನಾಡಿಮಿಡಿತವನ್ನು ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಕೇಂದ್ರಬಿಂದುವಿನೊಂದಿಗೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗುವ ಶೂನ್ಯ-ತೀವ್ರತೆಯ ತಾಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ಮಾರ್ಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ. ಎಸ್ಟಿಇಡಿ ಕಿರಣದ ತೀವ್ರತೆಯ ಮೇಲೆ ಪ್ರಚೋದಿತ ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆ ದರದ ರೇಖಾತ್ಮಕವಲ್ಲದ ಅವಲಂಬನೆಯಿಂದಾಗಿ, ಫೋಕಲ್ ಎಕ್ಸೈಟೇಶನ್ ಸ್ಪಾಟ್ನ ಸುತ್ತಲಿನ ಎಲ್ಲಾ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳು ಅವುಗಳ ಆಫ್ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿರುತ್ತವೆ (ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳ ನೆಲದ ಸ್ಥಿತಿ). ಈ ಕೇಂದ್ರಬಿಂದುವನ್ನು ಸ್ಕ್ಯಾನ್ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ, ಚಿತ್ರವನ್ನು ಹಿಂಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಎಕ್ಸೈಟೇಶನ್ ಫೋಕಲ್ ಸ್ಪಾಟ್ನ ಪಾಯಿಂಟ್ ಸ್ಪ್ರೆಡ್ ಫಂಕ್ಷನ್ನ (ಪಿಎಸ್ಎಫ್) ಅರ್ಧ ಗರಿಷ್ಠ (ಎಫ್ಡಬ್ಲ್ಯೂಹೆಚ್ಎಂ) ಪೂರ್ಣ ಅಗಲವನ್ನು ಸೈದ್ಧಾಂತಿಕವಾಗಿ ಸಮೀಕರಣದ () ಪ್ರಕಾರ, ಎಸ್ಟಿಇಡಿ ಪಲ್ಸ್ನ ತೀವ್ರತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವ ಮೂಲಕ ಅನಿಯಂತ್ರಿತ ಅಗಲಕ್ಕೆ ಸಂಕುಚಿತಗೊಳಿಸಬಹುದು. () ಅಲ್ಲಿ  ಮುಂದುವರಿದ ಭಾಗವು ಪಾರ್ಶ್ವದ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಆಗಿರುತ್ತದೆ,  ಮುಂದುವರಿದ ಭಾಗವು ಸೀಮಿತವಾದ ಪಿ. ಎಸ್. ಎಫ್. ನ ಎಫ್. ಡಬ್ಲ್ಯೂ. ಎಚ್. ಎಂ ಆಗಿರುತ್ತದೆ, ಐಮ್ಯಾಕ್ಸ್ ಎಂಬುದು ಎಸ್. ಟಿ. ಇ. ಲೇಸರ್ ನ ಗರಿಷ್ಠ ತೀವ್ರತೆ, ಮತ್ತು ಇದು ಸ್ಯಾಚುರೇಟೆಡ್ ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆಯ ಸವಕಳಿಯನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಅಗತ್ಯವಾದ ಮಿತಿ ತೀವ್ರತೆಯಾಗಿದೆ. ಅದರ ವ್ಯಾಪಕ ಬಳಕೆಯನ್ನು ತಡೆಗಟ್ಟಿರುವ ಎಸ್ಟಿಇಡಿಯ ಮುಖ್ಯ ಅನನುಕೂಲವೆಂದರೆ, ಯಂತ್ರೋಪಕರಣಗಳು ಸಂಕೀರ್ಣವಾಗಿವೆ. ಒಂದೆಡೆ, ಚಿತ್ರವನ್ನು ಹಿಂಪಡೆಯಲು ಮಾದರಿಯನ್ನು ಸ್ಕ್ಯಾನ್ ಮಾಡುವ ಅಗತ್ಯವಿರುವುದರಿಂದ ದೊಡ್ಡ ವೀಕ್ಷಣಾ ಕ್ಷೇತ್ರಗಳಿಗೆ ಚಿತ್ರ ಸ್ವಾಧೀನದ ವೇಗವು ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ನಿಧಾನವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಮತ್ತೊಂದೆಡೆ, ಸಣ್ಣ ವೀಕ್ಷಣಾ ಕ್ಷೇತ್ರಗಳಿಗೆ ಇದು ತುಂಬಾ ವೇಗವಾಗಿರಬಹುದುಃ ಸೆಕೆಂಡಿಗೆ 80 ಚೌಕಟ್ಟುಗಳವರೆಗಿನ ರೆಕಾರ್ಡಿಂಗ್ಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಎಸ್ಟಿಇಡಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ದೊಡ್ಡ ಐಎಸ್ ಮೌಲ್ಯದಿಂದಾಗಿ, ಹೆಚ್ಚಿನ ತೀವ್ರತೆಯ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ನಾಡಿಮಿಡಿತದ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ಮಾದರಿಗೆ ಹಾನಿಯನ್ನುಂಟು ಮಾಡಬಹುದು. ಗ್ರೌಂಡ್ ಸ್ಟೇಟ್ ಡಿಪ್ಲೀಷನ್ (ಜಿಎಸ್ಡಿ) ಗ್ರೌಂಡ್ ಸ್ಟೇಟ್ ಡಿಪ್ಲೀಷನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಜಿಎಸ್ಡಿ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ) ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ನ ಟ್ರಿಪ್ಲೆಟ್ ಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಆಫ್-ಸ್ಟೇಟ್ ಮತ್ತು ಸಿಂಗ್ಲೆಟ್ ಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಆನ್-ಸ್ಟೇಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಸಿಂಗ್ಲೆಟ್ ಸ್ಥಿತಿಯ ಅಣುವಿನ ಪರಿಧಿಯಲ್ಲಿರುವ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳನ್ನು ಟ್ರಿಪ್ಲೆಟ್ ಸ್ಥಿತಿಗೆ ಓಡಿಸಲು ಎಕ್ಸೈಟೇಶನ್ ಲೇಸರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಇದು ಎಸ್ಟಿಇಡಿಯಂತೆಯೇ ಇರುತ್ತದೆ, ಅಲ್ಲಿ ಆಫ್-ಸ್ಟೇಟ್ ಎಂಬುದು ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳ ಗ್ರೌಂಡ್ ಸ್ಟೇಟ್ ಆಗಿರುತ್ತದೆ, ಅದಕ್ಕಾಗಿಯೇ ಈ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ ಸಮೀಕರಣ () ಸಹ ಅನ್ವಯಿಸುತ್ತದೆ. ಇದರ ಮೌಲ್ಯವು ಎಸ್. ಟಿ. ಇ. ಡಿ. ಗಿಂತ ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದ್ದು, ಕಡಿಮೆ ಲೇಸರ್ ತೀವ್ರತೆಯಲ್ಲಿ ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಎಸ್. ಟಿ. ಇ. ಡಿ. ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಜಿ. ಎಸ್. ಡಿ. ಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಫೋಟೊಸ್ಟೇಬಲ್ ಆಗಿರುತ್ತವೆ; ಮತ್ತು ತ್ರಿವಳಿ ಸ್ಥಿತಿಯ ಶುದ್ಧತ್ವವನ್ನು ಅರಿತುಕೊಳ್ಳುವುದು ಕಷ್ಟವಾಗಬಹುದು. ಸ್ಯಾಚುರೇಟೆಡ್ ಸ್ಟ್ರಕ್ಚರ್ಡ್ ಇಲ್ಯೂಮಿನೇಷನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಎಸ್ಎಸ್ಐಎಂ) ಸ್ಯಾಚುರೇಟೆಡ್ ಸ್ಟ್ರಕ್ಚರ್ಡ್-ಇಲ್ಯೂಮಿನೇಷನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಎಸ್ಎಸ್ಐಎಂ) ಎಕ್ಸೈಟೇಶನ್ ಲೇಸರ್ನ ತೀವ್ರತೆಯ ಮೇಲೆ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳ ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆ ದರದ ರೇಖಾತ್ಮಕವಲ್ಲದ ಅವಲಂಬನೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಫ್ಲೋರೊಫೋರ್ಗಳನ್ನು ಅವುಗಳ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಸ್ಯಾಚುರೇಟ್ ಮಾಡಲು ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಗರಿಷ್ಠ ತೀವ್ರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಸೈನೂಸೈಡಲ್ ಬೆಳಕಿನ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸುವ ಮೂಲಕ, ಮೋಯಿರ್ ಅಂಚುಗಳನ್ನು ಹಿಂಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅಂಚುಗಳು ಗಣನೆಯ ತಂತ್ರಗಳಿಂದ ಹೊರತೆಗೆಯಬಹುದಾದ ಉನ್ನತ ಶ್ರೇಣಿಯ ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ. ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಹೊರತೆಗೆದ ನಂತರ, ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಚಿತ್ರವನ್ನು ಮರುಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಎಸ್ಎಸ್ಐಎಂಗೆ ಬೆಳಕಿನ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಅನೇಕ ಬಾರಿ ಬದಲಾಯಿಸುವ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ತಂತ್ರದ ತಾತ್ಕಾಲಿಕ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಸೀಮಿತಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಸ್ಯಾಚುರೇಟಿಂಗ್ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಂದಾಗಿ, ಮಾದರಿಯ ಮೇಲೆ ವಿಕಿರಣ ಹಾನಿಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುವ ಮತ್ತು ಎಸ್ಎಸ್ಐಎಂ ಅನ್ನು ಬಳಸಬಹುದಾದ ಸಂಭವನೀಯ ಅನ್ವಯಗಳನ್ನು ನಿರ್ಬಂಧಿಸುವ ಅತ್ಯಂತ ಫೋಟೋಸ್ಟೇಬಲ್ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ. ಈ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಉದಾಹರಣೆಗಳನ್ನು ಸ್ಟ್ರಕ್ಚರ್ಡ್ ಇಲ್ಯೂಮಿನೇಷನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (SIM) ವಿಭಾಗದ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆಃ ಜೀವಕೋಶದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್ಗಳ ಚಿತ್ರಗಳು ಮತ್ತು 3D-SIM ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯೊಂದಿಗೆ ದಾಖಲಿಸಲಾದ ಮೈಟೋಟಿಕ್ ಹಂತಗಳು. ಯಾದೃಚ್ಛಿಕ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ತಂತ್ರಗಳು ಸ್ಥಳೀಕರಣ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ಏಕ-ಅಣು ಸ್ಥಳೀಕರಣ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವು (ಎಸ್. ಎಂ. ಎಲ್. ಎಂ.) ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಪಾಯಿಂಟ್ ಸ್ಪ್ರೆಡ್ ಫಂಕ್ಷನ್ (ಪಿ. ಎಸ್. ಎಫ್.) ನೊಂದಿಗೆ ಅಳವಡಿಸುವ ಮೂಲಕ ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಸಾಧಿಸುವ ಎಲ್ಲಾ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ತಂತ್ರಗಳನ್ನು ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ಪಾಯಿಂಟ್ ಸ್ಪ್ರೆಡ್ ಕಾರ್ಯದ ಅಗಲವು (~ 250 ಎನ್ಎಂ) ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಮಿತಿಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಒಂದು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾದ ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆಯನ್ನು ನೀಡಿದರೆ, ಸಮೀಕರಣದ () ಪ್ರಕಾರ ಅದರ ತೀವ್ರತೆಯಿಂದ ಮಾತ್ರ ಸೀಮಿತವಾದ ನಿಖರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಅದರ ಸ್ಥಳವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುತ್ತದೆ. () ಸ್ಥಳೀಯಕರಣದ ನಿಖರತೆಯು Δloc ಆಗಿದ್ದರೆ, Δ ಎಂಬುದು ಪಿ. ಎಸ್. ಎಫ್. ನ ಎಫ್. ಡಬ್ಲ್ಯೂ. ಎಚ್. ಎಂ. (ಅರ್ಧ ಗರಿಷ್ಠ ಪೂರ್ಣ ಅಗಲ) ಮತ್ತು ಎನ್ ಎಂದರೆ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿದ ಫೋಟಾನ್ಗಳ ಸಂಖ್ಯೆ. ಈ ಫಿಟ್ಟಿಂಗ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾದ ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆಗಳಿಗೆ ಮಾತ್ರ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹವಾಗಿ ನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದು (ಡೀಕನ್ವಲ್ಯೂಷನ್ ನೋಡಿ), ಮತ್ತು ಆಸಕ್ತಿದಾಯಕ ಜೈವಿಕ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಎಷ್ಟು ದಟ್ಟವಾಗಿ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆಯೆಂದರೆ ಎಲ್ಲಾ ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆಗಳು ಒಂದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಸಕ್ರಿಯವಾಗಿದ್ದಾಗ ಫಿಟ್ಟಿಂಗ್ ಅಸಾಧ್ಯ. ಎಸ್. ಎಂ. ಎಲ್. ಎಂ ತಂತ್ರಗಳು ಒಂದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆಯ ವಿರಳ ಉಪಗುಂಪನ್ನು ಮಾತ್ರ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಮೂಲಕ, ಈ ಕೆಲವು ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆಯನ್ನು ನಿಖರವಾಗಿ ಸ್ಥಳೀಕರಿಸುವ ಮೂಲಕ, ಅವುಗಳನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮತ್ತು ಮತ್ತೊಂದು ಉಪಗುಂಪನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಮೂಲಕ ಈ ಸಂದಿಗ್ಧತೆಯನ್ನು ಪರಿಹರಿಸುತ್ತವೆ. ಹಿನ್ನೆಲೆ ಮತ್ತು ಕ್ಯಾಮರಾ ಪಿಕ್ಸೆಲೇಶನ್ ಅನ್ನು ಪರಿಗಣಿಸಿ, ಮತ್ತು ಒಂದು ವಿಶಿಷ್ಟ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಪಾಯಿಂಟ್ ಸ್ಪ್ರೆಡ್ ಫಂಕ್ಷನ್ (ಏರೀ ಡಿಸ್ಕ್) ಗಾಗಿ ಗಾಸಿಯನ್ ಅಂದಾಜು ಬಳಸಿ, ಸೈದ್ಧಾಂತಿಕ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಥಾಂಪ್ಸನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು ಪ್ರಸ್ತಾಪಿಸಿದ್ದಾರೆ. ಮತ್ತು ಮಾರ್ಟೆನ್ಸನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಸಂಯೋಜಿಸಿದ್ದಾರೆ. : ಇಲ್ಲಿ * σ ಎಂಬುದು ಅನೇಕ ಬಾರಿ ಅಳೆಯಿದರೆ ಒಂದೇ ಅಣುವಿನ ಕೇಂದ್ರ ಸ್ಥಳಗಳ ಗೌಸಿಯನ್ ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನವಾಗಿದೆ (ಉದಾ. ವೀಡಿಯೊದ ಚೌಕಟ್ಟುಗಳು). (ಘಟಕ m) * σPSF ಎಂಬುದು ಬಿಂದು ಹರಡುವಿಕೆಯ ಕ್ರಿಯೆಯ ಗಾಸಿಯನ್ ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನವಾಗಿದೆ, ಇದರ FWHM ಯು ಅರ್ನ್ಸ್ಟ್ ಅಬ್ಬೆ ಸಮೀಕರಣ d = λ/(2 N. A.) ಅನ್ನು ಅನುಸರಿಸುತ್ತದೆ. (ಘಟಕ m) * a ಎಂಬುದು ಪ್ರತಿ ಚಿತ್ರದ ಪಿಕ್ಸೆಲ್ನ ಗಾತ್ರವಾಗಿದೆ. (ಘಟಕ m) * ಎನ್ಎಸ್ಐಜಿ ಎಂದರೆ ಆಸಕ್ತಿಯ ಎಲ್ಲಾ ಪಿಕ್ಸೆಲ್ಗಳ ಮೇಲೆ ಒಟ್ಟು ಪಿಎಸ್ಎಫ್ನ ಫೋಟಾನ್ ಎಣಿಕೆಗಳು. (ಏಕಾಂಕರಹಿತ) * ಎನ್ಬಿಜಿ ಪ್ರತಿ ಪಿಕ್ಸೆಲ್ಗೆ ಸರಾಸರಿ ಹಿನ್ನೆಲೆ ಫೋಟಾನ್ ಎಣಿಕೆಗಳು (ಡಾರ್ಕ್ ಎಣಿಕೆಗಳು ಈಗಾಗಲೇ ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗಿದೆ), ಇದು ಕಾಲಾನಂತರದಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿ ಪಿಕ್ಸೆಲ್ನ ಪಾಯ್ಸನ್ ವಿತರಣಾ ಹಿನ್ನೆಲೆ ಶಬ್ದದ ಗಾಸಿಯನ್ ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನದ ಚೌಕ ಅಥವಾ ಹಿನ್ನೆಲೆ ಶಬ್ದದೊಂದಿಗೆ ಎಲ್ಲಾ ಪಿಕ್ಸೆಲ್ಗಳ ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನವಾಗಿದೆ, σbg2. ದೊಡ್ಡದಾದ σbg2, ಉತ್ತಮ ಅಂದಾಜು (ಉದಾ. σbg2> 10ಕ್ಕೆ ಒಳ್ಳೆಯದು, σbg2> 1000ಕ್ಕೆ ಉತ್ತಮವಾಗಿದೆ). (ಏಕಮಾನರಹಿತ) * ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಎಫ್. ಡಬ್ಲ್ಯೂ. ಎಚ್. ಎಂ. ~ <ಐ. ಡಿ. 1> ಗೌಸಿಯನ್ ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನದ ಪಟ್ಟುಗಳು. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ಸ್ಥಳೀಕರಣ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಸೂಕ್ತವಾದ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳು (ಉದಾ. STORM) ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಮಯದವರೆಗೆ ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಅಲ್ಲದ ಡಾರ್ಕ್ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ವಾಸಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ತೀವ್ರತೆಯ ಎಕ್ಸೈಟೇಶನ್ ಲೇಸರಿನೊಂದಿಗೆ ಯಾದೃಚ್ಛಿಕವಾಗಿ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಒಂದು ರೀಡ್ಔಟ್ ಲೇಸರ್ ಪ್ರತಿದೀಪಕವನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಬ್ಲೀಚ್ಗಳು ಅಥವಾ ಫೋಟೋಸ್ವಿಚ್ಗಳು ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳನ್ನು ಕಪ್ಪು ಸ್ಥಿತಿಗೆ ಹಿಂತಿರುಗಿಸುತ್ತದೆ, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 10-100 ಎಂಎಸ್ ಒಳಗೆ. ನ್ಯಾನೊಸ್ಕೇಲ್ ಸ್ಥಳಾಕೃತಿಯಲ್ಲಿ (ಪಿ. ಎ. ಐ. ಎನ್. ಟಿ.) ಚಿತ್ರಣಕ್ಕಾಗಿ ಬಿಂದುಗಳ ಶೇಖರಣೆಯಲ್ಲಿ, ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳು ಬಂಧಿಸುವ ಮೊದಲು ಪ್ರತಿದೀಪಕವಲ್ಲದವು ಮತ್ತು ನಂತರ ಪ್ರತಿದೀಪಕವಾಗಿರುತ್ತವೆ. ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಹೊರಸೂಸುವ ಫೋಟಾನ್ಗಳನ್ನು ಕ್ಯಾಮೆರಾದೊಂದಿಗೆ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ನ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಬರುವ ಚಿತ್ರವನ್ನು (ಇದು ಪಿಎಸ್ಎಫ್ನಿಂದ ವಿರೂಪಗೊಂಡಿದೆ) ಕೆಲವು ಆಂಗ್ಸ್ಟ್ರಾಮ್ಗಳ ಕ್ರಮದಲ್ಲಿಯೂ ಸಹ ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿಖರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಅಳವಡಿಸಬಹುದು. ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಹಲವಾರು ಸಾವಿರ ಬಾರಿ ಪುನರಾವರ್ತಿಸುವುದರಿಂದ ಎಲ್ಲಾ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳು ಪ್ರಕಾಶಮಾನವಾದ ಸ್ಥಿತಿಯ ಮೂಲಕ ಹೋಗಬಹುದು ಮತ್ತು ದಾಖಲಾಗುತ್ತವೆ. ಕಂಪ್ಯೂಟರ್ ನಂತರ ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಚಿತ್ರವನ್ನು ಪುನರ್ನಿರ್ಮಿಸುತ್ತದೆ. ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಗರಿಷ್ಠಗೊಳಿಸಲು ಈ ವಿಧಾನಗಳಿಗೆ ಬಳಸುವ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳ ಅಪೇಕ್ಷಣೀಯ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳೆಂದರೆ ಅವು ಪ್ರಕಾಶಮಾನವಾಗಿರಬೇಕು. ಅಂದರೆ, ಅವು ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಳಿವು ಗುಣಾಂಕ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದ ಇಳುವರಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿರಬೇಕು. ಅವು ಹೆಚ್ಚಿನ ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ ಅನುಪಾತವನ್ನು ಸಹ ಹೊಂದಿರಬೇಕು (ಬೆಳಕಿನ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಹೊರಸೂಸುವ ಫೋಟಾನ್ಗಳ ಸಂಖ್ಯೆ ಮತ್ತು ಕತ್ತಲೆಯ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಹೊರಸೂಸುವ ಫೋಟಾನ್ಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯ ನಡುವಿನ ಅನುಪಾತ). ಅಲ್ಲದೆ, ನಿಕ್ವಿಸ್ಟ್ ಮಾನದಂಡಗಳ ಪ್ರಕಾರ ದಟ್ಟವಾಗಿ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ಮಾದರಿಯು ಅಪೇಕ್ಷಣೀಯವಾಗಿದೆ. ಸ್ಥಳೀಕರಣ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ವಿಧಾನಗಳ ಬಹುಸಂಖ್ಯೆಯು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳ ಪ್ರಕಾರದಲ್ಲಿ ಭಿನ್ನವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರಲ್ ಪ್ರಿಸಿಷನ್ ಡಿಸ್ಟೆನ್ಸ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಎಸ್. ಪಿ. ಡಿ. ಎಂ.) ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಅನುಮತಿಸುವ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ಗಿಂತ ಒಂದೇ, ಸಣ್ಣ ಬೆಳಕಿನ ಮೂಲವನ್ನು ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದುಃ ಬೆಳಕು ಮಸುಕಾದ ಸ್ಥಳವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆಯಾದರೂ, ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಪಾಯಿಂಟ್ ಸ್ಪ್ರೆಡ್ ಕಾರ್ಯ, ಡಿಟೆಕ್ಟರ್ನ ಶಬ್ದ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು ಇತ್ಯಾದಿಗಳನ್ನು ಗಣನೆಗೆ ತೆಗೆದುಕೊಂಡು ಮಸುಕಾದ ಸ್ಥಳದ ಕೇಂದ್ರವನ್ನು ನಿಖರವಾಗಿ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲು ಕಂಪ್ಯೂಟರ್ ಕ್ರಮಾವಳಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಒಂದಕ್ಕೊಂದು ಹತ್ತಿರದಲ್ಲಿ ಹಲವಾರು ಮೂಲಗಳು ಇದ್ದಾಗ ಈ ವಿಧಾನವು ಕೆಲಸ ಮಾಡುವುದಿಲ್ಲಃ ಮೂಲಗಳು ನಂತರ ಎಲ್ಲಾ ಒಟ್ಟಿಗೆ ಮಸುಕಾಗುತ್ತವೆ. ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರಲ್ ಪ್ರಿಸಿಷನ್ ಡಿಸ್ಟೆನ್ಸ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಎಸ್. ಪಿ. ಡಿ. ಎಂ.) ಎಂಬುದು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದಲ್ಲಿನ ಸ್ಥಳೀಕರಣ ತಂತ್ರಗಳ ಒಂದು ಕುಟುಂಬವಾಗಿದ್ದು, ಇದು ಒಂದು ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಕೇವಲ ಕೆಲವು ಮೂಲಗಳನ್ನು ಅಳೆಯುವ ಮೂಲಕ ಅನೇಕ ಮೂಲಗಳಿರುವ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ಪರಿಹರಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಪರೀಕ್ಷೆಯಲ್ಲಿರುವ ಕಣಗಳು ವಿಭಿನ್ನ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರಲ್ ಸಿಗ್ನೇಚರ್ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದರೆ, ಸೂಕ್ತವಾದ ಬೆಳಕಿನ ಮೂಲಗಳು ಮತ್ತು ಫಿಲ್ಟರ್ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಒಂದು ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಕೆಲವೇ ಅಣುಗಳಿಂದ ಬೆಳಕನ್ನು ನೋಡಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುವಂತೆ ಪ್ರತಿ ಮೂಲವನ್ನು ಇತರರಿಂದ (ಅಂದರೆ, ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ) "ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಆಗಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ". ಇದು ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ಗಿಂತ ಹಲವಾರು ಪಟ್ಟು ಉತ್ತಮವಾದ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಸಾಧಿಸುತ್ತದೆ, ಇದನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಪಾಯಿಂಟ್ ಇಮೇಜ್ ಕಾರ್ಯದ ಮುಖ್ಯ ಗರಿಷ್ಠ ಅರ್ಧ-ಅಗಲದಿಂದ ಪ್ರತಿನಿಧಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಎಸ್. ಪಿ. ಡಿ. ಎಂ. ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಾಧಿಸಬಹುದಾದ ರಚನಾತ್ಮಕ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ವಿಭಿನ್ನ ವರ್ಣಪಟಲದ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳ ("ಟೋಪೋಲಾಜಿಕಲ್ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್") ಎರಡು ಪಂಕ್ಟಿಫಾರ್ಮ್ ಕಣಗಳ ನಡುವಿನ ಅಳೆಯಬಹುದಾದ ಅತ್ಯಂತ ಚಿಕ್ಕ ಅಂತರದ ಪರಿಭಾಷೆಯಲ್ಲಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಬಹುದು. ಸ್ಥಳೀಕರಣದ ನಿಖರತೆ, ಕಣಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆ ಇತ್ಯಾದಿಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದಂತೆ ಸೂಕ್ತ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ, "ಟೋಪೋಲಾಜಿಕಲ್ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್" ಒಂದು "ಸ್ಪೇಸ್ ಫ್ರೀಕ್ವೆನ್ಸಿ" ಗೆ ಅನುರೂಪವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಮಾಡೆಲಿಂಗ್ ತೋರಿಸಿದೆ, ಇದು ಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನದ ಪ್ರಕಾರ, ಹೆಚ್ಚು ಸುಧಾರಿತ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ಗೆ ಸಮಾನವಾಗಿದೆ. ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಜೀವಿತಾವಧಿ ಮತ್ತು ಇತರ ತಂತ್ರಗಳ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಅಣುಗಳನ್ನು ಇನ್ನೂ ಹೆಚ್ಚು ಸೂಕ್ಷ್ಮ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಬಹುದು. ಜೀನೋಮ್ ಸಂಶೋಧನೆಯಲ್ಲಿ (ಜೀನೋಮ್ನ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಸಂಘಟನೆಯ ಅಧ್ಯಯನ) ಒಂದು ಪ್ರಮುಖ ಅನ್ವಯವಾಗಿದೆ. ಬಳಕೆಯ ಮತ್ತೊಂದು ಪ್ರಮುಖ ಕ್ಷೇತ್ರವೆಂದರೆ ಪೊರೆಗಳ ರಚನೆಯ ಬಗೆಗಿನ ಸಂಶೋಧನೆಯಾಗಿದೆ. ಕೆಲವು ಫೋಟೋ-ಫಿಸಿಕಲ್ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು ಇದ್ದರೆ ಜಿಎಫ್ಪಿ, ಅಲೆಕ್ಸಾ ಬಣ್ಣಗಳು ಮತ್ತು ಫ್ಲೋರೆಸಿನ್ ಅಣುಗಳಂತಹ ಅನೇಕ ಪ್ರಮಾಣಿತ ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಬಣ್ಣಗಳಿಗೆ ಎಸ್. ಪಿ. ಡಿ. ಎಂ. ಫೈಮಾಡ್ ಲೋಕಲೈಸೇಶನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಸಾಧ್ಯವಿದೆ. ಭೌತಿಕವಾಗಿ ಮಾರ್ಪಡಿಸಬಹುದಾದ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳು (ಎಸ್. ಪಿ. ಡಿ. ಎಂ. ಫೈಮಾಡ್) ಎಂದು ಕರೆಯಲ್ಪಡುವ ಈ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದೊಂದಿಗೆ, ವಿಶೇಷ ಫೋಟೋ-ಸ್ವಿಚ್ ಮಾಡಬಹುದಾದ/ಫೋಟೋ-ಆಕ್ಟಿವೇಬಲ್ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಅಣುಗಳನ್ನು ಬಳಸಿದಾಗ ಎರಡು ಲೇಸರ್ ತರಂಗಾಂತರಗಳ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಇತರ ಸ್ಥಳೀಕರಣ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳಿಗೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿ ಸೂಕ್ತ ತೀವ್ರತೆಯ ಒಂದೇ ಲೇಸರ್ ತರಂಗಾಂತರವು ನ್ಯಾನೊಇಮೇಜಿಂಗ್ಗೆ ಸಾಕಾಗುತ್ತದೆ. ತಂಬಾಕು ಮೊಸಾಯಿಕ್ ವೈರಸ್ (ಟಿಎಂವಿ) ಕಣಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಅಥವಾ ವೈರಸ್-ಕೋಶಗಳ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯ ಅಧ್ಯಯನವು ಎಸ್. ಪಿ. ಡಿ. ಎಂ. ಫೈಮಾಡ್ನ ಬಳಕೆಯ ಮತ್ತೊಂದು ಉದಾಹರಣೆಯಾಗಿದೆ. ಸಿಂಗ್ಲೆಟ್-ಟ್ರಿಪ್ಲೆಟ್ ಸ್ಥಿತಿಯ ಪರಿವರ್ತನೆಗಳ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ, ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ಮುಂದುವರೆದಿದೆ ಮತ್ತು ಒಂದೇ ಅಣುವು ಬಹಳ ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ಹಿಂತಿರುಗಿಸಬಹುದಾದ ಡಾರ್ಕ್ ಸ್ಥಿತಿಗೆ (ಹಲವಾರು ಸೆಕೆಂಡುಗಳ ಅರ್ಧ-ಜೀವಿತಾವಧಿಯೊಂದಿಗೆ) ಬರುವ ಪರಿಣಾಮಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ಎಸ್. ಪಿ. ಡಿ. ಎಂ. ಫೈಮೋಡ್ಗೆ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ, ಇದರಿಂದ ಅದು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸ್ಥಿತಿಗೆ ಮರಳುತ್ತದೆ, ಇದು ಬಹಳ ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ, ಬದಲಾಯಿಸಲಾಗದ ಡಾರ್ಕ್ ಸ್ಥಿತಿಗೆ ಮರಳುವ ಮೊದಲು ಹಲವಾರು ಮಿಲಿಸೆಕೆಂಡುಗಳವರೆಗೆ ಅನೇಕ ಫೋಟಾನ್ಗಳನ್ನು ಹೊರಸೂಸುತ್ತದೆ. ಎಸ್. ಪಿ. ಡಿ. ಎಂ. ಫೈಮಾಡ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಅಣುಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಅವು ಒಂದೇ ವರ್ಣಪಟಲದ ಬೆಳಕಿನ ಆವರ್ತನವನ್ನು ಹೊರಸೂಸುತ್ತವೆ ಆದರೆ ಮಿನುಗುವ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ವಿಭಿನ್ನ ವರ್ಣಪಟಲದ ಸಹಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ. ಒಂದೇ ಜೀವಕೋಶದ ಎರಡು ಸಾವಿರ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸುವ ಮೂಲಕ, ಲೇಸರ್ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ನಿಖರತೆಯ ಮಾಪನಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಸುಧಾರಿತ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ನೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಳೀಕರಣದ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ದಾಖಲಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಿದೆ. ಜಿ. ಎಫ್. ಪಿ., ಆರ್. ಎಫ್. ಪಿ., ವೈ. ಎಫ್. ಪಿ., ಅಲೆಕ್ಸಾ 488, ಅಲೆಕ್ಸಾ 568, ಅಲೆಕ್ಸಾ 647, ಸಿ. ಐ. 2, ಸಿ. ಐ. 3, ಅಟೊ 488 ಮತ್ತು ಫ್ಲೋರೆಸಿನ್ಗಳು ಈಗಾಗಲೇ ಎಸ್. ಪಿ. ಡಿ. ಎಂ. ಫೈಮಾಡ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದೊಂದಿಗೆ ಯಶಸ್ವಿಯಾಗಿ ಬಳಸಲ್ಪಟ್ಟ ಪ್ರಮಾಣಿತ ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಬಣ್ಣಗಳಾಗಿವೆ. 3ಡಿ (ಕೋಲ್ಡ್) ಯಲ್ಲಿ ಕ್ರಯೋಜೆನಿಕ್ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಸ್ಥಳೀಕರಣವು 3ಡಿ (ಕೋಲ್ಡ್) ಯಲ್ಲಿ ಕ್ರಯೋಜೆನಿಕ್ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಸ್ಥಳೀಕರಣವು ಆಂಗ್ಟ್ರಾಮ್-ಸ್ಕೇಲ್ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ನೊಂದಿಗೆ ಒಂದೇ ಸಣ್ಣ ಮತ್ತು ಮಧ್ಯಮ ಗಾತ್ರದ ಜೈವಿಕ ಅಣುವಿನೊಳಗೆ ಅನೇಕ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ತಾಣಗಳನ್ನು ಸ್ಥಳೀಕರಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುವ ಒಂದು ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ. ಈ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ ಸ್ಥಳೀಕರಣದ ನಿಖರತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ನಿಧಾನವಾದ ದ್ಯುತಿರಾಸಾಯನಿಕತೆಯು ಪ್ರತಿ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ನಿಂದ ದ್ಯುತಿವಿದ್ಯುತೀಕದ ಮೊದಲು ಹೊರಸೂಸಬಹುದಾದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಫೋಟಾನ್ಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ, ಕ್ರಯೋಜೆನಿಕ್ ಸಂಭವನೀಯ ಸ್ಥಳೀಕರಣ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವು ಸಣ್ಣ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗೆ ಜೋಡಿಸಲಾದ ಹಲವಾರು ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳ 3D ಸ್ಥಾನಗಳನ್ನು ಪರಿಹರಿಸಲು ಅಗತ್ಯವಾದ ಉಪ-ಆಣ್ವಿಕ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಸಾಧಿಸುತ್ತದೆ. ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯಿಂದ ತಿಳಿದಿರುವ ಕ್ರಮಾವಳಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಳ್ಳುವ ಮೂಲಕ, ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳ 2ಡಿ ಪ್ರಕ್ಷೇಪಗಳನ್ನು 3ಡಿ ಸಂರಚನೆಯಾಗಿ ಪುನರ್ನಿರ್ಮಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಲೇಬಲ್ನ ಗಾತ್ರವನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ, COLD ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು ಅದರ ಮೂಲಭೂತ ಮಿತಿಗೆ ತರುತ್ತದೆ. ಮೌಲ್ಯಯುತವಾದ ಪೂರಕ ಮಾಹಿತಿ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸಲು ಈ ವಿಧಾನವನ್ನು ಎಕ್ಸ್-ರೇ ಸ್ಫಟಿಕಶಾಸ್ತ್ರ, ಮ್ಯಾಗ್ನೆಟಿಕ್ ರೆಸೋನೆನ್ಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಮತ್ತು ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯಂತಹ ಇತರ ರಚನಾತ್ಮಕ ಜೀವಶಾಸ್ತ್ರ ತಂತ್ರಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಬಹುದು. ಬೈಂಡಿಂಗ್-ಆಕ್ಟಿವೇಟೆಡ್ ಲೋಕಲೈಸೇಶನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಬಿ. ಎ. ಎಲ್. ಎಂ.) ಬೈಂಡಿಂಗ್-ಆಕ್ಟಿವೇಟೆಡ್ ಲೋಕಲೈಸೇಶನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಬಿ. ಎ. ಎಲ್. ಎಂ.) ಯು ಸಿಂಗಲ್-ಮಾಲಿಕ್ಯೂಲ್ ಲೋಕಲೈಸೇಶನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಎಸ್. ಎಂ. ಎಲ್. ಎಂ.) ಯ ಸಾಮಾನ್ಯ ಪರಿಕಲ್ಪನೆಯಾಗಿದೆಃ ಡಿ. ಎನ್. ಎ. ಮತ್ತು ಡೈಗಳ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸುವ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಡಿ. ಎನ್. ಎ.-ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಡೈಗಳ ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್. ರಾಸಾಯನಿಕ ಪರಿಸರವನ್ನು ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ಸರಿಹೊಂದಿಸುವ ಮೂಲಕ-ಸ್ಥಳೀಯ, ಹಿಂತಿರುಗಿಸಬಹುದಾದ ಡಿಎನ್ಎ ಕರಗುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಂಕೇತದ ಮೇಲೆ ಸಂಕರೀಕರಣ ನಿಯಂತ್ರಣಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ-ಡಿಎನ್ಎ-ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಡೈ ಅಣುಗಳನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸಬಹುದು. ಇಂಟರ್ಕ್ಯಾಲೇಟಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಮೈನರ್-ಗ್ರೂವ್ ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಡಿಎನ್ಎ ಬಣ್ಣಗಳನ್ನು ಒಂದು ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಕೆಲವು ಡಿಎನ್ಎ-ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಡೈ ಸಿಗ್ನಲ್ಗಳನ್ನು ಮಾತ್ರ ನೋಂದಾಯಿಸಲು ಮತ್ತು ದೃಗ್ವೈಜ್ಞಾನಿಕವಾಗಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಬಳಸಬಹುದು. ಡಿಎನ್ಎ ರಚನೆಯ ಏರಿಳಿತ-ನೆರವಿನ ಬಿ. ಎ. ಎಲ್. ಎಂ. (ಎಫ್. ಬಿ. ಎ. ಎಲ್. ಎಂ.) ಅನ್ನು ಪರಮಾಣು ವಾಸ್ತುಶಿಲ್ಪದಲ್ಲಿ ನ್ಯಾನೊಸ್ಕೇಲ್ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳಿಗೆ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ, ಸುಮಾರು 50 ಎನ್. ಎಂ. ನ ನಿರೀಕ್ಷಿತ ರಚನಾತ್ಮಕ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಹೊಂದಿದೆ. ಡಿಎನ್ಎ ರಚನೆಯ ಏರಿಳಿತಗಳ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಬೈಂಡಿಂಗ್-ಆಕ್ಟಿವೇಟೆಡ್ ಲೋಕಲೈಸೇಶನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯೊಂದಿಗೆ ಕ್ರೊಮಾಟಿನ್ ನ್ಯಾನೊಸ್ಟ್ರಕ್ಚರ್ನ ಚಿತ್ರಣ. ಇತ್ತೀಚೆಗೆ, ಅಮಿಲಾಯ್ಡ್ಗೆ ಬಂಧಿಸಿದಾಗ ಎನ್ಐಎಡಿ-4ನ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಕ್ವಾಂಟಮ್ ಇಳುವರಿಯ ಗಮನಾರ್ಹ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಅಮಿಲಾಯ್ಡ್ ಫೈಬ್ರಿಲ್ಗಳು ಮತ್ತು ಒಲಿಗೋಮರ್ಗಳ ಬಿಎಎಲ್ಎಂ ಚಿತ್ರಣಕ್ಕಾಗಿ ಬಳಸಿಕೊಳ್ಳಲಾಯಿತು. STORM, PALM, ಮತ್ತು FPALM ಸ್ಟೋಚಾಸ್ಟಿಕ್ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ರಿಕನ್ಸ್ಟ್ರಕ್ಷನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (STORM), ಫೋಟೋ ಆಕ್ಟಿವೇಟೆಡ್ ಲೋಕಲೈಸೇಶನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (PALM), ಮತ್ತು ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಫೋಟೋ-ಆಕ್ಟಿವೇಶನ್ ಲೋಕಲೈಸೇಶನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (FPALM) ಗಳು ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್ ತಂತ್ರಗಳಾಗಿವೆ, ಇದು ಹೆಚ್ಚಿನ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ರಚಿಸಲು ಫೋಟೋವಿಚಬಲ್ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳ ಅನುಕ್ರಮ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಸಮಯ-ಪರಿಹರಿಸಿದ ಸ್ಥಳೀಕರಣವನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ. ಚಿತ್ರಣದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಯಾವುದೇ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಕ್ಷಣದಲ್ಲಿ ದೃಗ್ವೈಜ್ಞಾನಿಕವಾಗಿ ಪರಿಹರಿಸಬಹುದಾದ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳ ಉಪವಿಭಾಗವನ್ನು ಮಾತ್ರ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸ್ಥಿತಿಗೆ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅಂದರೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ನ ಏಕ-ಅಣು ಚಿತ್ರಗಳ ಸೆಂಟ್ರಾಯ್ಡ್ ಸ್ಥಾನಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರತಿ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ನ ಸ್ಥಾನವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿಖರತೆಯಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಬಹುದು. ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳ ಒಂದು ಉಪಗುಂಪನ್ನು ತರುವಾಯ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಮತ್ತೊಂದು ಉಪಗುಂಪನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಿ ಚಿತ್ರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ಪುನರಾವರ್ತನೆಯು ಹಲವಾರು ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳನ್ನು ಸ್ಥಳೀಕರಿಸಲು ಮತ್ತು ಚಿತ್ರ ದತ್ತಾಂಶದಿಂದ ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಚಿತ್ರವನ್ನು ನಿರ್ಮಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ. ಈ ಮೂರು ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಅಲ್ಪಾವಧಿಯಲ್ಲಿಯೇ ಸ್ವತಂತ್ರವಾಗಿ ಪ್ರಕಟಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ತತ್ವಗಳು ಒಂದೇ ಆಗಿವೆ. STORM ಅನ್ನು ಮೂಲತಃ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳು ಅಥವಾ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳಿಗೆ ಜೋಡಿಸಲಾದ Cy5 ಮತ್ತು Cy3 ವರ್ಣಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ, ಆದರೆ PALM ಮತ್ತು FPALM ಅನ್ನು ಫೋಟೋವಿಚ್ ಮಾಡಬಹುದಾದ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ. ತಾತ್ವಿಕವಾಗಿ ಯಾವುದೇ ಫೋಟೋಸ್ವಿಚಬಲ್ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು, ಮತ್ತು ವಿವಿಧ ಶೋಧಕಗಳು ಮತ್ತು ಲೇಬಲಿಂಗ್ ತಂತ್ರಗಳೊಂದಿಗೆ STORM ಅನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಲಾಗಿದೆ. Cy5 ನಂತಹ ಏಕ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳ ಯಾದೃಚ್ಛಿಕ ಫೋಟೋಸ್ವಿಚಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, STORM ಅನ್ನು ಒಂದೇ ಕೆಂಪು ಲೇಸರ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಮೂಲದೊಂದಿಗೆ ನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದು. ಕೆಂಪು ಲೇಸರ್ ಎರಡೂ ಸೈ5 ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ ಅನ್ನು ಅಡಕ್ಟ್ ರಚನೆಯ ಮೂಲಕ ಡಾರ್ಕ್ ಸ್ಥಿತಿಗೆ ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ತರುವಾಯ ಅಣುವನ್ನು ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಸ್ಥಿತಿಗೆ ಹಿಂತಿರುಗಿಸುತ್ತದೆ. STORM ನೊಂದಿಗೆ ಇತರ ಅನೇಕ ವರ್ಣಗಳನ್ನು ಸಹ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ. ಏಕ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳ ಜೊತೆಗೆ, ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ (ಅಲೆಕ್ಸಾ 405, ಸೈ2, ಅಥವಾ ಸೈ3) ಮತ್ತು ಫೋಟೋವಿಚಬಲ್ ರಿಪೋರ್ಟರ್ ಡೈ (ಸೈ5, ಅಲೆಕ್ಸಾ 647, Cy5.5, ಅಥವಾ ಸೈ7) ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಡೈ-ಜೋಡಿಗಳನ್ನು ಸ್ಟೋರ್ಮ್ನೊಂದಿಗೆ ಬಳಸಬಹುದು. ಈ ಯೋಜನೆಯಲ್ಲಿ, ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್, ಅದರ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಗರಿಷ್ಠ ಮಟ್ಟಕ್ಕೆ ಹತ್ತಿರವಾದಾಗ, ಫೋಟೋವಿಚ್ ಮಾಡಬಹುದಾದ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸ್ಥಿತಿಗೆ ಪುನಃ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಬಳಸಿದ ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ ಅನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ, ಅಥವಾ ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಥವಾ ಇಲ್ಲದೆ ವರ್ಣಪಟಲದ ವಿಭಿನ್ನವಾದ ಫೋಟೋವಿಚ್ ಮಾಡಬಹುದಾದ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, ಡೈ-ಜೋಡಿಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ವಿಭಿನ್ನ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ತರಂಗಾಂತರಗಳನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೂಲಕ ಬಹುವರ್ಣದ ಚಿತ್ರಣವನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗಿದೆ. ಫೋಟೋಸ್ವಿಚಬಲ್ ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳನ್ನು ಸಹ ಬಳಸಬಹುದು. ಪ್ರತಿಕಾಯ ಕಲೆಹಾಕುವಿಕೆ, ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳ ನೇರ ಸಂಯೋಜನೆ ಮತ್ತು ಜೆನೆಟಿಕ್ ಎನ್ಕೋಡಿಂಗ್ನೊಂದಿಗೆ ಫೋಟೋವಿಚ್ ಮಾಡಬಹುದಾದ ಶೋಧಕಗಳೊಂದಿಗೆ ಜೈವಿಕ ರಚನೆಗಳ ಅತ್ಯಂತ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಲೇಬಲಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಸಾಧಿಸಲಾಗಿದೆ. ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಅಸ್ಟಿಗ್ಮ್ಯಾಟಿಸಮ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು STORM ಅನ್ನು ಮೂರು ಆಯಾಮದ ಚಿತ್ರಣಕ್ಕೂ ವಿಸ್ತರಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದರಲ್ಲಿ ಪಾಯಿಂಟ್ ಸ್ಪ್ರೆಡ್ ಫಂಕ್ಷನ್ನ ಅಂಡಾಕಾರದ ಆಕಾರವು ಹಲವಾರು ಮೈಕ್ರೋಮೀಟರ್ ದಪ್ಪದ ಮಾದರಿಗಳಿಗೆ x, y ಮತ್ತು z ಸ್ಥಾನಗಳನ್ನು ಸಂಕೇತಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಇದನ್ನು ಜೀವಂತ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರದರ್ಶಿಸಲಾಗಿದೆ. ಇಲ್ಲಿಯವರೆಗೆ, ಈ ತಂತ್ರದಿಂದ ಸಾಧಿಸಲಾದ ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಪಾರ್ಶ್ವದ ಆಯಾಮಗಳಲ್ಲಿ ~ 20 ಎನ್ಎಂ ಮತ್ತು ಅಕ್ಷೀಯ ಆಯಾಮದಲ್ಲಿ ~ 50 ಎನ್ಎಂ ಆಗಿದೆ; ಮತ್ತು ತಾತ್ಕಾಲಿಕ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ 0.1-0.33s ನಷ್ಟು ವೇಗವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ನ್ಯಾನೊಸ್ಕೇಲ್ ಸ್ಥಳಾಕೃತಿಯಲ್ಲಿ (ಪಿ. ಎ. ಐ. ಎನ್. ಟಿ.) ಚಿತ್ರಣಕ್ಕಾಗಿ ಅಂಕಗಳ ಶೇಖರಣೆ ನ್ಯಾನೊಸ್ಕೇಲ್ ಸ್ಥಳಾಕೃತಿಯಲ್ಲಿ (ಪಿ. ಎ. ಐ. ಎನ್. ಟಿ.) ಚಿತ್ರಣಕ್ಕಾಗಿ ಅಂಕಗಳ ಶೇಖರಣೆಯು ಏಕ-ಅಣು ಸ್ಥಳೀಕರಣ ವಿಧಾನವಾಗಿದ್ದು, ಇದು ಆಣ್ವಿಕ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ/ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ ಮತ್ತು ದ್ಯುತಿವಿದ್ಯುಜ್ಜನಕ/ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯ ಮೂಲಕ ಸಂಭವನೀಯ ಏಕ-ಅಣು ಪ್ರತಿದೀಪಕವನ್ನು ಸಾಧಿಸುತ್ತದೆ. ಬಳಸಿದ ಮೊದಲ ಬಣ್ಣ ನೈಲ್ ಕೆಂಪು, ಇದು ಜಲೀಯ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿದೀಪಕವಲ್ಲದ ಆದರೆ ಮೈಸೆಲ್ಗಳು ಅಥವಾ ಜೀವಂತ ಜೀವಕೋಶದ ಗೋಡೆಗಳಂತಹ ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಪರಿಸರದಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸಿದಾಗ ಪ್ರತಿದೀಪಕವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಹೀಗಾಗಿ, ವರ್ಣದ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ನ್ಯಾನೊಮೋಲಾರ್ ಮಟ್ಟದಲ್ಲಿ ಚಿಕ್ಕದಾಗಿ ಇಡಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ವಿವರ್ತನ-ಸೀಮಿತ ಪ್ರದೇಶಕ್ಕೆ ಅಣುವಿನ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯ ಪ್ರಮಾಣವು ಮಿಲಿಸೆಕೆಂಡ್ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿದೆ. ಸ್ಥಿರವಾದ ಗುರಿಗೆ ಏಕ-ಬಣ್ಣದ ಅಣುಗಳ (ಶೋಧಕಗಳು) ಸಂಭವನೀಯ ಬಂಧವನ್ನು ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ವೈಡ್ಫೀಲ್ಡ್ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಾದೇಶಿಕವಾಗಿ ಮತ್ತು ತಾತ್ಕಾಲಿಕವಾಗಿ ಪರಿಹರಿಸಬಹುದು. ಪ್ರತಿ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಡಾರ್ಕ್ ಸ್ಥಿತಿಗೆ ಮರಳಿಸಲು ಫೋಟೋಬ್ಲೆಚ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಮುಂದಿನ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಬಂಧಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಗಮನಿಸಬಹುದು. ಇತರ ಯಾದೃಚ್ಛಿಕ ವಿಧಾನಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಈ ವಿಧಾನದ ಪ್ರಯೋಜನವೆಂದರೆ, ಸ್ಥಿರ ಗುರಿಯ ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಚಿತ್ರವನ್ನು ಪಡೆಯುವುದರ ಜೊತೆಗೆ, ಇದು ಹರಡುವ ಪ್ರೋಬ್ ಅಣುಗಳ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಬಂಧಿಸುವ ಚಲನಶಾಸ್ತ್ರವನ್ನು, ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ, ಗುರಿಗೆ ಅಳೆಯಬಹುದು. 3ಡಿ ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ತಂತ್ರವನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸುವುದು (ಉದಾ. ಡಬಲ್-ಹೆಲಿಕ್ಸ್ ಪಾಯಿಂಟ್ ಸ್ಪ್ರೆಡ್ ಕಾರ್ಯವು ಮೊರ್ನರ್ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ), ಫೋಟೋ-ಆಕ್ಟಿವೇಟೆಡ್ ಡೈಗಳು, ಪವರ್-ಡಿಪೆಂಡೆಂಟ್ ಆಕ್ಟಿವ್ ಇಂಟರ್ಮಿಟೆನ್ಸಿ, ಮತ್ತು ನ್ಯಾನೊಸ್ಕೇಲ್ ಸ್ಥಳಾಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ಇಮೇಜಿಂಗ್ಗಾಗಿ ಪಾಯಿಂಟ್ಗಳ ಶೇಖರಣೆ, ಸ್ಪ್ರೈಪೈಂಟ್ (ಸ್ಪ್ರೈ = ಸೂಪರ್ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಬೈ ಪೊವೆರ್-ಡಿಪೆಂಡೆಂಟ್ ಆಕ್ಟಿವ್ ಇಂಟರ್ಮಿಟೆನ್ಸಿ) ಲೈವ್-ಸೆಲ್ ಗೋಡೆಗಳನ್ನು ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ವ್ ಮಾಡಬಹುದು. ಬಣ್ಣದ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ/ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಫೋಟೊಬ್ಲೆಚಿಂಗ್/ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ ದರಗಳ ನಡುವೆ ಸಮತೋಲನವನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳುವ ಮೂಲಕ PAINT ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಸಮತೋಲನವನ್ನು ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ತತ್ವಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಂದಾಜು ಮಾಡಬಹುದು. ಅನಿಲ ಅಥವಾ ದ್ರವ ದ್ರಾವಣದ ಮೇಲ್ಮೈ ಅಥವಾ ಇಂಟರ್ಫೇಸ್ಗೆ ದುರ್ಬಲ ದ್ರಾವಣದ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ ಅಥವಾ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಫಿಕ್ನ ಪ್ರಸರಣದ ನಿಯಮಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಲೆಕ್ಕ ಹಾಕಬಹುದು. ಫೋಟೊಬ್ಲೆಚಿಂಗ್/ಡಿಸಾರ್ಪ್ಷನ್ ದರವನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ದ್ರಾವಣದ ಸ್ಥಿತಿ ಮತ್ತು ಬೆಳಕಿನ ಶಕ್ತಿಯ ಸಾಂದ್ರತೆಗೆ ಅಳೆಯಬಹುದು. ಡಿಎನ್ಎ-ಪ್ಯಾಂಟ್ ಅನ್ನು ನಿಯಮಿತ ವರ್ಣಗಳನ್ನು ಬಳಸಲು ಮತ್ತಷ್ಟು ವಿಸ್ತರಿಸಲಾಗಿದೆ, ಅಲ್ಲಿ ಡೈ-ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ಡಿಎನ್ಎ ಪ್ರೋಬ್ ಅನ್ನು ಸ್ಥಿರ ಡಿಎನ್ಎ ಒರಿಗಮಿಯೊಂದಿಗೆ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಬಂಧಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಅನ್ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಸಂಭವನೀಯ ಏಕ-ಅಣು ಚಿತ್ರಣವನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಡಿಎನ್ಎ-ಪ್ಯಾಂಟ್ ಇನ್ನು ಮುಂದೆ ಪರಿಸರ-ಸೂಕ್ಷ್ಮ ವರ್ಣಗಳಿಗೆ ಸೀಮಿತವಾಗಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಗುರಿಯತ್ತ ಶೋಧಕಗಳ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ ಚಲನಶಾಸ್ತ್ರ ಎರಡನ್ನೂ ಅಳೆಯಬಹುದು. ಈ ವಿಧಾನವು ಚಲಿಸುವ ವರ್ಣಗಳ ಕ್ಯಾಮರಾ ಮಸುಕಾಗುವ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ. ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯ ಬಣ್ಣವು ಹರಡಿದಾಗ, ಅದರ ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ವೇಗದ ವೇಗ ಮತ್ತು ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ದೀರ್ಘವಾದ ಕ್ಯಾಮರಾ ಮಾನ್ಯತೆ ಸಮಯದಿಂದಾಗಿ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಸಿಸಿಡಿ ಕ್ಯಾಮೆರಾದಲ್ಲಿನ ಅದರ ಚಿತ್ರಣವು ಮಸುಕಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಹಿನ್ನೆಲೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಇದು ಒಂದು ನಿಗದಿತ ಗುರಿಯೊಂದಿಗೆ ಬಂಧಿಸಿದಾಗ, ಬಣ್ಣವು ಚಲಿಸುವುದನ್ನು ನಿಲ್ಲಿಸುತ್ತದೆ; ಮತ್ತು ಪಾಯಿಂಟ್ ಸ್ಪ್ರೆಡ್ ಕಾರ್ಯಕ್ಕೆ ಸ್ಪಷ್ಟವಾದ ಇನ್ಪುಟ್ ಅನ್ನು ಸಾಧಿಸಬಹುದು. ಈ ವಿಧಾನದ ಪದವು ಎಂ. ಬಿ. ಪಿ. ಎ. ಐ. ಎನ್. ಟಿ. (ಚಲನೆಯ ಮಸುಕನ್ನು ಸೂಚಿಸುವ "ಎಂ. ಬಿ".). ಚಿತ್ರಣಕ್ಕಾಗಿ ಒಟ್ಟು ಆಂತರಿಕ ಪ್ರತಿಫಲನ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು (ಟಿ. ಐ. ಆರ್. ಎಫ್.) ಬಳಸಿದಾಗ, ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಆಳವು ತಲಾಧಾರದಿಂದ ~ 100 ಎನ್. ಎಂ. ಗೆ ಸೀಮಿತವಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ತಲಾಧಾರದ ಬಳಿ ಮಸುಕಾದ ವರ್ಣಗಳಿಂದ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಹಿನ್ನೆಲೆಯನ್ನು ಮತ್ತು ಬೃಹತ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿನ ಹಿನ್ನೆಲೆಯನ್ನು ಮತ್ತಷ್ಟು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಅತ್ಯಂತ ಪ್ರಕಾಶಮಾನವಾದ ವರ್ಣಗಳನ್ನು ಎಂ. ಬಿ. ಪಿ. ಎ. ಐ. ಎನ್. ಟಿ. ಗೆ ಬಳಸಬಹುದು, ಇದು ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಸೌಮ್ಯವಾದ ಫೋಟೋಎಕ್ಸೈಟೇಶನ್ ತೀವ್ರತೆಗಳ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ~ 20 ಎನ್. ಎಂ. ನ ವಿಶಿಷ್ಟ ಏಕ-ಚೌಕಟ್ಟಿನ ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ಗಳನ್ನು ಮತ್ತು ~ 20 ಎಂಎಸ್ನ ಏಕ-ಅಣು ಚಲನಶೀಲ ತಾತ್ಕಾಲಿಕ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ಗಳನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ, ಇದು ಏಕ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳ ಆಣ್ವಿಕ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಉಪಯುಕ್ತವಾಗಿದೆ. ದತ್ತಾಂಶ ಸ್ವಾಧೀನದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಫೋರಿಯರ್ ಸಮತಲದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗಿರುವ ತಿರುಗುವಿಕೆಯ ಹಂತದ ಮುಖವಾಡವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮತ್ತು ತಾತ್ಕಾಲಿಕ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ವಿಕೃತ ಪಾಯಿಂಟ್ ಸ್ಪ್ರೆಡ್ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಪರಿಹರಿಸುವ ಮೂಲಕ ತಾತ್ಕಾಲಿಕ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಮತ್ತಷ್ಟು ಸುಧಾರಿಸಲಾಗಿದೆ (20 ಬಾರಿ). ಈ ವಿಧಾನವನ್ನು ಸೂಪರ್ ಟೆಂಪೋರಲ್-ರೆಸಲ್ವ್ಡ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಎಸ್ಟಿಆರ್ಇಎಂ) ಎಂದು ಹೆಸರಿಸಲಾಯಿತು. ಲೇಬಲ್-ಮುಕ್ತ ಸ್ಥಳೀಕರಣ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಸ್ಥಳೀಕರಣ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಎಸ್. ಪಿ. ಡಿ. ಎಂ. ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, ಲೇಬಲ್-ಮುಕ್ತ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿಯೂ ಸಹ, ಸುಮಾರು 50 ಎನ್. ಎಂ. ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ರಚನೆಗಳ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಸಾಧಿಸಬಹುದು. ಎರಡು ವಿಭಿನ್ನ ಲೇಸರ್ ತರಂಗಾಂತರಗಳನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೂಲಕ, ಎಸ್. ಪಿ. ಡಿ. ಎಂ. ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ವೈಡ್-ಫೀಲ್ಡ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲಾಗದ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ವಸ್ತುಗಳನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸುತ್ತದೆ, ಜೊತೆಗೆ ಆಟೋಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ರಚನೆಗಳ ಗಣನೀಯ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಸುಧಾರಣೆಯನ್ನು ಮಾಡುತ್ತದೆ. ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ, ಸ್ಥಳೀಕರಣ ಚಿತ್ರದಲ್ಲಿನ ಪತ್ತೆಯಾದ ವಸ್ತುಗಳ ಸ್ಥಾನಗಳು ಪ್ರಕಾಶಮಾನ-ಕ್ಷೇತ್ರ ಚಿತ್ರದಲ್ಲಿರುವ ಸ್ಥಾನಗಳಿಗೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗುತ್ತವೆ. ಲೇಬಲ್-ಮುಕ್ತ ಸೂಪರ್ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು ಮೇಲ್ಮೈ-ವರ್ಧಿತ ರಾಮನ್ ಚದುರುವಿಕೆಯ ಸಂಕೇತದ ಏರಿಳಿತಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೆಚ್ಚು ಏಕರೂಪದ ಪ್ಲಾಸ್ಮೋನಿಕ್ ಮೆಟಾ-ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ಪ್ರದರ್ಶಿಸಲಾಗಿದೆ. ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಸ್ಟೋಕ್ಸ್ಟಿಕಲ್ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ರಿಕನ್ಸ್ಟ್ರಕ್ಷನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಡಿ. ಎಸ್. ಟಿ. ಓ. ಆರ್. ಎಂ) ಡಿ. ಎಸ್. ಟಿ. ಓ. ಆರ್. ಎಂ ಒಂದೇ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ನ ಫೋಟೋಸ್ವಿಚಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ. ಡಿ. ಎಸ್. ಟಿ. ಓ. ಆರ್. ಎಂನಲ್ಲಿ, ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಮತ್ತು ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಿಸುವ ಬಫರಿಂಗ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ (ಆರ್. ಓ. ಎಕ್ಸ್. ಎಸ್) ಹುದುಗಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿದೀಪಕವು ಉತ್ತೇಜಿತವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ, ಯಾದೃಚ್ಛಿಕವಾಗಿ, ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ ಬಫರ್ನ ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಣ ಸ್ಥಿತಿಗೆ ಸೂಕ್ಷ್ಮವಾಗಿರುವ ತ್ರಿವಳಿ ಅಥವಾ ಇತರ ಯಾವುದೇ ಕಪ್ಪು ಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಪ್ರವೇಶಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದ ಅವುಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿದೀಪಕವಾಗಿಸಬಹುದು, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಏಕ ಅಣುವಿನ ಸ್ಥಾನಗಳನ್ನು ದಾಖಲಿಸಬಹುದು. ಡಿ. ಎಸ್. ಟಿ. ಓ. ಆರ್. ಎಂ. ವಿಧಾನದ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯು ಸುಮಾರು ಒಂದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ 3 ಸ್ವತಂತ್ರ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳಲ್ಲಿ ಸಂಭವಿಸಿತು ಮತ್ತು ಇದನ್ನು "ರಿವರ್ಸಿಬಲ್ ಫೋಟೊಬ್ಲೀಚಿಂಗ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ" (ಆರ್. ಪಿ. ಎಂ.), "ಗ್ರೌಂಡ್ ಸ್ಟೇಟ್ ಡಿಪ್ಲೀಷನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ನಂತರ ಇಂಡಿವಿಜುವಲ್ ಮಾಲಿಕ್ಯೂಲ್ ರಿಟರ್ನ್" (ಜಿ. ಎಸ್. ಡಿ. ಐ. ಎಂ.), ಮತ್ತು ಈಗ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಅಂಗೀಕರಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಮೊನಿಕರ್ ಡಿ. ಎಸ್. ಟಿ. ಓ. ಆರ್. ಎಂ. ಎಂದೂ ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತಿತ್ತು. ಸ್ಥಳೀಕರಣ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ತಂತ್ರಾಂಶವು ಕೆಲವೇ ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಸಕ್ರಿಯ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳ ಲಕ್ಷಾಂತರ ಚಿತ್ರಗಳಿಗೆ ಪಾಯಿಂಟ್ ಸ್ಪ್ರೆಡ್ ಫಂಕ್ಷನ್ (ಪಿಎಸ್ಎಫ್) ಅನ್ನು ನಿಖರವಾಗಿ ಹೊಂದಿಸುವ ತಂತ್ರಾಂಶದ ಮೇಲೆ ಹೆಚ್ಚು ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿದೆ. ನೈಸರ್ಗಿಕ ವಿಜ್ಞಾನಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸುವ ಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ವಿಧಾನಗಳು ಮತ್ತು ಸಾಫ್ಟ್ವೇರ್ ಸೂಟ್ಗಳು ಈ ಸಮಸ್ಯೆಗಳನ್ನು ಗಣನೆಗೆ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಲು ತುಂಬಾ ನಿಧಾನವಾಗಿರುವುದರಿಂದ, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಅಳೆಯುವ ದತ್ತಾಂಶವನ್ನು ಸಂಸ್ಕರಿಸಲು ಗಂಟೆಗಳ ಗಣನೆಯನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುವುದರಿಂದ, ವಿಶೇಷ ಸಾಫ್ಟ್ವೇರ್ ಪ್ರೋಗ್ರಾಂಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ. ಈ ಸ್ಥಳೀಕರಣ ತಂತ್ರಾಂಶ ಪ್ಯಾಕೇಜುಗಳಲ್ಲಿ ಹಲವು ಮುಕ್ತ ಮೂಲವಾಗಿವೆ; ಅವುಗಳನ್ನು ಎಸ್. ಎಂ. ಎಲ್. ಎಂ. ತಂತ್ರಾಂಶ ಮಾನದಂಡದಲ್ಲಿ ಪಟ್ಟಿ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ಅಣುಗಳ ಸ್ಥಾನಗಳನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಿದ ನಂತರ, ಸ್ಥಳಗಳನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಬೇಕಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರದರ್ಶನಕ್ಕಾಗಿ ಹಲವಾರು ಕ್ರಮಾವಳಿಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ. ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಫ್ಲಕ್ಯುಯೇಷನ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್ (ಎಸ್. ಓ. ಎಫ್. ಐ.) ಪಿಕ್ಸೆಲ್ಗಳ ತಾತ್ಕಾಲಿಕ ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ಗಣಿಸುವ ಮೂಲಕ ಏಕ ಅಣು ಸ್ಥಳೀಕರಣ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದಲ್ಲಿ (ಎಸ್. ಎಂ. ಎಲ್. ಎಂ.) ಅಂತರ್ಗತವಾಗಿರುವ ಪಿ. ಎಸ್. ಎಫ್. ಅಳವಡಿಕೆಯ ಅಗತ್ಯವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಿದೆ. ಈ ತಂತ್ರವನ್ನು ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಫ್ಲಕ್ಯುಯೇಷನ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್ (ಎಸ್. ಓ. ಎಫ್. ಐ) ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಏಕಕಾಲದಲ್ಲಿ ಸಕ್ರಿಯ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ತುಂಬಾ ಹೆಚ್ಚಾದಾಗ ಎಸ್. ಎಂ. ಎಲ್. ಎಂ. ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ನಿಖರವಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಓಮ್ನಿಪ್ರೆಸೆಂಟ್ ಲೋಕಲೈಸೇಶನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಒಎಲ್ಎಂ) ಓಮ್ನಿಪ್ರೆಸೆಂಟ್ ಲೋಕಲೈಸೇಶನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಒಎಲ್ಎಂ) ಏಕ ಅಣು ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ (ಎಸ್ಎಂಎಲ್ಎಂ) ತಂತ್ರಗಳ ವಿಸ್ತರಣೆಯಾಗಿದ್ದು, ಇದು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಏಕ ಅಣು ಚಿತ್ರಣವನ್ನು ಅಸಂಬದ್ಧ ಬೆಳಕಿನ ಮೂಲದೊಂದಿಗೆ (ಪಾದರಸ-ಕಮಾನಿನ ದೀಪದಂತಹ) ಮತ್ತು ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಎಪಿಫ್ಲೋರೆಸೆನ್ಸ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಸೆಟಪ್ನೊಂದಿಗೆ ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ. ಆಳವಾದ-ನೀಲಿ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಒಂದು ಸಣ್ಣ ಸ್ಫೋಟವು (405 ಎನ್ಎಂ, ಲೇಸರ್ ಬದಲಿಗೆ 350-380 ಎನ್ಎಂನೊಂದಿಗೆ) ಪರೀಕ್ಷಾ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ 90 ಎನ್ಎಂ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ಗಾಗಿ ಅಣುಗಳನ್ನು ದೀರ್ಘಕಾಲದವರೆಗೆ ಪುನಃ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ. ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧವಿರುವ ಎಸ್ಟಿಇಡಿ ಮತ್ತು ಎಸ್ಎಂಎಲ್ಎಂ ಚಿತ್ರಣವನ್ನು ಒಂದೇ ಜೈವಿಕ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಸರಳ ಚಿತ್ರಣ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮಾಡಬಹುದು, ಇದು ಮತ್ತಷ್ಟು ವರ್ಧಿತ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ಗೆ ಆಧಾರವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಸಂಶೋಧನೆಗಳು ಸೂಪರ್ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಪ್ರಜಾಸತ್ತಾತ್ಮಕಗೊಳಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಯಾವುದೇ ವಿಜ್ಞಾನಿಗೆ ಸೀಮಿತ ಬಜೆಟ್ನೊಂದಿಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಏಕ-ಅಣು ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಸೀಕ್ವೆನ್ಷಿಯಲ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್ (ಆರ್ಇಎಸ್ಐ) ಮೂಲಕ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ವರ್ಧನೆಯು ಸೀಕ್ವೆನ್ಷಿಯಲ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್ (ಆರ್ಇಎಸ್ಐ) ಮೂಲಕ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ವರ್ಧನೆಯು ಡಿಎನ್ಎ-ಪ್ಯಾಂಟ್ನ ವಿಸ್ತರಣೆಯಾಗಿದ್ದು ಅದು ಸೈದ್ಧಾಂತಿಕವಾಗಿ ಅನಿಯಮಿತ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಸಾಧಿಸುತ್ತದೆ. ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಗುರಿ ಪ್ರಭೇದವನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಒಂದು ಲೇಬಲ್ ಪ್ರಕಾರವನ್ನು ಬಳಸುವ ಬದಲು, ಅದೇ ಗುರಿಯ ಪ್ರತಿಗಳನ್ನು ಆರ್ಥೋಗೋನಲ್ ಡಿಎನ್ಎ ಅನುಕ್ರಮಗಳೊಂದಿಗೆ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅನುಕ್ರಮವಾಗಿ (ಅಂದರೆ. ಬೇರ್ಪಡಿಸಿದ) ಚಿತ್ರಣ, ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಎಸ್. ಎಂ. ಎಲ್. ಎಂನಲ್ಲಿ ಅತಿಕ್ರಮಿಸುವ ಸ್ಥಳೀಕರಣ ಮೋಡಗಳನ್ನು (1) ಪರಿಹರಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು (2) ಒಂದೇ "ಸೂಪರ್" ಸ್ಥಳೀಕರಣವಾಗಿ ಸಂಯೋಜಿಸಬಹುದು, ಅದರ ನಿಖರತೆಯು ಸ್ಥಳೀಕರಣಗಳ ಆಧಾರವಾಗಿರುವ ಸಂಖ್ಯೆಯೊಂದಿಗೆ ಅಳೆಯುತ್ತದೆ. ಡಿ. ಎನ್. ಎ.-ಪಿ. ಎ. ಐ. ಎನ್. ಟಿ. ಯಲ್ಲಿ ಸಾಧಿಸಬಹುದಾದ ಸ್ಥಳೀಕರಣಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯು ಅಪರಿಮಿತವಾಗಿರುವುದರಿಂದ, ಆರ್. ಇ. ಎಸ್. ಐ. ಯ ಸೈದ್ಧಾಂತಿಕ ನಿರ್ಣಯವೂ ಸಹ ಅಪರಿಮಿತವಾಗಿದೆ. ಆಧಾರವಾಗಿರುವ ಇಮೇಜಿಂಗ್ ಸುತ್ತುಗಳಿಂದ ಆರ್ಇಎಸ್ಐ ಸ್ಥಳೀಕರಣಗಳನ್ನು ಒವರ್ಲೇ ಮಾಡುವುದರಿಂದ ಸಂಯೋಜಿತ, ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಹರಿಸಿದ ಚಿತ್ರವನ್ನು ರಚಿಸುತ್ತದೆ. 3ಡಿ ಲೈಟ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಕಲ್ ನ್ಯಾನೊಸೈಸಿಂಗ್ (ಲಿಮೋನ್) ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಲೈಟ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಕಲ್ ನ್ಯಾನೊಸೈಸಿಂಗ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (3ಡಿ ಲಿಮೋನ್) ಚಿತ್ರಗಳ ಸಂಯೋಜನೆಯು, ವರ್ಟಿಕೋ ಎಸ್ಎಂಐ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, ಎಸ್ಎಂಐ ಮತ್ತು ಎಸ್. ಪಿ. ಡಿ. ಎಂ ಸಂಯೋಜನೆಯಿಂದ ಸಾಧ್ಯವಾಗಿದೆ, ಆ ಮೂಲಕ ಮೊದಲು ಎಸ್ಎಂಐ ಮತ್ತು ನಂತರ ಎಸ್. ಪಿ. ಡಿ. ಎಂ. ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಎಸ್ಎಂಐ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಅಕ್ಷದ ದಿಕ್ಕಿನಲ್ಲಿ ಕಣಗಳ ಕೇಂದ್ರ ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಹರಡುವಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುತ್ತದೆ. ಕಣಗಳು/ಅಣುಗಳ ಕೇಂದ್ರವನ್ನು 1 ರಿಂದ 2 ಎನ್ಎಂ ನಿಖರತೆಯೊಂದಿಗೆ ನಿರ್ಧರಿಸಬಹುದಾದರೂ, ಈ ಬಿಂದುವಿನ ಸುತ್ತಲಿನ ಹರಡುವಿಕೆಯನ್ನು ಸುಮಾರು 30-40 ಎನ್ಎಂನ ಅಕ್ಷೀಯ ವ್ಯಾಸದವರೆಗೆ ನಿರ್ಧರಿಸಬಹುದು. ತರುವಾಯ, ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಕಣ/ಅಣುವಿನ ಪಾರ್ಶ್ವದ ಸ್ಥಾನವನ್ನು ಎಸ್. ಪಿ. ಡಿ. ಎಂ. ಬಳಸಿ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಕೆಲವು ನ್ಯಾನೊಮೀಟರ್ಗಳ ನಿಖರತೆಯನ್ನು ಸಾಧಿಸುತ್ತದೆ. 3ಡಿ ಡ್ಯುಯಲ್ ಬಣ್ಣದ ಕ್ರಮದಲ್ಲಿ ಜೈವಿಕ ಅನ್ವಯವಾಗಿ, ಹರ್2/ನ್ಯೂ ಮತ್ತು ಹರ್3 ಸಮೂಹಗಳ ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳನ್ನು ಸಾಧಿಸಲಾಗಿದೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಮೂಹಗಳ ಎಲ್ಲಾ ಮೂರು ದಿಕ್ಕುಗಳಲ್ಲಿನ ಸ್ಥಾನಗಳನ್ನು ಸುಮಾರು 25 ಎನ್ಎಂ ನಿಖರತೆಯೊಂದಿಗೆ ನಿರ್ಧರಿಸಬಹುದು. ಇಂಟಿಗ್ರೇಟೆಡ್ ಕೋರಿಲೇಟಿವ್ ಲೈಟ್ ಮತ್ತು ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ನೊಂದಿಗೆ ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ ಅನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸುವುದರಿಂದ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಮಾರ್ಕರ್ಗಳು ಒದಗಿಸುವ ಲೇಬಲಿಂಗ್ನೊಂದಿಗೆ ಸಂದರ್ಭೋಚಿತ ಮಾಹಿತಿಯ ದೃಶ್ಯೀಕರಣವನ್ನು ಶಕ್ತಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಇದು ಬೆಳಕಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು ಮಾತ್ರ ಬಳಸುವಾಗ ಸಂಶೋಧಕರಿಗೆ ಉಳಿದಿರುವ ಕಪ್ಪು ಹಿನ್ನೆಲೆಯ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ನಿವಾರಿಸುತ್ತದೆ. ಸಮಗ್ರ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ, ಮಾದರಿಯನ್ನು ಎರಡೂ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕಗಳಿಂದ ಏಕಕಾಲದಲ್ಲಿ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ನರ ಜಾಲಗಳನ್ನು ಬಳಸುವ ತಂತ್ರಗಳನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವುದು ಇತ್ತೀಚೆಗೆ, ಕೃತಕ ಬುದ್ಧಿಮತ್ತೆಯ ಗಣನೆಯಲ್ಲಿನ ಪ್ರಗತಿಗಳಿಂದಾಗಿ, ಆಳವಾದ-ಕಲಿಕೆಯ ನರ ಜಾಲಗಳನ್ನು (ಜಿಎಎನ್) ಆಪ್ಟಿಕಲ್-ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ ಛಾಯಾಗ್ರಹಣದ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, 40x ನಿಂದ 100x ಗೆ, ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ನೊಂದಿಗೆ 20x ನಿಂದ 1500x ಗೆ, ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ಗೆ ಹೋಲಿಸಬಹುದು, ನರ ಮಸೂರದ ಮೂಲಕ, ಮತ್ತು ಪಾಸಿಟ್ರಾನ್-ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆ ಟೊಮೊಗ್ರಫಿ ಮತ್ತು ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯೊಂದಿಗೆ. ಮಲ್ಟಿಫೋಕಲ್ ಪ್ಲೇನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಎಂಯುಎಂ) ಸ್ಟಿಮ್ಯುಲೇಟೆಡ್ ಎಮಿಷನ್ ಡಿಪ್ಲೀಷನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ (ಎಸ್ಟಿಇಡಿ) ಫೋಟೋಆಕ್ಟಿವೇಟೆಡ್ ಲೋಕಲೈಸೇಶನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಪಿಎಎಲ್ಎಂ) ಡೀಕನ್ವಲ್ಯೂಷನ್ ಫೋಟೋಆಕ್ಟಿವೇಬಲ್ ಪ್ರೋಬ್ಸ್ ಕೋರಿಲೇಟಿವ್ ಲೈಟ್-ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್ ವಿಡಿಯೋ ಸೂಪರ್ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಉಲ್ಲೇಖಗಳು ಮತ್ತಷ್ಟು ಓದುವಿಕೆ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಜರ್ಮನ್ ಆವಿಷ್ಕಾರಗಳು ಸೆಲ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್ ಲ್ಯಾಬೊರೇಟರಿ ಉಪಕರಣಗಳು ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ತಂತ್ರಗಳು