Interference reflection microscopy
ಇಂಟರ್ಫರೆನ್ಸ್ ರಿಫ್ಲೆಕ್ಷನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಐಆರ್ಎಂ), ಇದನ್ನು ರಿಫ್ಲೆಕ್ಷನ್ ಇಂಟರ್ಫರೆನ್ಸ್ ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಆರ್ಐಸಿಎಂ) ಅಥವಾ ರಿಫ್ಲೆಕ್ಷನ್ ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಆರ್ಸಿಎಂ) ಎಂದೂ ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ತಂತ್ರವಾಗಿದ್ದು, ಇದು ಗಾಜಿನ ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ವಸ್ತುವಿನ ಚಿತ್ರವನ್ನು ರೂಪಿಸಲು ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪದ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ. ಸಂಕೇತದ ತೀವ್ರತೆಯು ಗಾಜಿನ ಮೇಲ್ಮೈಗೆ ವಸ್ತುವಿನ ಸಾಮೀಪ್ಯದ ಅಳತೆಯಾಗಿದೆ. ಟಿಐಆರ್ಎಫ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದಂತೆಯೇ (ಪ್ರತಿದೀಪಕ) ಲೇಬಲ್ ಅನ್ನು ಬಳಸದೆ ಜೀವಕೋಶದ ಪೊರೆಯಲ್ಲಿನ ಘಟನೆಗಳನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಈ ತಂತ್ರವನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು. ಇತಿಹಾಸ ಮತ್ತು ಹೆಸರು 1964 ರಲ್ಲಿ, ಆಡಮ್ ಎಸ್. ಜಿ. ಕರ್ಟಿಸ್ ಅವರು ಇಂಟರ್ಫರೆನ್ಸ್ ರಿಫ್ಲೆಕ್ಷನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಐಆರ್ಎಂ) ಎಂಬ ಪದವನ್ನು ಸೃಷ್ಟಿಸಿದರು, ಇದನ್ನು ಭ್ರೂಣದ ಕೋಳಿ ಹೃದಯ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್ಗಳನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಜೀವಕೋಶ ಜೀವಶಾಸ್ತ್ರದ ಕ್ಷೇತ್ರದಲ್ಲಿ ಬಳಸಿದರು. ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವ ತಾಣಗಳು ಮತ್ತು ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್ಗಳ ದೂರವನ್ನು ನೋಡಲು ಅವರು ಐಆರ್ಎಂ ಅನ್ನು ಬಳಸಿದರು, ಗಾಜಿನೊಂದಿಗಿನ ಸಂಪರ್ಕವು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಜೀವಕೋಶದ ಪರಿಧಿ ಮತ್ತು ಸೂಡೊಪೊಡಿಯಾಗೆ ಸೀಮಿತವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಗಮನಿಸಿದರು. 1975ರಲ್ಲಿ, ಜೋಹಾನ್ ಸೆಬಾಸ್ಟಿಯನ್ ಪ್ಲೊಯೆಮ್ ಅವರು ಐ. ಆರ್. ಎಂ. ಗೆ (ಪುಸ್ತಕದ ಅಧ್ಯಾಯದಲ್ಲಿ ಪ್ರಕಟವಾದ) ಒಂದು ಸುಧಾರಣೆಯನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸಿದರು, ಅದನ್ನು ಅವರು ರಿಫ್ಲೆಕ್ಷನ್ ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಆರ್. ಸಿ. ಎಂ.) ಎಂದು ಕರೆದರು. ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ ದಾರಿತಪ್ಪಿ ಬೆಳಕನ್ನು ಮತ್ತಷ್ಟು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಆಂಟಿ-ಫ್ಲೆಕ್ಸ್ ಆಬ್ಜೆಕ್ಟಿವ್ ಮತ್ತು ಕ್ರಾಸ್ಡ್ ಪೋಲರೈಸರ್ಗಳನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಸುಧಾರಣೆಯಾಗಿದೆ. ಇಂದು, ಈ ಯೋಜನೆಯನ್ನು ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ರಿಫ್ಲೆಕ್ಷನ್ ಇಂಟರ್ಫರೆನ್ಸ್ ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಆರ್ಐಸಿಎಂ) ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದರ ಹೆಸರನ್ನು 1979 ರಲ್ಲಿ ಬರೇಟರ್-ಹಾನ್ ಮತ್ತು ಕೊನ್ರಾಡ್ ಬೆಕ್ ಪರಿಚಯಿಸಿದರು. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಐಆರ್ಎಂ ಎಂಬ ಪದವು ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ ಆರ್ಐಸಿಎಂ ಸೆಟಪ್ ಅನ್ನು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ತಂತ್ರವನ್ನು ವಿವರಿಸಲು ಬಳಸುವ ಹೆಸರುಗಳ ಬಹುಸಂಖ್ಯೆಯು ಸ್ವಲ್ಪ ಗೊಂದಲವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಿದೆ ಮತ್ತು ಇದನ್ನು 1985ರಷ್ಟು ಹಿಂದೆಯೇ ವರ್ಸ್ಚುರೆನ್ ಅವರು ಚರ್ಚಿಸಿದ್ದರು. ಬರೇಟರ್-ಹಾನ್ ಮತ್ತು ಕೊನ್ರಾಡ್ ಬೆಕ್ ಈ ತಂತ್ರವನ್ನು ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದೊಂದಿಗೆ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧಿಸಿ, ವಿವಿಧ ಸಸ್ತನಿ ಜೀವಕೋಶದ ರೇಖೆಗಳು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಕೇಂದ್ರ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯ ಸ್ಥಳಗಳಲ್ಲಿ ಗಾಜಿನ ತಲಾಧಾರಕ್ಕೆ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ. ಸಿದ್ಧಾಂತವು ಲಗತ್ತಿಸಲಾದ ಜೀವಕೋಶದ ಚಿತ್ರವನ್ನು ರೂಪಿಸಲು, ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ತರಂಗಾಂತರದ ಬೆಳಕನ್ನು ಧ್ರುವೀಕರಣದ ಮೂಲಕ ಹಾದುಹೋಗುತ್ತದೆ. ಈ ರೇಖೀಯ ಧ್ರುವೀಕೃತ ಬೆಳಕು ವಸ್ತುವಿನ ಕಡೆಗೆ ಬೀಮ್ ಸ್ಪ್ಲಿಟರ್ನಿಂದ ಪ್ರತಿಫಲಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಮಾದರಿಯ ಮೇಲೆ ಬೆಳಕನ್ನು ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸುತ್ತದೆ. ಗಾಜಿನ ಮೇಲ್ಮೈಯು ಒಂದು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಮಟ್ಟಕ್ಕೆ ಪ್ರತಿಫಲಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಧ್ರುವೀಕೃತ ಬೆಳಕನ್ನು ಪ್ರತಿಬಿಂಬಿಸುತ್ತದೆ. ಗಾಜಿನಿಂದ ಪ್ರತಿಫಲಿಸದ ಬೆಳಕು ಜೀವಕೋಶದೊಳಗೆ ಚಲಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ಪೊರೆಯಿಂದ ಪ್ರತಿಫಲಿಸುತ್ತದೆ. ಮೂರು ಸನ್ನಿವೇಶಗಳು ಸಂಭವಿಸಬಹುದು. ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, ಮೆಂಬರೇನ್ ಗಾಜಿನ ಹತ್ತಿರದಲ್ಲಿದ್ದಾಗ, ಗಾಜಿನಿಂದ ಪ್ರತಿಫಲಿತವಾದ ಬೆಳಕನ್ನು ತರಂಗಾಂತರದ ಅರ್ಧದಷ್ಟು ಸ್ಥಳಾಂತರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಮೆಂಬರೇನ್ನಿಂದ ಪ್ರತಿಫಲಿತವಾದ ಬೆಳಕು ಗಾಜಿನ ಹಂತಗಳಿಂದ ಪ್ರತಿಫಲಿತವಾದ ಬೆಳಕಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಒಂದು ಹಂತದ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆದ್ದರಿಂದ ಪರಸ್ಪರ ರದ್ದುಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ (ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪ). ಈ ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪವು ಅಂತಿಮ ಚಿತ್ರದಲ್ಲಿ ಡಾರ್ಕ್ ಪಿಕ್ಸೆಲ್ಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರದಲ್ಲಿ ಎಡಭಾಗದಲ್ಲಿರುವ ಕೇಸ್). ಎರಡನೆಯದಾಗಿ, ಮೆಂಬರೇನ್ ಅನ್ನು ಗಾಜಿನೊಂದಿಗೆ ಜೋಡಿಸದಿದ್ದಾಗ, ಮೆಂಬರೇನ್ನಿಂದ ಬರುವ ಪ್ರತಿಫಲನವು ಗಾಜಿನಿಂದ ಬರುವ ಪ್ರತಿಫಲಿತ ಬೆಳಕಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಸಣ್ಣ ಹಂತದ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆದ್ದರಿಂದ ಅವು ಪರಸ್ಪರ ರದ್ದುಗೊಳ್ಳುವುದಿಲ್ಲ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಚಿತ್ರದಲ್ಲಿ ಪ್ರಕಾಶಮಾನವಾದ ಪಿಕ್ಸೆಲ್ (ಚಿತ್ರದಲ್ಲಿ ಸರಿಯಾದ ಪ್ರಕರಣ) ಇರುತ್ತದೆ. ಮೂರನೆಯದಾಗಿ, ಯಾವುದೇ ಮಾದರಿ ಇಲ್ಲದಿದ್ದಾಗ, ಗಾಜಿನಿಂದ ಪ್ರತಿಫಲಿತವಾದ ಬೆಳಕನ್ನು ಮಾತ್ರ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅಂತಿಮ ಚಿತ್ರದಲ್ಲಿ ಪ್ರಕಾಶಮಾನವಾದ ಪಿಕ್ಸೆಲ್ಗಳಾಗಿ ಕಾಣಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಪ್ರತಿಫಲಿತ ಬೆಳಕು ಕಿರಣದ ಸ್ಪ್ಲಿಟರ್ಗೆ ಹಿಂತಿರುಗಿ ಹಾದುಹೋಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಎರಡನೇ ಧ್ರುವೀಕರಣದ ಮೂಲಕ ಹಾದುಹೋಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಚದುರಿದ ಬೆಳಕನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುತ್ತದೆ, ಡಿಟೆಕ್ಟರ್ ಅನ್ನು ತಲುಪುವ ಮೊದಲು (ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಸಿಸಿಡಿ ಕ್ಯಾಮೆರಾ) ಅಂತಿಮ ಚಿತ್ರವನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ. ಚದುರಿದ ಬೆಳಕನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಪೋಲರೈಸರ್ಗಳು ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಬಹುದು; ಆದಾಗ್ಯೂ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಡಿಜಿಟಲ್ ಕ್ಯಾಮೆರಾದೊಂದಿಗೆ ಆಧುನಿಕ ಸೆಟಪ್ನಲ್ಲಿ, ಅವುಗಳ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ. ಸಿದ್ಧಾಂತ ಪ್ರತಿಫಲನವು ವಕ್ರೀಭವನ ಸೂಚ್ಯಂಕದಲ್ಲಿನ ಬದಲಾವಣೆಯಿಂದ ಉಂಟಾಗುತ್ತದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಪ್ರತಿ ಗಡಿಯಲ್ಲೂ ಬೆಳಕಿನ ಒಂದು ಭಾಗವು ಪ್ರತಿಫಲಿಸುತ್ತದೆ. ಪ್ರತಿಫಲನದ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನ ನಿಯಮದ ಪ್ರಕಾರ ಪ್ರತಿಫಲನ ಗುಣಾಂಕದಿಂದ ನೀಡಲಾಗುತ್ತದೆಃ ಪ್ರತಿಫಲನವು ಪ್ರತಿಫಲಿತ ಬೆಳಕಿನ ತೀವ್ರತೆ () ಮತ್ತು ಒಳಬರುವ ಬೆಳಕಿನ ತೀವ್ರತೆಯ () ಅನುಪಾತವಾಗಿದೆಃ ಗಾಜು (1.50-1.54, ಪಟ್ಟಿಯನ್ನು ನೋಡಿ), ನೀರು (1.31, ಪಟ್ಟಿಯನ್ನು ನೋಡಿ), ಜೀವಕೋಶದ ಪೊರೆಯ (1.48) ಮತ್ತು ಸೈಟೋಸಾಲ್ (1.35) ಗೆ ವಿಶಿಷ್ಟ ವಕ್ರೀಕಾರಕ ಸೂಚ್ಯಂಕಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ, ಪ್ರತಿ ಇಂಟರ್ಫೇಸ್ನಿಂದ ಪ್ರತಿಫಲಿಸುವ ಬೆಳಕಿನ ಭಾಗವನ್ನು ಲೆಕ್ಕ ಹಾಕಬಹುದು. ವಕ್ರೀಕಾರಕ ಸೂಚ್ಯಂಕಗಳ ನಡುವಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸವು ಹೆಚ್ಚಾದಂತೆ ಪ್ರತಿಬಿಂಬದ ಪ್ರಮಾಣವು ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಗಾಜಿನ ಮೇಲ್ಮೈ ಮತ್ತು ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮದ ನಡುವಿನ ಅಂತರಸಂಪರ್ಕದಿಂದ ದೊಡ್ಡ ಪ್ರತಿಫಲನವಾಗುತ್ತದೆ (ಸುಮಾರು ನೀರಿಗೆ ಸಮಾನಃ 1.31-1.33). ಇದರರ್ಥ ಜೀವಕೋಶವಿಲ್ಲದೆ ಚಿತ್ರವು ಪ್ರಕಾಶಮಾನವಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಜೀವಕೋಶವನ್ನು ಜೋಡಿಸಿದಾಗ, ಮಧ್ಯಮ ಮತ್ತು ಪೊರೆಯ ನಡುವಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸವು ದೊಡ್ಡ ಪ್ರತಿಫಲನವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ, ಅದು ಹಂತದಲ್ಲಿ ಸ್ವಲ್ಪ ಬದಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಗಾಜಿನಿಂದ ಪ್ರತಿಫಲಿಸುವ ಬೆಳಕಿನಲ್ಲಿ ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ. ಚದುರುವಿಕೆಯಿಂದಾಗಿ ಮಧ್ಯಮ-ಮೆಂಬರೇನ್ ಇಂಟರ್ಫೇಸ್ನಿಂದ ಪ್ರತಿಫಲಿಸುವ ಬೆಳಕಿನ ವೈಶಾಲ್ಯವು ಕಡಿಮೆಯಾಗುವುದರಿಂದ, ಲಗತ್ತಿಸಲಾದ ಪ್ರದೇಶವು ಗಾಢವಾಗಿ ಕಾಣಿಸುತ್ತದೆ ಆದರೆ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಕಪ್ಪು ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿರುವುದಿಲ್ಲ. ಮಾದರಿಯ ಮೇಲೆ ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸಿದ ಬೆಳಕಿನ ಕೋನ್ ಆಪಾದಿತ ಬೆಳಕಿನ ವಿವಿಧ ಕೋನಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುವುದರಿಂದ, ವ್ಯಾಪಕ ಶ್ರೇಣಿಯ ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪದ ಮಾದರಿಗಳಿವೆ. ಮಾದರಿಗಳು 1 ತರಂಗಾಂತರಕ್ಕಿಂತ ಕಡಿಮೆ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗೊಂಡಾಗ (ಶೂನ್ಯ-ಕ್ರಮಾಂಕದ ಅಂಚು), ಮಾದರಿಗಳು ಒಮ್ಮುಖವಾಗುತ್ತವೆ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ತೀವ್ರತೆ ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ. 1ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಖ್ಯಾತ್ಮಕ ದ್ಯುತಿರಂಧ್ರವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಉದ್ದೇಶವನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೂಲಕ ಇದನ್ನು ಪಡೆಯಬಹುದು. ಅಗತ್ಯತೆಗಳು ಐ. ಆರ್. ಎಂ. ಅನ್ನು ಬಳಸುವ ಚಿತ್ರ ಕೋಶಗಳಿಗೆ, ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕಕ್ಕೆ ಕನಿಷ್ಠ ಈ ಕೆಳಗಿನ ಅಂಶಗಳ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆಃ 1) ಹ್ಯಾಲೊಜೆನ್ ದೀಪದಂತಹ ಬೆಳಕಿನ ಮೂಲ, 2) ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಫಿಲ್ಟರ್ (ಇದು ತರಂಗಾಂತರಗಳ ಸಣ್ಣ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯನ್ನು ಹಾದುಹೋಗುತ್ತದೆ), ಮತ್ತು 3) ಬೀಮ್ ಸ್ಪ್ಲಿಟರ್ (ಇದು 50 ಪ್ರತಿಶತವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಿಂಬಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆಯ್ದ ತರಂಗಾಂತರದ 50 ಪ್ರತಿಶತವನ್ನು ರವಾನಿಸುತ್ತದೆ). ಬೆಳಕಿನ ಮೂಲವು ಹೆಚ್ಚಿನ ತೀವ್ರತೆಯ ಬೆಳಕನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಕಿರಣದ ಸ್ಪ್ಲಿಟರ್ ಮತ್ತು ಮಾದರಿಯು ಸಾಕಷ್ಟು ಬೆಳಕನ್ನು ಕಳೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ವಿಭಿನ್ನ ತರಂಗಾಂತರಗಳು ವಿಭಿನ್ನ ಐಆರ್ಎಂ ಚಿತ್ರಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತವೆ; ಬೆರೆಟರ್-ಹಾನ್ ಮತ್ತು ಸಹೋದ್ಯೋಗಿಗಳು ತಮ್ಮ ಪಿಟಿಕೆ 2 ಕೋಶಗಳಿಗೆ, 546 ಎನ್ಎಂ ತರಂಗಾಂತರ ಹೊಂದಿರುವ ಬೆಳಕು 436 ಎನ್ಎಂ ತರಂಗಾಂತರ ಹೊಂದಿರುವ ನೀಲಿ ಬೆಳಕುಗಿಂತ ಉತ್ತಮ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತತೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದರು. ಐಆರ್ಎಂನ ಮೂಲ ಸಿದ್ಧಾಂತಕ್ಕೆ ಅನೇಕ ಪರಿಷ್ಕರಣೆಗಳಿವೆ, ಅವುಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನವು ಚಿತ್ರದ ರಚನೆಯ ದಕ್ಷತೆ ಮತ್ತು ಇಳುವರಿಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತವೆ. ಬೀಮ್ ಸ್ಪ್ಲಿಟರ್ ಮತ್ತು ಮಾದರಿಯ ನಡುವೆ ಧ್ರುವಕಗಳನ್ನು ಮತ್ತು ಕಾಲು ತರಂಗ ಫಲಕವನ್ನು ಇರಿಸುವ ಮೂಲಕ, ರೇಖೀಯ ಧ್ರುವೀಕೃತ ಬೆಳಕನ್ನು ವೃತ್ತಾಕಾರದ ಧ್ರುವೀಕೃತ ಬೆಳಕಾಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ನಂತರ ಅದನ್ನು ರೇಖೀಯ ಧ್ರುವೀಕೃತ ಬೆಳಕಾಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸಬಹುದು, ಇದು ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ. ವೃತ್ತಾಕಾರದ ಧ್ರುವೀಕರಣ ಲೇಖನವು ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ವಿವರವಾಗಿ ಚರ್ಚಿಸುತ್ತದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ಮೊದಲ ಪೋಲರೈಸರ್ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ 90° ತಿರುಗುವ ಎರಡನೇ ಪೋಲರೈಸರ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ, ದಾರಿತಪ್ಪಿ ಬೆಳಕನ್ನು ಡಿಟೆಕ್ಟರ್ ಅನ್ನು ತಲುಪುವುದನ್ನು ತಡೆಯಬಹುದು, ಇದು ಸಿಗ್ನಲ್-ಶಬ್ದ ಅನುಪಾತವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ (ವರ್ಸ್ಚುರೆನ್ನ ಚಿತ್ರ 2 ಅನ್ನು ನೋಡಿ). ಜೈವಿಕ ಅನ್ವಯಗಳು ಜೈವಿಕ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಐಆರ್ಎಂ ಅನ್ನು ಹಲವಾರು ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಬಹುದು. ಜೀವಕೋಶದ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ವಲಸೆಯ ಮೇಲೆ ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸಿದ ತಂತ್ರದ ಬಳಕೆಗಳ ಆರಂಭಿಕ ಉದಾಹರಣೆಗಳು. ವೆಸಿಕಲ್ ಫ್ಯೂಷನ್ ಇತ್ತೀಚೆಗೆ, ಕ್ರೋಮಾಫಿನ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಎಕ್ಸೋಸೈಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಈ ತಂತ್ರವನ್ನು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ. ಡಿಐಸಿ ಬಳಸಿ ಚಿತ್ರಿಸಿದಾಗ, ಕ್ರೋಮಾಫಿನ್ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಸಣ್ಣ ಮುಂಚಾಚಿರುವಿಕೆಗಳೊಂದಿಗೆ ದುಂಡಗಿನ ಜೀವಕೋಶಗಳಾಗಿ ಕಾಣಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ. ಅದೇ ಜೀವಕೋಶವನ್ನು ಐಆರ್ಎಂ ಬಳಸಿ ಚಿತ್ರಿಸಿದಾಗ, ಗಾಜಿನ ಮೇಲಿನ ಜೀವಕೋಶದ ಹೆಜ್ಜೆಗುರುತನ್ನು ಸಣ್ಣ ಮುಂಚಾಚಿರುವ ಕಪ್ಪು ಪ್ರದೇಶವಾಗಿ ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿ ಕಾಣಬಹುದು. ಕೋಶಕಗಳು ಪೊರೆಯೊಂದಿಗೆ ಬೆಸೆಯುವಾಗ, ಅವು ಡಾರ್ಕ್ ಹೆಜ್ಜೆಗುರುತುಗಳೊಳಗೆ ಸಣ್ಣ ಬೆಳಕಿನ ವಲಯಗಳಾಗಿ ಕಾಣಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ (ಬಲ ಫಲಕದ ಮೇಲಿನ ಕೋಶದಲ್ಲಿ ಪ್ರಕಾಶಮಾನವಾದ ಕಲೆಗಳು). ಐಆರ್ಎಂ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಕ್ರೋಮಾಫಿನ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಕೋಶಕಗಳ ಸಮ್ಮಿಳನದ ಒಂದು ಉದಾಹರಣೆಯನ್ನು ಚಲನಚಿತ್ರ 1ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. 60 ಎಂಎಂ ಪೊಟ್ಯಾಸಿಯಮ್ನೊಂದಿಗೆ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ನಂತರ, ದಟ್ಟವಾದ ಕೋರ್ ಕಣಗಳ ಎಕ್ಸೋಸೈಟೋಸಿಸ್ನ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಕ್ರೋಮಾಫಿನ್ ಕೋಶದ ಡಾರ್ಕ್ ಹೆಜ್ಜೆಗುರುತುಗಳ ಒಳಗೆ ಅನೇಕ ಪ್ರಕಾಶಮಾನವಾದ ಕಲೆಗಳು ಕಾಣಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಪ್ರಾರಂಭಿಸುತ್ತವೆ. ಐಆರ್ಎಮ್ಗೆ ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಲೇಬಲ್ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲವಾದ್ದರಿಂದ, ವೆಸಿಕಲ್ ಎಕ್ಸೋಸೈಟೋಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಎಂಡೋಸೈಟೋಸಿಸ್ನೊಂದಿಗೆ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಎಪಿಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಮತ್ತು ಟಿಐಆರ್ಎಫ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯಂತಹ ಇತರ ಇಮೇಜಿಂಗ್ ತಂತ್ರಗಳೊಂದಿಗೆ ಇದನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸಬಹುದು. ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಲೇಬಲ್ಗಳ ಕೊರತೆಯ ಮತ್ತೊಂದು ಪ್ರಯೋಜನವೆಂದರೆ ಕಡಿಮೆ ದ್ಯುತಿ ವಿಷತ್ವ. ಹೆಚ್ಚಿನ ಓದುವ ಉಲ್ಲೇಖಗಳು ಕ್ವಾಂಟಿಟೇಟಿವ್ ರಿಫ್ಲೆಕ್ಷನ್ ಇಂಟರ್ಫರೆನ್ಸ್ ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಆರ್ಐಸಿಎಂ) ಇನ್ ಸಾಫ್ಟ್ ಮ್ಯಾಟರ್ ಅಂಡ್ ಸೆಲ್ ಅಡೆಷನ್, ಲಾರೆಂಟ್ ಲಿಮೋಜಿನ್ ಮತ್ತು ಖೇಯಾ ಸೇನ್ಗುಪ್ತಾ, ಚೆಮ್ಫಿಸೆಮ್ 2009,10,2752-2768. ಬಾಹ್ಯ ಕೊಂಡಿಗಳು ಆಲ್ಬರ್ಟ್ ಐನ್ಸ್ಟೀನ್ ಕಾಲೇಜ್ ಆಫ್ ಮೆಡಿಸಿನ್ ಆನ್ ಐಆರ್ಎಂ ರಿಫ್ಲೆಕ್ಟೆಡ್ ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಆನ್ ನಿಕಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯು ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ತಂತ್ರಗಳು ವೀಡಿಯೊ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಲೇಖನಗಳು