L-Photo-methionine
ಎಲ್-ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಎಂಬುದು ಎಲ್-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ನ ದ್ಯುತಿ-ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲ ವ್ಯುತ್ಪನ್ನವಾಗಿದ್ದು, ಇದು 2005ರಲ್ಲಿ ಸಂಶ್ಲೇಷಿತವಾಗಿ ರೂಪುಗೊಂಡಿತು. ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು ಅಮೈನೊ ಆಮ್ಲಗಳ ಉದ್ದವಾದ ಪಾಲಿಮರ್ ಸರಪಳಿಗಳಾಗಿವೆ; ಇದು ವಿವಿಧ ರಚನೆಗಳು ಮತ್ತು ಗಾತ್ರಗಳಲ್ಲಿ ಬದಲಾಗಬಹುದು. ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು ಪರಸ್ಪರ ಸಂವಹನ ನಡೆಸಬಹುದು (ಪ್ರೋಟೀನ್-ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು ಅಥವಾ ಪಿಪಿಐ) ಮತ್ತು ಈ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳೊಂದಿಗೆ, ಜೀವಕೋಶದ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು ಮತ್ತು ಮಾರ್ಗಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ. ಅಂತಹ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು; ವೈರಲ್ ಸಮ್ಮಿಳನದಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ಬೆಳವಣಿಗೆಯ-ಅಂಶ ಸಂಕೇತದಲ್ಲಿ ಆಂಟಿವೈರಲ್ ಅಥವಾ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್-ವಿರೋಧಿ ಔಷಧಿಗಳಿಗೆ ಭರವಸೆ ತೋರುತ್ತದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಸಂಶೋಧನೆ ಮಾಡಬೇಕು. ಇದರೊಂದಿಗೆ, ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಘಟಕಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು ಸುಪ್ರಾಮೋಲಿಕ್ಯುಲರ್ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ಸಂಶೋಧನೆ ಸಾಬೀತುಪಡಿಸಲು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಿದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳಾದ ಮೋನಿಕಾ ಸುಚಾನೆಕ್, ಅನ್ನಾ ರಾಡ್ಜಿಕೋವ್ಸ್ಕಿ ಮತ್ತು ಕ್ರಿಸ್ಟೋಫ್ ಥೀಲೆ ಅವರು ನೈಸರ್ಗಿಕ ಪರಿಸರದಲ್ಲಿ ಈ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡುವ ನೇರ ಮಾರ್ಗವೆಂದರೆ ಫೋಟೋ-ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕಿಂಗ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳ ಹೊಸ ಮಾರ್ಗವನ್ನು ರಚಿಸುವುದು ಎಂದು ಸಂಶೋಧಿಸಿದರು; ಇದು ಎಲ್-ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು ಮತ್ತು ಅದೇ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಎಲ್-ಫೋಟೋ-ಲ್ಯೂಸಿನ್. ರೇಸ್ಮಿಕ್ ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಅನ್ನು 4,4 '-ಅಜಿ-ಪೆಂಟನಲ್ನಿಂದ ಸ್ಟ್ರೆಕರ್ ಅಮೈನೊ ಆಸಿಡ್ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಎಲ್ ಎನಾಂಟಿಯೊಮರ್ಅನ್ನು ಅಸಿಟಮೈಡ್ನ ಕಿಣ್ವಕ ನಿರ್ಣಯದಿಂದ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ಹಿಂದೆ ಹೇಳಿದಂತೆ, ಎಲ್-ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಅನ್ನು ಅವುಗಳ ಸ್ಥಳೀಯ ಪರಿಸರದಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಪ್ರೋಟೀನ್-ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಬಳಸಬಹುದು. ಯುವಿ ಬೆಳಕಿಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಂಡಾಗ ಅಮೈನೊ ಆಮ್ಲವು ಹೇಗೆ ವರ್ತಿಸುತ್ತದೆ ಎಂಬುದು ಇದು ಹೇಗೆ ಸಾಧ್ಯ. ಮೊದಲು ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸಾಬೀತುಪಡಿಸಲು, ಸರಿಯಾದ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಕ್ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲು ವಿಕಿರಣಶೀಲ ಇಂಗಾಲವನ್ನು (14 ಸಿ) ಅದರ ಸ್ವಂತ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ನ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯು ಹಿಂದಿನ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಕೆಲಸ ಮಾಡಿದ ಕಾರಣ, ಡಯಾಜಿರಿನ್ ಉಂಗುರದ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿ ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಫೋಟೋ-ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕವಾಗಿದೆ. ಈ ಉಂಗುರವು ಯುವಿ ಬೆಳಕಿಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಂಡ ನಂತರ, ಸಾರಜನಕವು ಸಾರಜನಕ ಅನಿಲವಾಗಿ (ಎನ್ 2) ಹೊರಟು ಹೆಚ್ಚು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಮಧ್ಯಂತರ ಕಾರ್ಬೀನ್ ಅನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ. ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳ ಫೋಟೋ-ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯು ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳಲ್ಲಿ ಫೋಟೋ-ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕಿಂಗ್ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ರೀತಿಯ ಅಡ್ಡ-ಜೋಡಣೆಯು ಮೂರು ಪ್ರಮುಖ ಪ್ರಯೋಜನಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ; ಅಲ್ಪಾವಧಿಯ ಮಧ್ಯವರ್ತಿಗಳ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿ ಈ ಅಡ್ಡ-ಜೋಡಣೆಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಇದೆ ಮತ್ತು ಈ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲವು ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ವಿಷಕಾರಿಯಲ್ಲ (ಅಂದರೆ ಇದು ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಕಾರ್ಯ ಅಥವಾ ರಚನೆಯನ್ನು ನಾಟಕೀಯವಾಗಿ ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸಬಾರದು). ಈ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯು ದರ-ಸೀಮಿತಗೊಳಿಸುವ ಹಂತವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸಂಶೋಧನೆಯು ಕಂಡುಹಿಡಿದಿದೆ; ಅಡ್ಡ-ಸಂಪರ್ಕವಲ್ಲ. ಹೊಸ ದಕ್ಷ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ ಮತ್ತು ಬಳಕೆ ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳಾದ ಮಿಕ್ವೆಲ್ ವಿಲಾ-ಪೆರೆಲ್ಲೊ, ಮ್ಯಾಥ್ಯೂ ಆರ್. ಪ್ರ್ಯಾಟ್, ಫ್ರೆಜ್ ತುಲಿನ್ ಮತ್ತು ಟಾಮ್ ಡಬ್ಲ್ಯೂ. ಮುಯಿರ್ ಅವರು ಮೂಲವು ಕಿಣ್ವದ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದರಿಂದ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಇಳುವರಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದರಿಂದ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ರಚಿಸಲು ಬಯಸಿದ್ದರು. ಆದ್ದರಿಂದ, ಅವರು ಕಾರ್ಬಾಕ್ಸಿಲಿಕ್ ಆಮ್ಲ (ಟೆರ್ಟ್-ಬ್ಯುಟೈಲ್) ಮತ್ತು ಅಮೈನ್ ಮೇಲಿನ ಬೊಕ್ ಎರಡರಲ್ಲೂ ರಕ್ಷಿಸುವ ಗುಂಪುಗಳೊಂದಿಗೆ ಎಲ್-ಗ್ಲುಟಾಮಿಕ್ ಆಮ್ಲದೊಂದಿಗೆ ಪ್ರಾರಂಭಿಸಿದರು. ಈ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಕ್ಲಾಸಿಕ್ನಂತೆ ವಿವರಗಳಿಗೆ ಒಳಗಾಗುವುದಿಲ್ಲ, ಆದರೆ ಸಂಪೂರ್ಣ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಕೆಳಗೆ ನೀಡಲಾಗಿದೆ. ನಿಜವಾದ ಹಂತಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು, ಉಲ್ಲೇಖವನ್ನು ನೋಡಿ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಒಮ್ಮೆ ಅವರು ಎಲ್-ಫೋಟೊ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಅನ್ನು ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಿದ ನಂತರ, ಇಳುವರಿಯು ಶೇಕಡಾ 32 ರಷ್ಟಿತ್ತು, ಇದು ಮೂಲ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಗಿಂತ (ಆರು ಪಟ್ಟು) ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ. ಇದನ್ನು ನಂತರ ಬಳಸಲಾಯಿತು (ಅಮೈನ್ ಮೇಲೆ ಎಫ್ಎಂಒಸಿ ಎಂಬ ರಕ್ಷಣಾ ಗುಂಪಿನೊಂದಿಗೆ), ಆ ಉತ್ಪನ್ನವು ಅಮೈನೋ-ಆಸಿಡ್ ಕ್ರಾಸ್ ಲಿಂಕರ್ ಮತ್ತು ಪೋಸ್ಟ್-ಟ್ರಾನ್ಸಲೇಶನಲ್ ಮಾರ್ಪಾಡು (ಪಿಟಿಎಂ) ಅನ್ನು ಅದೇ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸೈಟ್ಗೆ ಪರಿಚಯಿಸಬಹುದೆ ಎಂದು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಹೆಚ್ಚು ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ ಹಂತಗಳಿಗೆ ಒಳಗಾಯಿತು, ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಪಿಟಿಎಂ ಮೇಲೆ ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿರುವ ಅಮೈನೋ-ಆಸಿಡ್ನ ಕೋವೆಲೆಂಟ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಸೆರೆಹಿಡಿಯಲು. ಪಿಟಿಎಂಗಳು ಪ್ರೋಟೀನ್-ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತವೆ, ಅವು ಅಸ್ಥಿರ ಮತ್ತು ಸಬ್ಸ್ಟಾಯ್ಕಿಯೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ; ಇವುಗಳನ್ನು ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಧಾನಗಳಿಂದ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಕಷ್ಟವಾಗುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಇದು ಕೆಲಸ ಮಾಡುತ್ತದೆಯೇ ಎಂದು ನೋಡಲು, ಸ್ಮ್ಯಾಡ್ 2 ನ MH2 ಡೊಮೇನ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು ಏಕೆಂದರೆ ಈ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಗ್ರಾಹಕ-ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಟೆಡ್ ಸೆರಿನ್ ಅವಶೇಷಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಪರ್ಕಕ್ಕೆ ಬಂದ ನಂತರ ಸ್ಥಿರವಾದ ಹೋಮೋ-ಟ್ರೈಮರ್ಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತಿಳಿದುಬಂದಿದೆ. ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಬಂಧನವನ್ನು (ಇಪಿಎಲ್ ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ) ಸ್ಮ್ಯಾಡ್2-ಎಂಎಚ್2-ಸಿಎಸ್ಪಿಎಸ್ಎಂ-ಫೋಟೋ-ಮೆಟ್ (1) ಅನ್ನು ರೂಪಿಸಲು ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಈ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಣ ಪ್ರೋಟೀನ್ ವಿರುದ್ಧ ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕರ್ನೊಂದಿಗೆ (ಫೋಟೋ-ಮೆಟ್) ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲಾಯಿತುಃ ಎಚ್ಎ-ಎಂಎಚ್2-ಸಿಎಸ್ಪಿಎಸ್ಎಂಪಿಎಸ್ (ಇದರಲ್ಲಿ ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಇಲ್ಲ, 2) ಎಸ್ಡಿಎಸ್-ಪೇಜ್ ಮತ್ತು ಆ್ಯಂಟಿ-ಎಚ್ಎ ಪ್ರತಿಕಾಯವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿ. 1 ಎರಡು ಪ್ರಮುಖ ಅಡ್ಡ-ಸಂಪರ್ಕಿತ ಪ್ರಭೇದಗಳನ್ನು ಸೃಷ್ಟಿಸಿದೆ, ಅವು ಸ್ಮ್ಯಾಡ್ 2-ಎಸ್ಎಚ್ 2 ನ ಡೈಮರ್ ಮತ್ತು ಟ್ರಿಮರ್ಗೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗುವ ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕವನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ. ಆ ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕರ್ ಇಲ್ಲದೆ, ಡೈಮರ್ ಮತ್ತು ಟ್ರಿಮರ್ ಅನ್ನು ವಿಕಿರಣ ರಹಿತ 1 ರಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ಯುವಿ ವಿಕಿರಣದ ಮೊದಲು ಮತ್ತು ನಂತರ 2 ರಲ್ಲಿ ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಗಲಿಲ್ಲ. ಎಲ್-ಫೋಟೊ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಅನ್ನು ಇಪಿಎಲ್ನೊಂದಿಗೆ ಬಳಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಪಿಟಿಎಂನ ಮೇಲೆ ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿರುವ ಅಸ್ಥಿರ ಎಂಎಚ್ 2-ಎಂಎಚ್ 2 ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಬಳಸಬಹುದು ಎಂದು ಸಾಬೀತುಪಡಿಸುತ್ತದೆ. ಕೊಲೆಸ್ಟರಾಲ್ ಹೋಮಿಯೋಸ್ಟಾಸಿಸ್ನಲ್ಲಿ ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳ ಸಂಕೀರ್ಣ ಮತ್ತು ಮೆಂಬ್ರೇನ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಕಾರ್ಯದ ಬಳಕೆ ಮೊದಲೇ ಹೇಳಿದಂತೆ, ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳಾದ ಮೋನಿಕಾ ಸುಚಾನೆಕ್, ಅನ್ನಾ ರಾಡ್ಜಿಕೋವ್ಸ್ಕಿ ಮತ್ತು ಕ್ರಿಸ್ಟೋಫ್ ಥೀಲೆ ಅವರು ತಮ್ಮ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಪರಿಸರದಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೀನ್-ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಬಯಸಿದ್ದರು. ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, ಕೊಲೆಸ್ಟ್ರಾಲ್ ಹೋಮಿಯೋಸ್ಟಾಸಿಸ್ ಅನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಮೆಂಬರೇನ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು (ಸಂಕೀರ್ಣದಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ಎಸ್ಸಿಎಪಿ, ಇನ್ಸಿಗ್-1, ಮತ್ತು ಎಸ್ಆರ್ಇಬಿಪಿ) ಅವುಗಳ ಕಾರ್ಯ ಮತ್ತು ಸಂಕೀರ್ಣ ರಚನೆಯನ್ನು ತಿಳಿಯಲು ಬಯಸುತ್ತವೆ. ಅವರು ಕಂಡುಕೊಂಡ ಸಂಗತಿಯೆಂದರೆ, ಈ ಫೋಟೋ-ರಿಯಾಕ್ಟಿವ್ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲವನ್ನು ಸಸ್ತನಿ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಪ್ರೋಟೀನ್ನಲ್ಲಿ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಸಂಯೋಜಿಸಿವೆ, ಆದರೆ ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಟಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳನ್ನು (ಟ್ರಾನ್ಸ್ಫರ್ ಆರ್ಎನ್ಎ) ಅಥವಾ ಎಎಆರ್ಎಸ್ (ಅಮೈನೋಸೈಲ್ ಟಿಆರ್ಎನ್ಎ ಸಿಂಥೆಸಿಸ್) ಅನ್ನು ಬಳಸಬೇಕಾಗಿಲ್ಲ, ಇದು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಅಡ್ಡ-ಜೋಡಣೆಗೆ ಅವಕಾಶ ಮಾಡಿಕೊಟ್ಟಿತು. ಈ ಅಡ್ಡ-ಸಂಪರ್ಕವನ್ನು ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟಿಂಗ್ನಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಅವರು ಇನ್ಸಿಗ್-1 ಮತ್ತು ಪಿಜಿಆರ್ಎಂಸಿ1 (ಪ್ರೊಜೆಸ್ಟರಾನ್-ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಮೆಂಬ್ರೇನ್ ಪ್ರೋಟೀನ್) ನಡುವಿನ ನೇರ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿದಿದ್ದಾರೆ. ಎಲ್ಲಾ ನಾಲ್ಕು ಮೆಂಬ್ರೇನ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು ಎಂಡೋಪ್ಲಾಸ್ಮಿಕ್ ರೆಟಿಕ್ಯುಲಮ್ನಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಸಂಕೀರ್ಣವು ಕಡಿಮೆ ಕೊಲೆಸ್ಟರಾಲ್ ಮಟ್ಟಕ್ಕೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸುತ್ತದೆ. ಎಚ್ಎ (ಹೆಮಾಗ್ಲುಟಿನಿನ್ ಟ್ಯಾಗ್ ಪಿಜಿಆರ್ಎಂಸಿ1) ಮತ್ತು ಮೈಕ್ ಟ್ಯಾಗ್ ಇನ್ಸಿಗ್-1 ಹೊಂದಿರುವ ಕೋಶಗಳನ್ನು (ಸಿಒಎಸ್7) ಫೋಟೋ-ಮೆಟ್ನೊಂದಿಗೆ ಮತ್ತು ಇಲ್ಲದೆ ಬೆಳೆಯಲಾಗುತ್ತಿತ್ತು. ಫೋಟೋ-ಮೆಟ್ನ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ, ಇನ್ಸಿಗ್-1 ಮತ್ತು ಎಸ್. ಸಿ. ಎ. ಪಿ. ಗಳು ಪಿ. ಜಿ. ಆರ್. ಎಂ. ಸಿ. 1 ನೊಂದಿಗೆ ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ ಆಗಿದ್ದವು; ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ, ಇನ್ಸಿಗ್-1 ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ ಬಲವಾದ ಬ್ಯಾಂಡ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿತ್ತು. ಎಚ್. ಎ. ಗೆ ಪ್ರತಿಕಾಯದೊಂದಿಗೆ ಡಿಟರ್ಜೆಂಟ್-ಎಕ್ಸ್ಟ್ರಾಕ್ಟ್ಗಳನ್ನು ಇಮ್ಯುನೊಪ್ರೆಸಿಪಿಟೇಟಿಂಗ್ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಅಡ್ಡ-ಸಂಪರ್ಕವನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲಾಯಿತು, ನಂತರ ಮೈಕ್ನ ಪ್ರತಿಕಾಯದೊಂದಿಗೆ ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಇನ್ಸಿಗ್-1 ಗಾಗಿ ಅವಕ್ಷೇಪಕವನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು. ಒಂದೇ ರೀತಿಯ ಬ್ಯಾಂಡ್ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಿಕೆಯ ಹಿಮ್ಮುಖ ಕ್ರಮವನ್ನು ಮಾಡುತ್ತಿರುವುದು ಕಂಡುಬಂದಿದೆ; ಅಂದರೆ ಮೈಕ್ ಪ್ರತಿಕಾಯವನ್ನು ಇಮ್ಯುನೊಪ್ರೆಸಿಪಿಟೇಟ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ಎಚ್ಎ ಪ್ರತಿಕಾಯದೊಂದಿಗೆ ಬ್ಲಾಟಿಂಗ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಈ ವಿಧಾನವು ಫೋಟೋ-ಮೆಟ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳನ್ನು ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ ಮಾಡಬಹುದೆಂದು ಸಾಬೀತಾಗಿದೆ, ಆದರೆ ಈ ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕಿಂಗ್ನ ದೈಹಿಕ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಇನ್ನೂ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ. ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ನೊಂದಿಗೆ ಪ್ರೋಟೀನ್-ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಪ್ರೋಟೀನ್ ನ್ಯಾನೊಪ್ರೋಬ್ಗಳ ಬಳಕೆಯನ್ನು ಪ್ರೋಟೀನ್ ನ್ಯಾನೊಪ್ರೋಬ್ ಬಳಸಿ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲಾಯಿತು (ಇದು ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ) ಇದು ಪ್ರೋಟೀನ್ನೊಳಗೆ ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಅನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸಿತು (ರಿಕಾಂಬಿನೆಂಟ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ) ಇದು ಪ್ರೋಟೀನ್ ತನ್ನ ಕಾಯ್ದಿರಿಸಿದ ರಚನೆಯನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅದರ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಮ್ಯಾಪ್ ಮಾಡುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ. 14-3-3 ζ ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಎರಡು ಅಣುಗಳ ನಡುವಿನ ಪ್ರಸಿದ್ಧ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ (ಹೋಮೋಡೈಮೈರೈಸೇಶನ್) ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಸಂಪರ್ಕ ಮೇಲ್ಮೈಯ ಪ್ರದೇಶವಾಗಿ ಈ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಒಮ್ಮೆ ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಅನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸಿದ ನಂತರ ಮತ್ತು ಯುವಿ-ಬೆಳಕನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಕ್ರಿಯಗೊಂಡ ನಂತರ, ಅದು ಯಾವುದೇ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯಿಲ್ಲದೆ ಅಡ್ಡ-ಸಂಪರ್ಕವನ್ನು ಹೊಂದಬಹುದು (ಅಂದರೆ ಯಾವುದೇ ಗುಂಪು ಇಲ್ಲ) ಮತ್ತು ಕೊಂಡಿಗಳು ಶೂನ್ಯ-ಉದ್ದವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ. ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ ಅವಶೇಷಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ತ್ರಿಜ್ಯವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಹೈ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ ಅಥವಾ ಎಂಎಸ್ ಅನ್ನು (ಎಂಎಸ್/ಎಂಎಸ್ ಸಹ) ಬಳಸಬಹುದು; ಸಂಶೋಧಕರು ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಹೋಮೋಡೈಮೈರೈಸೇಶನ್ ಅನ್ನು ನಿರೂಪಿಸಲು ಮತ್ತು ಸಂಶೋಧಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ. ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ನೊಂದಿಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಎಂ. ಎಸ್. ನ ಬಳಕೆಯು ಅದರ ಪ್ರಯೋಜನಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಇದು ಮತ್ತೆ ಪ್ರೋಟೀನ್ ತನ್ನ ಸ್ಥಳೀಯ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿರಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ, ಸಣ್ಣ ಪ್ರಮಾಣದ ಪ್ರೋಟೀನ್ನನ್ನು ಬಳಸುವಾಗ ಸಮಂಜಸವಾದ ಸಮಯದ ಪ್ರಮಾಣಗಳಿವೆ. ರಾಸಾಯನಿಕ ಅಡ್ಡ-ಸಂಪರ್ಕಕ್ಕೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಫೋಟೋ-ಆಕ್ಟಿವ್ ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕರ್ (ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್) ಅನ್ನು ಬಳಸುವ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ನಿರ್ಬಂಧಗಳ ಮೇಲೆ ಕಡಿಮೆ ಮಿತಿಗಳಿವೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್ ನ್ಯಾನೊಪ್ರೋಬ್ನಿಂದ ಎಂ. ಎಸ್. ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿತ ಫೋಟೋ-ಪ್ರಾರಂಭಿತ ಅಡ್ಡ-ಸಂಪರ್ಕದ ಈ ವಿಧಾನವು ಹೋಮೋಡೈಮರ್ ರಚನೆಯನ್ನು ಮಾತ್ರವಲ್ಲದೆ ಒಲಿಗೋಮರ್ಗಳನ್ನು ಮತ್ತು ಸಿದ್ಧಾಂತದಲ್ಲಿ; ಹೆಟೆರೊಮರ್ಗಳನ್ನು (ಪ್ರೋಟೀನ್-ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮಿಶ್ರಣದ ಸಂಯೋಜನೆ ಮತ್ತು ಅದರ ಕಾರ್ಯಚಟುವಟಿಕೆಯಂತಹವು) ನಿರೂಪಿಸಲು ಉಪಯುಕ್ತವಾಗಿದೆ. ಫೋಟೋ-ಸೈಟೋಕ್ರೋಮ್ ಬಿ5 ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸೈಟೋಕ್ರೋಮ್ ಪಿ450 ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್-ಟ್ರಾನ್ಸ್ಪೋರ್ಟ್ ಸರಪಳಿಯನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ ಸೈಟೋಕ್ರೋಮ್ ಬಿ5 ಅನ್ನು ಪ್ರೋಟೀನ್-ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ನಕ್ಷೆ ಮಾಡಲು ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಸಸ್ತನಿಗಳ ಮಿಶ್ರ ಕಾರ್ಯ ಆಕ್ಸಿಡೇಸ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು (ಎಂಎಫ್ಒ ಎಂದೂ ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ) ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಅದರ ರಚನೆಯನ್ನು ಗುರುತಿಸಲಾಯಿತು. ಈ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಎಂಡೋಪ್ಲಾಸ್ಮಿಕ್ ರೆಟಿಕ್ಯುಲಮ್ನ ಪೊರೆಯಲ್ಲಿದೆ ಮತ್ತು ಇದು ಸೈಟೋಕ್ರೋಮ್ ಪಿ450, ಎನ್. ಎ. ಡಿ. ಪಿ. ಎಚ್.: ಸೈಟೋಕ್ರೋಮ್ ಪಿ450 ರಿಡಕ್ಟೇಸ್, ಮತ್ತು ಸೈಟೋಕ್ರೋಮ್ ಬಿ5 ಜೊತೆಗೆ ಎನ್. ಎ. ಡಿ. ಎಚ್.: ಸೈಟೋಕ್ರೋಮ್ ಬಿ5 ರಿಡಕ್ಟೇಸ್ನಿಂದ ಕೂಡಿದೆ. ಸೈಟೋಕ್ರೋಮ್ ಬಿ5 ಸಂಕೀರ್ಣವು ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಅನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸಿದ ನಂತರ (ಅಂದರೆ ಫೋಟೋ-ಮೆಟ್ ಅನ್ನು ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಮತ್ತು ಈಗ ಫೋಟೋ-ಸೈಟ್ ಬಿ5 ಬದಲಿಗೆ ಬದಲಿಸಲಾಗಿದೆ), ಫೋಟೋ-ಸೈಟ್ ಬಿ5 ಮತ್ತು ಸೈಟೋಕ್ರೋಮ್ ಪಿ450 ಅನ್ನು ಯುವಿ-ಬೆಳಕಿನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಎಸ್. ಡಿ. ಎಸ್-ಪೇಜ್ ಬಳಸಿ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಸಾಧ್ಯವಾಯಿತು; ಈ ವಿಧಾನವು ಮೂರು ಅಡ್ಡ-ಕೊಂಡಿಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಿತ್ತು. ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಫೋಟೋ-ಸೈಟ್ ಬಿ5 ಮ್ಯಾಪಿಂಗ್ನಲ್ಲಿ ಯಶಸ್ವಿಯಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸಾಬೀತಾಗಿದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಮಾಲ್ಡಿ-ಟಿಒಎಫ್ ವಿಧಾನವು ಫೋಟೋ-ಸೈಟ್ ಬಿ5 ಮತ್ತು ಸೈಟೋಕ್ರೋಮ್ ಪಿ450 ನಿಂದ ಕೂಡಿದ ಮೂರು ಆಲಿಗೋಮರ್ಗಳನ್ನು (ಕೈಮೋಟ್ರಿಪ್ಟಿಕ್ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ಗಳಿಂದ) 1:1,1:2, ಮತ್ತು 2:1 ರ ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕದ ಅನುಪಾತದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿದೆ. ಸೈಟೋಕ್ರೋಮ್ ಪಿ450 ಮತ್ತು ಸೈಟೋಕ್ರೋಮ್ ಬಿ5 ಅನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಅನ್ನು ಇಲ್ಲಿ ತುಂಬಾ ಉಪಯುಕ್ತವಾಗಿಸುವುದೇನೆಂದರೆ, ಈ ವಿಧಾನವು ದ್ರಾವಕಕ್ಕೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಳ್ಳುವ ಪ್ರದೇಶಗಳಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರವಲ್ಲದೆ ಸ್ಥಳೀಯ ಪರಿಸರದಲ್ಲಿಯೂ ಸಹ ಮ್ಯಾಪ್ ಮಾಡಲಾದ ಪ್ರೋಟೀನ್-ಪ್ರೋಟೀನ್ ಇಂಟರ್ಫೇಸ್ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಒಂದು ವಿಶಿಷ್ಟ ಅಡ್ಡ-ಜೋಡಣೆ ವಿಧಾನವು ದ್ರಾವಕದ ಒಡ್ಡಿದ ಪ್ರದೇಶಗಳಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ತಮ್ಮ ಸ್ಥಳೀಯ ಪರಿಸರದಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ನೊಂದಿಗೆ ಈ ಪ್ರೋಟೀನ್-ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ನಕ್ಷೆ ಮಾಡಲು ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಉಪಯುಕ್ತವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಮತ್ತೊಮ್ಮೆ ಸಾಬೀತುಪಡಿಸುತ್ತದೆ. ಲ್ಯಾಮಿನಿನ್ γ1 ಲ್ಯಾಮಿನಿನ್ನೊಂದಿಗೆ ಸಂವಹನ ನಡೆಸುವ ನಿಡೋಜೆನ್-1ನ ಪ್ರೋಟೀನ್ ರಚನೆ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ನೆಲಮಾಳಿಗೆಯ ಪೊರೆಗಳಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವ ಮತ್ತು ಕೋವೆಲೆಂಟ್ ಅಲ್ಲದ ಸ್ವಯಂ-ಸಂವಹನಗಳ ಮೂಲಕ ಜಾಲಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸುವ ಕೊಲಾಜೆನ್ ಅಲ್ಲದ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳಾಗಿವೆ. ನಿಡೋಜೆನ್ಗಳು (ಎಂಟ್ಯಾಕ್ಟಿನ್ಗಳು ಎಂದೂ ಕರೆಯಲ್ಪಡುತ್ತವೆ) ಸಲ್ಫೇಟೆಡ್ ಮೊನೊಮೆರಿಕ್ ಗ್ಲೈಕೊಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳಾಗಿದ್ದು, ಅವು ಉನ್ನತ ಜೀವಿಗಳ ನೆಲಮಾಳಿಗೆಯ ಪೊರೆಗಳಲ್ಲಿ ಸರ್ವತ್ರವಾಗಿರುತ್ತವೆ. ನೆಲಮಾಳಿಗೆಯ ರಚನೆಗೆ ನಿಡೋಜೆನ್ಗಳು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತವೆ. ಲ್ಯಾಮಿನಿನ್ಗಳು ಮತ್ತು ನಿಡೋಜೆನ್ಗಳೆರಡೂ ಇರುವುದರಿಂದ, ಸಂಕೀರ್ಣದಲ್ಲಿ 1:1 ರ ಸ್ಟೋಯಿಕಿಯೋಮೆಟ್ರಿ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ಹೊಂದಲು ಎರಡೂ ಪರಸ್ಪರ ಸಂವಹನ ನಡೆಸುತ್ತವೆ. ಲ್ಯಾಮಿನಿನ್ γ1 ನ ಚಿಕ್ಕ ತೋಳನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು, ಫೋಟೋ ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ನಿಡೋಜೆನ್-1, ಲ್ಯಾಮಿನಿನ್ γ1 LEb2-4, ಮತ್ತು ಲ್ಯಾಮಿನಿನ್ γ1 ಚಿಕ್ಕ ತೋಳು ಎರಡನ್ನೂ ಪರಿಚಯಿಸಿತು, ಈ ಫೋಟೋ-ಕ್ರಾಸ್ ಲಿಂಕಿಂಗ್ ವಿಧಾನವು ರಚನೆಯನ್ನು ನಕ್ಷೆ ಮಾಡಬಹುದೇ ಎಂದು ನೋಡಲು. ಎಂಎಸ್/ಎಂಎಸ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕಿಂಗ್ ಮಾಡುವ ಮೊದಲು ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ನ 13-25% ಅನ್ನು ಮಾತ್ರ ಸಂಯೋಜಿಸಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಯಿತು, ಆದರೆ ಒಮ್ಮೆ ಯುವಿ-ಎ-ಪ್ರೇರಿತ ಅಥವಾ ಇನ್ನೊಂದು ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕರ್, ಬಿಎಸ್ 2 ಜಿ-ಮಧ್ಯಸ್ಥ ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ (ಹೋಮೋಬಿಫಂಕ್ಷನಲ್ ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕರ್), ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ನ ಶೇಕಡಾವಾರು ಪ್ರಮಾಣವು ಶೇಕಡಾ 35 ಕ್ಕೆ ಏರಿದೆ. ಎರಡೂ ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕರ್ಗಳು ಕಾರ್ಯಗಳನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡಲು ಗಣನೆಯ ಮತ್ತು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ರಚನಾತ್ಮಕ ಒಳನೋಟವನ್ನು ತೋರಿಸಿವೆ. ಡೈಮೆರಿಕ್ ಸ್ಟ್ರಕ್ಚರ್ ಮತ್ತು ಒಲಿಗೋಮೆರಿಕ್ ಸ್ಟ್ರಕ್ಚರ್ ಸೈಕ್ಲೋಆಕ್ಸಿಜನೇಸ್-2 (ಸಿಒಎಕ್ಸ್-2) ಮತ್ತು ಮೈಕ್ರೋಸೊಮಲ್ ಪ್ರೊಸ್ಟಾಗ್ಲಾಂಡಿನ್ ಇ2 ಸಿಂಥೇಸ್-1 (ಎಂಪಿಜಿಇಎಸ್-1) ರಚನೆಗಳ ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ (ಫೋಟೋ-ಆಕ್ಟಿವೇಬಲ್) ಮತ್ತು ಬೈಫಂಕ್ಷನಲ್ ಕ್ರಾಸ್ ಲಿಂಕರ್ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ಸಿಒಎಕ್ಸ್-2ರಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾದ ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಬೈಫಂಕ್ಷನಲ್ ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕರ್ನಂತೆಯೇ ಡೈಮೆರಿಕ್ ರಚನೆಯಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ, ಇದು ಕಿಣ್ವದ ಸ್ಫಟಿಕ ರಚನೆಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿದೆ. ಎಂ. ಪಿ. ಜಿ. ಇ. ಎಸ್.-1ರಲ್ಲಿ, ಮಾನವ ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು (ಎ549) ಡಿಸುಸಿನಿಮಿಡಿಲ್ ಸುಬೆರೇಟ್ (ರಾಸಾಯನಿಕ ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕರ್) ನಿಂದ ಸಂಸ್ಕರಿಸಲಾಗಿದ್ದು, ಅವು 33ಕೆಡಿಎ ಡೈಮರ್ ಮತ್ತು 45ಕೆಡಿಎ ಟ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು ಪಡೆದಿದ್ದರೆ, ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದಾಗ ಅದೇ ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕದ (33ಕೆಡಿಎ) ಡೈಮರ್ ಮತ್ತು ಎರಡು ಪುಟೇಟಿವ್ ಟ್ರೈಮರ್ಗಳನ್ನು (50ಕೆಡಿಎ ಮತ್ತು 55ಕೆಡಿಎ) ಪಡೆದಿದ್ದವು. ಒಮ್ಮೆ ಎಂ. ಪಿ. ಜಿ. ಇ. ಎಸ್-1 ಪ್ರತಿರೋಧಕವನ್ನು (ಎಂ. ಎಫ್. 63) ಪರಿಚಯಿಸಲಾಯಿತು; ಇದು 50ಕೆ. ಡಿ. ಎ ಮತ್ತು 55ಕೆ. ಡಿ. ಎ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳ ರಚನೆಯನ್ನು ತಡೆಯಿತು. ರಾಸಾಯನಿಕ ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕರ್ನಿಂದ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುವ ಡೈಮರ್ ಮತ್ತು ಟ್ರಿಮರ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ನಿಂದ ಪ್ರಭಾವಿತವಾಗಿರಲಿಲ್ಲ. ಆದರೂ, ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಅಥವಾ ಡೈಸುಸಿನಿಮಿಡಿಲ್ ಸಬರೇಟ್ ಸಿಒಎಕ್ಸ್-2 ಮತ್ತು ಎಂಪಿಜಿಇಎಸ್-1 ನಡುವೆ ಯಾವುದೇ ಪ್ರೋಟೀನ್-ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಲಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಇದು ವಿವಿಧ ಕಾರಣಗಳಿಂದಾಗಿರಬಹುದು. ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ಗೆ; ಈ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆ ಸಂಯೋಜನೆಯ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿ ಇದು 0.7% ಆಗಿತ್ತು. ಆದ್ದರಿಂದ, ಎಂ. ಪಿ. ಜಿ. ಇ. ಎಸ್-1 ಗೆ; ಇದು 152 ಅಮೈನೊ ಆಮ್ಲಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಆದ್ದರಿಂದ ಪ್ರತಿ ಮೊನೊಮರ್ಗೆ ಕೇವಲ ಒಂದು ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಅನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಇದರರ್ಥ ಒಂದು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಅನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಎಂ. ಪಿ. ಜಿ. ಇ. ಎಸ್-1 ರ ವೈವಿಧ್ಯಮಯ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯು ವಿಭಿನ್ನ ಅಡ್ಡ-ಸಂಪರ್ಕಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ಇದು ಯಾವುದೇ ಪ್ರೋಟೀನ್-ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ತೋರಿಸದಿದ್ದರೂ ಸಹ, ಆಲಿಗೋಮೆರಿಕ್ ರಚನೆಗಳನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುವ ಮೇಲ್ಭಾಗದಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶದ ಪೊರೆಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿರೋಧಕ-ಪ್ರೇರಿತ ಪ್ರೋಟೀನ್ ರಚನಾತ್ಮಕ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಇದನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು. ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೊಲಿ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ರಿಕಾಂಬಿನೆಂಟ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳನ್ನು ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲು ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು; ಆದಾಗ್ಯೂ ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಅಪರೂಪದ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲವಾಗಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಇದು ಸೀಮಿತ ರಚನಾತ್ಮಕ ದತ್ತಾಂಶವನ್ನು ಮಾತ್ರ ನೀಡುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಅನ್ನು ಒಂಬತ್ತು ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಮತ್ತು ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ (ಎಂಎಸ್) ಮೂಲಕ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಿದ ಸಿಎ2 + ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕ್ಯಾಲ್ಮೋಡುಲಿನ್ (ಸಿಎಎಂ ಅದು 17-ಕೆಡಿಎ ಆಗಿತ್ತು) ನಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು. ಈ ವಿಧಾನವನ್ನು ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿಸುವುದೇನೆಂದರೆ, ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸಲು ಡಿಎಂಇಎಂ (ಡಲಬೆಕ್ಕೊದ ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಹದ್ದುಗಳ ಸೀಮಿತಗೊಳಿಸುವ ಮಾಧ್ಯಮ) ಅಥವಾ ಡಯಾಲಿಸ್ಡ್ ಭ್ರೂಣದ ಗೋವಿನ ಸೀರಮ್ ಬದಲಿಗೆ ಖನಿಜ ಲವಣಗಳ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಬಳಸುವುದು. ಖನಿಜ ಉಪ್ಪಿನ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಬಳಸುವುದರಿಂದ ಇತರ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಕೀರ್ಣ ಹಂತಗಳನ್ನು ತೊಡೆದುಹಾಕಲು ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಬೆಳೆಯಲು ಅವಕಾಶ ಮಾಡಿಕೊಟ್ಟಿತು (ಎಲ್ಬಿ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಕಾವುಕೊಡುವುದು, ನಂತರ ತೊಳೆಯುವುದು ಮತ್ತು ಖಾಲಿಯಾದ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಮತ್ತಷ್ಟು ಕಾವುಕೊಡುವುದು), ಅಂದರೆ ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಅನ್ನು ಜೀವಕೋಶದ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರಾರಂಭದಲ್ಲಿಯೇ ಸಂಯೋಜಿಸಬಹುದು, ಅದು ಶೇಕಡಾ 30 ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಇಳುವರಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿತ್ತು. ಜೀವಕೋಶದ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಯಾವುದೇ ಹಾನಿಯನ್ನು ತೋರಿಸಲಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಒಮ್ಮೆ ಯುವಿ-ಎ ಬೆಳಕಿನಿಂದ ಫೋಟೋ-ಸಕ್ರಿಯಗೊಂಡ ನಂತರ, ಸಿಎಎಂ ಎಂದು ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ನ ಶಿಖರಗಳಿವೆ ಎಂದು ಎಂಎಸ್ ನಿರ್ಧರಿಸಿದ ನಂತರ ಸಿಎಎಂ ಒಂಬತ್ತು ವಿಭಿನ್ನ ಅಡ್ಡ-ಸಂಪರ್ಕ ತಾಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿತ್ತು. ಫೋಟೋ-ಮೆಥಿಯೋನಿನ್ ಅನ್ನು 3ಡಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ರಚನೆಯನ್ನು ಮ್ಯಾಪ್ ಮಾಡಲು, ಪ್ರೋಟೀನ್-ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಮಾತ್ರವಲ್ಲ, ಈಗ ಪ್ರೋಟೀನ್ನಲ್ಲಿನ ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಪ್ರದೇಶಗಳಿಗೂ ಬಳಸಬಹುದು. ಉಲ್ಲೇಖಗಳು ಜೀವರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರ ಪತ್ತೆ ವಿಧಾನಗಳು ಫೋಟೊಕೆಮಿಸ್ಟ್ರಿ ಆಲ್ಫಾ-ಅಮಿನೋ ಆಮ್ಲಗಳು ಅಮಿನೋ ಆಮ್ಲ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಡಯಾಜಿರಿನ್ಗಳು