MicroRNA sequencing
ಮೈಕ್ರೋಆರ್ಎನ್ಎ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ (ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ-ಸೆಕ್), ಒಂದು ರೀತಿಯ ಆರ್ಎನ್ಎ-ಸೆಕ್, ಮುಂದಿನ ಪೀಳಿಗೆಯ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ಅಥವಾ ಬೃಹತ್ ಸಮಾನಾಂತರ ಹೈ-ಥ್ರೋಪುಟ್ ಡಿಎನ್ಎ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಮೈಕ್ರೋಆರ್ಎನ್ಎಗಳ ಅನುಕ್ರಮಕ್ಕೆ ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಇದನ್ನು ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳು ಎಂದೂ ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ-ಸೆಕ್ ಆರ್ಎನ್ಎ-ಸೆಕ್ನ ಇತರ ರೂಪಗಳಿಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಇನ್ಪುಟ್ ವಸ್ತುವನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಸಣ್ಣ ಆರ್ಎನ್ಎಗಳಿಗೆ ಪುಷ್ಟೀಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ-ಸೆಕ್ ಸಂಶೋಧಕರಿಗೆ ಅಂಗಾಂಶ-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಾದರಿಗಳು, ರೋಗ ಸಂಘಗಳು ಮತ್ತು ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳ ಐಸೋಫಾರ್ಮ್ಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ಮತ್ತು ಹಿಂದೆ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳಿಲ್ಲದ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ. ಅನಿಯಂತ್ರಿತ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ನಂತಹ ರೋಗಗಳಲ್ಲಿ ಪಾತ್ರವಹಿಸುತ್ತವೆ ಎಂಬುದಕ್ಕೆ ಪುರಾವೆಗಳು ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ-ಸೆಕ್ ಅನ್ನು ಭವಿಷ್ಯದಲ್ಲಿ ರೋಗನಿರ್ಣಯ ಮತ್ತು ಮುನ್ನರಿವಿನ ಪ್ರಮುಖ ಸಾಧನವಾಗಿ ಮಾರ್ಪಡಿಸಿವೆ, ಏಕೆಂದರೆ ವೆಚ್ಚಗಳು ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತಲೇ ಇವೆ. ಇತರ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಪ್ರೊಫೈಲಿಂಗ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳಂತೆ, ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ-ಸೆಕ್ ಅನುಕೂಲಗಳು (ಅನುಕ್ರಮ-ಸ್ವಾತಂತ್ರ್ಯ, ವ್ಯಾಪ್ತಿ) ಮತ್ತು ಅನಾನುಕೂಲಗಳು (ಹೆಚ್ಚಿನ ವೆಚ್ಚ, ಮೂಲಸೌಕರ್ಯ ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳು, ಚಾಲನೆಯ ಉದ್ದ ಮತ್ತು ಸಂಭಾವ್ಯ ಕಲಾಕೃತಿಗಳು) ಎರಡನ್ನೂ ಹೊಂದಿದೆ. ಮೈಕ್ರೊಆರ್ಎನ್ಎಗಳು (ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳು) ಸಣ್ಣ ರಿಬೊನ್ಯೂಕ್ಲಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳ ಒಂದು ಕುಟುಂಬವಾಗಿದ್ದು, ಉದ್ದದಲ್ಲಿ 21-25 ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಗಳು, ಇದು ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಅವನತಿ, ಅನುವಾದದ ಪ್ರತಿಬಂಧ, ಅಥವಾ ಪ್ರತಿಲೇಖನಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ. ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾದ ಮೊದಲ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ, ಲಿನ್-4, ನೆಮಟೋಡ್ ಸಿನೋರಹ್ಯಾಬಿಡಿಸ್ ಎಲಿಗನ್ಸ್ನ ಭ್ರೂಣದ ನಂತರದ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಆಣ್ವಿಕ ಅಂಶಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಆನುವಂಶಿಕ ಮ್ಯುಟಜೆನೆಸಿಸ್ ಪರದೆಯಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬಂದಿದೆ. ಲಿನ್-4 ವಂಶವಾಹಿಯು ಲಿನ್-14 ಎಮ್ಆರ್ಎನ್ಎ ಪ್ರತಿಲೇಖನದ 3 '-ಅನುವಾದಿಸದ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿ ಸಂರಕ್ಷಿತ ಪೂರಕ ಬಂಧಿಸುವ ತಾಣಗಳೊಂದಿಗೆ 22 ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಆರ್ಎನ್ಎಯನ್ನು ಎನ್ಕೋಡ್ ಮಾಡಿದೆ ಮತ್ತು ಎಲ್ಐಎನ್-14 ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿದೆ. ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳು ಈಗ ಹೆಮಟೊಪೊಯಿಸಿಸ್ (ಮಸ್ ಮಸ್ಕ್ಯುಲಸ್ನಲ್ಲಿ ಎಮ್ಐಆರ್-181), ಲಿಪಿಡ್ ಮೆಟಾಬಾಲಿಸಮ್ (ಡ್ರೊಸೊಫಿಲಾ ಮೆಲನೊಗಾಸ್ಟರ್ನಲ್ಲಿ ಎಮ್ಐಆರ್-14) ಮತ್ತು ನರಕೋಶದ ಬೆಳವಣಿಗೆ (ಸಿನೋರ್ಹ್ಯಾಬ್ಡೈಟಿಸ್ ಎಲಿಗನ್ಸ್ನಲ್ಲಿ ಎಲ್ಎಸ್ಐ-6) ಸೇರಿದಂತೆ ಅನೇಕ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಮತ್ತು ಜೈವಿಕ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳ ನಿಯಂತ್ರಣದಲ್ಲಿ ತೊಡಗಿವೆ ಎಂದು ಭಾವಿಸಲಾಗಿದೆ. ಈ ಆವಿಷ್ಕಾರಗಳು ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ-ಸೆಕ್ನಂತಹ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಮತ್ತು ನಿರೂಪಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುವ ತಂತ್ರಗಳ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯನ್ನು ಅಗತ್ಯವಾಗಿಸಿದವು. ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಹೊಸ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಪ್ರೊಫೈಲ್ಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ಮುಂದಿನ ಪೀಳಿಗೆಯ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ಅಥವಾ ಬೃಹತ್ ಸಮಾನಾಂತರ ಹೈ-ಥ್ರೋಪುಟ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳ ಲಾಭವನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಇತಿಹಾಸ ಮೈಕ್ರೋಆರ್ಎನ್ಎ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ (ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ-ಸೆಕ್) ಅನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ. ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಅನುಕ್ರಮವು ಹೊಸ ಕಲ್ಪನೆಯಲ್ಲ, ಅನುಕ್ರಮಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ಆರಂಭಿಕ ವಿಧಾನಗಳು ಸ್ಯಾಂಗರ್ ಅನುಕ್ರಮ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡಿವೆ. ಅನುಕ್ರಮ ತಯಾರಿಕೆಯು ಕಾಲಮ್ ಮತ್ತು ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ನಿಂದ ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲಾದ 21-25 ಬಿಪಿ ಗಾತ್ರದ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಸಣ್ಣ ಆರ್ಎನ್ಎಗಳಿಂದ ನಕಲು ಮಾಡಲಾದ ಡಿಎನ್ಎ ರಿವರ್ಸ್ನ ಅಬೀಜ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿಯ ಮೂಲಕ ಗ್ರಂಥಾಲಯಗಳನ್ನು ರಚಿಸುವುದನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ ವಿಧಾನವು ಸಮಯ ಮತ್ತು ಸಂಪನ್ಮೂಲಗಳ ವಿಷಯದಲ್ಲಿ ಸಮಗ್ರವಾಗಿದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಪ್ರತಿ ತದ್ರೂಪುಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ವರ್ಧಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಅನುಕ್ರಮಕ್ಕೆ ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಬೇಕು. ಈ ವಿಧಾನವು ಅಜಾಗರೂಕತೆಯಿಂದ ಹೆಚ್ಚು ವ್ಯಕ್ತವಾಗಿರುವ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳಿಗೆ ಒಲವು ತೋರುತ್ತದೆ. ಮುಂದಿನ ಪೀಳಿಗೆಯ ಅನುಕ್ರಮವು ಡಿಎನ್ಎ ಮೈಕ್ರೋಅರೇ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಅನುಕ್ರಮ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸಂಕರೀಕರಣ ಶೋಧಕಗಳ ಅಗತ್ಯವನ್ನು ಮತ್ತು ಸ್ಯಾಂಗರ್ ಅನುಕ್ರಮ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಶ್ರಮದಾಯಕ ಅಬೀಜ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ನಿವಾರಿಸುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ-ಎಸ್ಇಕ್ಯೂ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ ಮುಂದಿನ ಪೀಳಿಗೆಯ ಅನುಕ್ರಮ ವೇದಿಕೆಗಳು ಒಂದೇ ಅನುಕ್ರಮ ಓಟದಲ್ಲಿ ಸಣ್ಣ ಆರ್ಎನ್ಎಗಳ ದೊಡ್ಡ ಪೂಲ್ಗಳ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಸುಗಮಗೊಳಿಸುತ್ತವೆ. ವಿವಿಧ ಅನುಕ್ರಮ ವೇದಿಕೆಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ-ಸೆಕ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದು. ಮೈಆರ್ಎನ್ಎ-ಸೆಕ್ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಣ್ಣ ಆರ್ಎನ್ಎಗಳ ಮೊದಲ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಲಿಂಕ್ಸ್ ಥೆರಪ್ಯೂಟಿಕ್ಸ್ನ ಬೃಹತ್ ಸಮಾನಾಂತರ ಸಿಗ್ನೇಚರ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ (ಎಂಪಿಎಸ್ಎಸ್) ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ಪ್ಲಾಟ್ಫಾರ್ಮ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮಾದರಿ ಸಸ್ಯ ಅರಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಥಾಲಿಯಾನಾದಿಂದ ಸುಮಾರು 14 ಲಕ್ಷ ಸಣ್ಣ ಆರ್ಎನ್ಎಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿತು. ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ಸಣ್ಣ ಆರ್. ಎನ್. ಎ. ಗಳ ಅಧ್ಯಯನಕ್ಕಾಗಿ ಹೊಸ, ಹೆಚ್ಚಿನ-ಥ್ರೋಪುಟ್ ಅನುಕ್ರಮ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿತು ಮತ್ತು ಜೀನೋಮ್ಗಳು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಸಣ್ಣ ಆರ್. ಎನ್. ಎ. ಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಸಸ್ಯಗಳು ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಸಣ್ಣ ಆರ್. ಎನ್. ಎ. ಗಳ ಸಮೃದ್ಧ ಮೂಲಗಳಾಗಿವೆ ಎಂದು ಇದು ತೋರಿಸಿದೆ. ನಂತರದ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಇತರ ಅನುಕ್ರಮ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡವು, ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಸಿ. ಎಲಿಗನ್ಸ್ನಲ್ಲಿನ ಅಧ್ಯಯನವು 18 ಹೊಸ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ವಂಶವಾಹಿಗಳನ್ನು ಮತ್ತು 21ಯು-ಆರ್ಎನ್ಎಗಳು ಎಂದು ಕರೆಯಲ್ಪಡುವ ಹೊಸ ವರ್ಗದ ನೆಮಟೋಡ್ ಸಣ್ಣ ಆರ್ಎನ್ಎಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಿತು. ಮಾನವ ಗರ್ಭಕಂಠದ ಗೆಡ್ಡೆಗಳು ಮತ್ತು ಸಾಮಾನ್ಯ ಅಂಗಾಂಶಗಳ ಸಣ್ಣ ಆರ್ಎನ್ಎ ಪ್ರೊಫೈಲ್ಗಳನ್ನು ಹೋಲಿಸಿದ ಮತ್ತೊಂದು ಅಧ್ಯಯನವು, 64 ಹೊಸ ಮಾನವ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ವಂಶವಾಹಿಗಳನ್ನು ಮತ್ತು 67 ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಿದ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಇಲ್ಯೂಮಿನಾ (ಕಂಪನಿ) ಜೀನೋಮ್ ಅನಲೈಜರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡಿತು. ಮಾನವ ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಅನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಲ್ಲಿ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳ ಮುನ್ನರಿವಿನ ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ಅನ್ವಯಿಕ ಜೈವಿಕ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳ ಸೋಲ್ಡ್ ಅನುಕ್ರಮ ವೇದಿಕೆಯನ್ನು ಸಹ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ. ವಿಧಾನಗಳು ಸಣ್ಣ ಆರ್. ಎನ್. ಎ. ತಯಾರಿಕೆ ಅನುಕ್ರಮ ಗ್ರಂಥಾಲಯದ ನಿರ್ಮಾಣವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ-ಥ್ರೋಪುಟ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ಪ್ಲಾಟ್ಫಾರ್ಮ್ ಅನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ ವಿವಿಧ ಕಿಟ್ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ ಮಾಡಬಹುದು. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಸಣ್ಣ ಆರ್ಎನ್ಎ ಅನುಕ್ರಮ ತಯಾರಿಕೆಗೆ ಹಲವಾರು ಸಾಮಾನ್ಯ ಹಂತಗಳಿವೆ. ಒಟ್ಟು ಆರ್. ಎನ್. ಎ. ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆ ಒಂದು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಎಲ್ಲಾ ಆರ್. ಎನ್. ಎ. ಗಳನ್ನು ಐಸೊಥಿಯೋಸೈನೇಟ್/ಫೀನಾಲ್/ಕ್ಲೋರೋಫಾರ್ಮ್ (ಜಿ. ಐ. ಟಿ. ಸಿ./ಫೀನಾಲ್) ವಿಧಾನ ಅಥವಾ ಟ್ರೈಜೋಲ್ (ಇನ್ವಿಟ್ರೋಜೆನ್) ಕಾರಕದಂತಹ ವಾಣಿಜ್ಯ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೊರತೆಗೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಒಟ್ಟು ಆರ್. ಎನ್. ಎ. ಯ ಆರಂಭಿಕ ಪ್ರಮಾಣವಾದ 1 ಗ್ರಾಂ ಅಂಗಾಂಶವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಒಟ್ಟು ಆರ್. ಎನ್. ಎ. ಯ 1 ಮಿಗ್ರಾಂ ಅನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ, ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಜೆಲ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಮತ್ತು ಗಾತ್ರದ ಆಯ್ಕೆಗೆ ಅಗತ್ಯವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಆರ್. ಎನ್. ಎ. ಯ ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣವನ್ನು ಸಹ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಕ್ಯಾಲಿಪರ್ ಲ್ಯಾಬ್ ಚಿಪ್ಜಿಎಕ್ಸ್ (ಕ್ಯಾಲಿಪರ್ ಲೈಫ್ ಸೈನ್ಸಸ್) ನಲ್ಲಿ ಆರ್. ಎನ್. ಎ ಚಿಪ್ ಅನ್ನು ಚಲಾಯಿಸುವುದು. ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ನಿಂದ ಸಣ್ಣ ಆರ್ಎನ್ಎಗಳ ಗಾತ್ರದ ಭಿನ್ನರಾಶಿಯನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಿದ ಆರ್ಎನ್ಎಯನ್ನು ಡಿನೇಚರಿಂಗ್ ಪಾಲಿಯಾಕ್ರಿಲಾಮೈಡ್ ಜೆಲ್ನಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ವಿಕಿರಣಶೀಲ 5 '-32ಪಿ-ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಿದ ಒಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಗಳಂತಹ ಇಮೇಜಿಂಗ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಗಾತ್ರದ ಏಣಿಯೊಂದಿಗೆ ಸೂಕ್ತ ಗಾತ್ರದ ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊಂದಿರುವ ಜೆಲ್ನ ಒಂದು ಭಾಗವನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಅನುಕ್ರಮವಾದ ವಸ್ತುಗಳ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಕೆಳಗೆ ವಿವರಿಸಿರುವ ಬಂಧನ ಮತ್ತು ಹಿಮ್ಮುಖ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಹಂತಗಳ ಮೊದಲು ಈ ಹಂತವನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳಬೇಕಾಗಿಲ್ಲ. ಬಂಧನ ಹಂತವು ಸಣ್ಣ ಆರ್ಎನ್ಎಗಳ ಎರಡೂ ತುದಿಗಳಿಗೆ ಡಿಎನ್ಎ ಅಡಾಪ್ಟರ್ಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಪ್ರೈಮರ್ ಬೈಂಡಿಂಗ್ ತಾಣಗಳಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ. ಅಡೆನೈಲೇಟೆಡ್ ಸಿಂಗಲ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಡಿಎನ್ಎ 3 'ಅಡಾಪ್ಟರ್ ನಂತರ 5' ಅಡಾಪ್ಟರ್ ಅನ್ನು ಟಿ 4 ಆರ್ಎನ್ಎ ಲಿಗೇಸ್ 2 ನಂತಹ ಲಿಗೇಟಿಂಗ್ ಕಿಣ್ವವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಣ್ಣ ಆರ್ಎನ್ಎಗಳಿಗೆ ಜೋಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅಡಾಪ್ಟರ್ಗಳನ್ನು 5 'ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸಿಲ್ ಗುಂಪಿನೊಂದಿಗೆ ಆರ್ಎನ್ಎ ಅವನತಿ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಬದಲಿಗೆ 5' ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಗುಂಪು, ವಿಶಿಷ್ಟ ಮೈಕ್ರೋಆರ್ಎನ್ಎಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಣ್ಣ ಆರ್ಎನ್ಎಗಳನ್ನು ಸೆರೆಹಿಡಿಯಲು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ. ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಷನ್ ಈ ಹಂತವು ಸಣ್ಣ ಅಡಾಪ್ಟರ್ ಲಿಗೇಟೆಡ್ ಆರ್ಎನ್ಎಗಳನ್ನು ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸುವ ಸಿಡಿಎನ್ಎ ತದ್ರೂಪುಗಳಾಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸುತ್ತದೆ. ಕೆಲವು ರೀತಿಯ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಈ ಹಂತವನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳುವ ಅನೇಕ ವಾಣಿಜ್ಯ ಕಿಟ್ಗಳು ಲಭ್ಯವಿವೆ. ನಂತರ ಸಿಡಿಎನ್ಎ ಅನುಕ್ರಮಗಳ ಸಮೂಹವನ್ನು ವರ್ಧಿಸಲು ಪಿಸಿಆರ್ ಅನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅನನ್ಯ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಟ್ಯಾಗ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾದ ಪ್ರೈಮರ್ಗಳನ್ನು ಈ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಪೂಲ್ಡ್ ಲೈಬ್ರರಿ ಮಲ್ಟಿಪ್ಲೆಕ್ಸ್ ಅನುಕ್ರಮದಲ್ಲಿ ಐಡಿ ಟ್ಯಾಗ್ಗಳನ್ನು ರಚಿಸಲು ಬಳಸಬಹುದು. ಅನುಕ್ರಮ ನಿಜವಾದ ಆರ್. ಎನ್. ಎ ಅನುಕ್ರಮವು ಬಳಸಿದ ವೇದಿಕೆಯನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಬದಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮುಂದಿನ ಪೀಳಿಗೆಯ ಮೂರು ಸಾಮಾನ್ಯ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ಪ್ಲಾಟ್ಫಾರ್ಮ್ಗಳೆಂದರೆ 454 ಲೈಫ್ ಸೈನ್ಸಸ್ ಪ್ಲಾಟ್ಫಾರ್ಮ್ನಲ್ಲಿ ಪೈರೋಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್, ಇಲ್ಯೂಮಿನಾ (ಕಂಪನಿ) ಪ್ಲಾಟ್ಫಾರ್ಮ್ನಲ್ಲಿ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಆಧಾರಿತ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸ್-ಬೈ-ಸಿಂಥೆಸಿಸ್ ಅಥವಾ ಎ. ಬಿ. ಐ ಸಾಲಿಡ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ಪ್ಲಾಟ್ಫಾರ್ಮ್ನಲ್ಲಿ ಬಂಧನದ ಮೂಲಕ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್. ದತ್ತಾಂಶ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಕೇಂದ್ರದಿಂದ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ-ಸೆಕ್ ದತ್ತಾಂಶ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು 1) ಅನುಕ್ರಮ ರೀಡ್ಗಳಿಂದ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಸಮೃದ್ಧಿಯ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಪಡೆಯುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ, 2) ಹೊಸ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ಮತ್ತು ನಂತರ 3) ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಿದ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಮತ್ತು ಅವುಗಳ 4) ಸಂಬಂಧಿತ ಎಂಆರ್ಎನ್ಎ ಜೀನ್ ಗುರಿಗಳನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುತ್ತದೆ. ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಜೋಡಣೆ ಮತ್ತು ಸಮೃದ್ಧ ಪ್ರಮಾಣವು ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳನ್ನು ಕೆಲವು ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರಕಾರಗಳು, ಅಂಗಾಂಶಗಳು, ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಹಂತಗಳು ಅಥವಾ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ನಂತಹ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ರೋಗದ ಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಆದ್ಯತೆಯಾಗಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಬಹುದು. ಡೀಪ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ (ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ-ಸೆಕ್) ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಮಾದರಿಯು ಲಕ್ಷಾಂತರ ರೀಡ್ಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವುದರಿಂದ, ಇದು ನಮಗೆ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳನ್ನು ಪ್ರೊಫೈಲ್ ಮಾಡಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ; ಅವುಗಳ ಸಂಪೂರ್ಣ ಸಮೃದ್ಧಿಯನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸುವ ಮೂಲಕ, ಅವುಗಳ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು (ಐಸೋಮಿರ್ಗಳು ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ) ಗಮನಿಸಿ, ಅನುಕ್ರಮ ರೀಡ್ಗಳ ಸರಾಸರಿ ಉದ್ದವು ಸರಾಸರಿ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ (17-25 ಎನ್ಟಿ) ಗಿಂತ ಉದ್ದವಾಗಿದೆ, ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಯ 3 'ಮತ್ತು 5' ತುದಿಗಳನ್ನು ಅದೇ ರೀಡ್ನಲ್ಲಿ ಕಾಣಬಹುದು. ಹಲವಾರು ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಹೇರಳವಾದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ ಕ್ರಮಾವಳಿಗಳಿವೆ. ಅವುಗಳ ಸಾಮಾನ್ಯ ಹಂತಗಳು ಈ ಕೆಳಗಿನಂತಿವೆಃ ಅನುಕ್ರಮಗೊಳಿಸಿದ ನಂತರ, ಕಚ್ಚಾ ಅನುಕ್ರಮ ರೀಡ್ಗಳನ್ನು ಗುಣಮಟ್ಟದ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅಡಾಪ್ಟರ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸ್ಗಳನ್ನು ಸಹ ಕಚ್ಚಾ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸ್ ರೀಡ್ಗಳಿಂದ ಕತ್ತರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಫಲಿತಾಂಶದ ರೀಡ್ಗಳನ್ನು ನಂತರ ಫಾಸ್ಟಾ ಫೈಲ್ ಆಗಿ ಫಾರ್ಮ್ಯಾಟ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿ ವಿಶಿಷ್ಟ ಟ್ಯಾಗ್ಗೆ ನಕಲು ಸಂಖ್ಯೆ ಮತ್ತು ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ದಾಖಲಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಇ. ಕೋಲಿ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸಬಹುದಾದ ಅನುಕ್ರಮಗಳನ್ನು ಇ. ಕೋಲಿ ದತ್ತಸಂಚಯದ ವಿರುದ್ಧ ಬ್ಲಾಸ್ಟ್ ಹುಡುಕಾಟದಿಂದ ಗುರುತಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅಪೂರ್ಣವಾದ DICER ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗಲು, 3 'ತುದಿಯಲ್ಲಿ 6' nt ಓವರ್ಹ್ಯಾಂಗ್ ಮತ್ತು 5 'ತುದಿಯಲ್ಲಿ 3' nt ಅನ್ನು ಅನುಮತಿಸಲಾಗಿದೆ. ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ದತ್ತಸಂಚಯಕ್ಕೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗದ ರೀಡ್ಗಳನ್ನು ನಂತರ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಸಾಗಿಸಬಹುದಾದ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳನ್ನು ಅಥವಾ ಆರ್ಎನ್ಎ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ಮೂಲಕ ಹೋದವುಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಪೂರ್ವಗಾಮಿಗಳಿಗೆ ಸಡಿಲವಾಗಿ ಜೋಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪ್ರತಿ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಯ ಓದುವ ಎಣಿಕೆಗಳನ್ನು ನಂತರ ಪ್ರತಿ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಯ ಸಮೃದ್ಧಿಯನ್ನು ವರದಿ ಮಾಡಲು ಒಟ್ಟು ಮ್ಯಾಪ್ ಮಾಡಲಾದ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳಿಗೆ ಸಾಮಾನ್ಯೀಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ನಾವೆಲ್ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಡಿಸ್ಕವರಿ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ-ಸೆಕ್ನ ಮತ್ತೊಂದು ಪ್ರಯೋಜನವೆಂದರೆ ಇದು ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೊಫೈಲಿಂಗ್ ವಿಧಾನಗಳಿಂದ ತಪ್ಪಿಸಿಕೊಂಡಿರಬಹುದಾದ ನಾವೆಲ್ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳ ಆವಿಷ್ಕಾರಕ್ಕೆ ಅವಕಾಶ ನೀಡುತ್ತದೆ. ಹಲವಾರು ಹೊಸ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಆವಿಷ್ಕಾರ ಕ್ರಮಾವಳಿಗಳಿವೆ. ಅವುಗಳ ಸಾಮಾನ್ಯ ಹಂತಗಳು ಈ ಕೆಳಗಿನಂತಿವೆಃ ತಿಳಿದಿರುವ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಅನುಕ್ರಮಗಳಿಗೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗದ ರೀಡ್ಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಿರಿ ಮತ್ತು ಅವುಗಳನ್ನು ಜೀನೋಮ್ಗೆ ಮ್ಯಾಪ್ ಮಾಡಿ. ಆರ್ಎನ್ಎ ಮಡಿಸುವ ವಿಧಾನ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಅನುಕ್ರಮಗಳಿಗೆ ನಿಖರವಾದ ಹೊಂದಾಣಿಕೆ ಕಂಡುಬಂದಿದೆ, ಎರಡೂ ಬದಿಗಳಲ್ಲಿ ~ 100 ಬಿಪಿ ಪಾರ್ಶ್ವದ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ ಜೀನೋಮಿಕ್ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಪಡೆಯಿರಿ ಮತ್ತು ವಿಯೆನ್ನಾ ಪ್ಯಾಕೇಜ್ನಂತಹ ಆರ್ಎನ್ಎ ಮಡಿಸುವ ಸಾಫ್ಟ್ವೇರ್ ಮೂಲಕ ಆರ್ಎನ್ಎ ಅನ್ನು ಚಲಾಯಿಸಿ. ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಹೇರ್ಪಿನ್ನ ಒಂದು ತೋಳಿನ ಮೇಲೆ ಇರುವ ಮತ್ತು ಕನಿಷ್ಠ 25 ಕೆ. ಸಿ. ಎಲ್/ಮೋಲ್ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಮುಕ್ತ ಶಕ್ತಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಮಡಿಸಿದ ಅನುಕ್ರಮಗಳನ್ನು ಪುಟೇಟಿವ್ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಎಂದು ಶಾರ್ಟ್ಲಿಸ್ಟ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಸಂಭಾವ್ಯ ಪೂರ್ವಗಾಮಿ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಮಾತ್ರ ಸೇರಿಸಲು ಶಾರ್ಟ್ಲಿಸ್ಟ್ ಮಾಡಲಾದ ಅನುಕ್ರಮಗಳನ್ನು ಕತ್ತರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ಪೂರ್ವಗಾಮಿಗಳನ್ನು ನೆರೆಯ ಅನುಕ್ರಮಗಳಿಂದ ಕೃತಕವಾಗಿ ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಮರುಬಳಕೆ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮೈಆರ್ಎನ್ಎ ಅನುಕ್ರಮವು ಹೇರ್ಪಿನ್ನ ಒಂದು ತೋಳಿನೊಳಗೆ ಬಿದ್ದರೆ ಮತ್ತು ಜಾತಿಗಳ ನಡುವೆ ಹೆಚ್ಚು ಸಂರಕ್ಷಿಸಲ್ಪಟ್ಟರೆ, ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಮಡಿಸಿದ ಅನುಕ್ರಮಗಳನ್ನು ಹೊಸ ಮೈಆರ್ಎನ್ಎಗಳು ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಸ್ಟಾರ್ ಸ್ಟ್ರ್ಯಾಂಡ್ ಎಕ್ಸ್ಪ್ರೆಶನ್ ಮೆಥಡ್ (ಮಿಆರ್ಡೀಪ್) ನಾವೆಲ್ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಅನುಕ್ರಮಗಳನ್ನು ಡಿಐಸಿಇಆರ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಿಂದಾಗಿ ಅವು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುವ ವಿಶಿಷ್ಟ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಾದರಿಯ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಗುರುತಿಸಲಾಗುತ್ತದೆಃ ಸ್ಟಾರ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಮತ್ತು ಲೂಪ್ ಅನುಕ್ರಮಗಳ ಮೇಲೆ ಪ್ರಬುದ್ಧ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ. ಡಿಫರೆನ್ಷಿಯಲ್ ಎಕ್ಸ್ಪ್ರೆಶನ್ ಅನಾಲಿಸಿಸ್ ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿಗೆ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳ ಸಮೃದ್ಧಿಯನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಿದ ನಂತರ, ಅವುಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಮಾದರಿಗಳ ನಡುವೆ ಹೋಲಿಸಬಹುದು. ನಂತರ ಆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸಮಯದ ಬಿಂದುಗಳಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ರೋಗದ ಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಆದ್ಯತೆಯಾಗಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗುವ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಯನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುತ್ತದೆ. ಮಾದರಿಗಳ ನಡುವೆ ಮ್ಯಾಪ್ ಮಾಡಲಾದ ರೀಡ್ಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯಗೊಳಿಸಿದ ನಂತರ, ಭೇದಾತ್ಮಕ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಹಲವಾರು ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು (ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಪ್ರೊಫೈಲಿಂಗ್ನಲ್ಲಿ ಬಳಸುವಂತಹವು) ಬಳಸಬಹುದು. ಸಾರ್ವಜನಿಕ ದತ್ತಸಂಚಯಗಳು ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಗುರಿಗಳ ಮುನ್ಸೂಚನೆಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತವೆ. ಆದರೆ ನಿಜವಾದ ಧನಾತ್ಮಕ ಮುನ್ಸೂಚನೆಗಳನ್ನು ಸುಳ್ಳು ಧನಾತ್ಮಕ ಮುನ್ಸೂಚನೆಗಳಿಂದ ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು, ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ-ಸೆಕ್ ಡೇಟಾವನ್ನು ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಃ ಎಂಆರ್ಎನ್ಎ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಜೋಡಿಗಳನ್ನು ವೀಕ್ಷಿಸಲು ಎಂಆರ್ಎನ್ಎ-ಸೆಕ್ ಡೇಟಾದೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಬಹುದು. ಆರ್. ಎನ್. ಎ. 22, ಟಾರ್ಗೆಟ್ಸ್ಕ್ಯಾನ್, ಮಿರಾಂಡಾ ಮತ್ತು ಪಿಕ್ಟಾರ್ ಈ ಉದ್ದೇಶಕ್ಕಾಗಿ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾದ ತಂತ್ರಾಂಶಗಳಾಗಿವೆ. ಮುನ್ಸೂಚನೆ ತಂತ್ರಾಂಶದ ಪಟ್ಟಿಯನ್ನು ಇಲ್ಲಿ ನೀಡಲಾಗಿದೆ. ಸಾಮಾನ್ಯ ಹಂತಗಳೆಂದರೆಃ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಃ ಎಂಆರ್ಎನ್ಎ ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಜೋಡಿಗಳನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಿ, ಎಂಆರ್ಎನ್ಎ ಅನುಕ್ರಮದ 3 '-ಯುಟಿಆರ್ನಲ್ಲಿ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಅನುಕ್ರಮಗಳ ನಡುವಿನ ಪೂರಕತೆಯನ್ನು ಗುರುತಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಸಂರಕ್ಷಣೆಯ ಮಟ್ಟವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಿಃ ಜಾತಿಗಳಾದ್ಯಂತ ಎಮ್ಆರ್ಎನ್ಎ ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಜೋಡಿಗಳು. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ಹೆಚ್ಚು ಹೆಚ್ಚು ಬಂಧಿಸುವ ಜೋಡಿಗಳು ಭವಿಷ್ಯವಾಣಿಯ ತಪ್ಪು ಧನಾತ್ಮಕ ಅಂಶಗಳಾಗುವ ಸಾಧ್ಯತೆ ಕಡಿಮೆ. ಎಮ್ಆರ್ಎನ್ಎ-ಸೆಕ್ ಅಥವಾ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ದತ್ತಾಂಶದಲ್ಲಿ ಮೈಆರ್ಎನ್ಎ ಗುರಿಯ ಪುರಾವೆಗಾಗಿ ಗಮನಿಸಿಃ ಮೈಆರ್ಎನ್ಎ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯು ಹೆಚ್ಚಿರುವಲ್ಲಿ, ಅದರ ಗುರಿ ಜೀನ್ನ ಜೀನ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯು ಕಡಿಮೆಯಾಗಿರಬೇಕು. ಅನೇಕ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳು ತಮ್ಮ ಎಂಆರ್ಎನ್ಎ ಗುರಿಗಳ ಸೀಳುಗಳನ್ನು ನಿರ್ದೇಶಿಸಲು ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತವೆ; ಇದು ಸಸ್ಯಗಳಲ್ಲಿ ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಸತ್ಯವಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಆದ್ದರಿಂದ ಮೀಆರ್ಎನ್ಎಗಳ ಈ ಗುಣಲಕ್ಷಣದ ಲಾಭವನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಹೆಚ್ಚಿನ-ಥ್ರೋಪುಟ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ. ಈ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಡಿಗ್ರ್ಯಾಡೋಮ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ಅಥವಾ PARE ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಎಂ. ಆರ್. ಎನ್. ಎ. ಗಳಲ್ಲಿ ಗುರಿ ಸೀಳುಗಳ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನವನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಜೀನ್-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರೈಮರ್ನೊಂದಿಗೆ ಸಿ. ಡಿ. ಎನ್. ಎ. ಎಂಡ್ಸ್ನ 5 'ಕ್ಷಿಪ್ರ ವರ್ಧನೆಯ ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಆವೃತ್ತಿಯನ್ನು ಬಳಸಿ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ಗಳು ನೊವೆಲ್ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಯ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ-ಸೆಕ್ನ ಗುರುತಿಸುವಿಕೆಯು ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಪ್ರೊಫೈಲಿಂಗ್ ವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ ಹಿಂದೆ ಬಿಟ್ಟುಹೋದ ಹೊಸ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿದೆ. ಭ್ರೂಣದ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳು, ಕೋಳಿ ಭ್ರೂಣಗಳು, ತೀವ್ರವಾದ ಲಿಂಫೋಬ್ಲಾಸ್ಟಿಕ್ ಲ್ಯುಕೇಮಿಯಾ, ಹರಡುವ ದೊಡ್ಡ ಬಿ-ಸೆಲ್ ಲಿಂಫೋಮಾ ಮತ್ತು ಬಿ-ಕೋಶಗಳು, ತೀವ್ರವಾದ ಮೈಲೋಯ್ಡ್ ಲ್ಯುಕೇಮಿಯಾ ಮತ್ತು ಶ್ವಾಸಕೋಶದ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ಗಳು ಅಂತಹ ಸಂಶೋಧನೆಗಳ ಉದಾಹರಣೆಗಳಾಗಿವೆ. ರೋಗದ ಜೈವಿಕ ಗುರುತುಗಳು ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಆರ್. ಎನ್. ಎ. ಗಳು ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆ, ಪ್ರಸರಣ ಮತ್ತು ವಿಭಿನ್ನತೆಯಂತಹ ಬಹುತೇಕ ಎಲ್ಲಾ ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳ ಪ್ರಮುಖ ನಿಯಂತ್ರಕಗಳಾಗಿವೆ. ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ, ಆಂಕೋ-ಮತ್ತು ಟ್ಯೂಮರ್ ನಿರೋಧಕ ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ ನಿಯಂತ್ರಣದ ಮೂಲಕ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ನ ವಿವಿಧ ಅಂಶಗಳಲ್ಲಿ ತೊಡಗಿಕೊಂಡಿರುವುದು ಅನಿರೀಕ್ಷಿತವೇನಲ್ಲ. ಹೆಚ್ಚಿನ-ಥ್ರೋಪುಟ್ ಪ್ರೊಫೈಲಿಂಗ್ ವಿಧಾನಗಳ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯೊಂದಿಗೆ, ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳನ್ನು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ವರ್ಗೀಕರಣ, ಚಿಕಿತ್ಸೆಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮತ್ತು ಮುನ್ನರಿವಿನ ಬಯೋಮಾರ್ಕರ್ಗಳಾಗಿ ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ. ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳು ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವುದರಿಂದ ಅವು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಅಸ್ವಸ್ಥತೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುವ ಪ್ರಮುಖ ನಿಯಂತ್ರಕ ಜಾಲಗಳಲ್ಲಿನ ಗೊಂದಲಗಳನ್ನು ಸಹ ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಬಹುದು. ಜೈವಿಕ ಗುರುತುಗಳು ಮತ್ತು ರೋಗದ ಮುನ್ಸೂಚಕಗಳಾಗಿ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳ ಹಲವಾರು ಅನ್ವಯಗಳನ್ನು ಕೆಳಗೆ ನೀಡಲಾಗಿದೆ. α ಇದು ಈ ಮಾರಣಾಂತಿಕತೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳ ಸಮಗ್ರ ಪಟ್ಟಿಯಲ್ಲ. ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಪ್ರೊಫೈಲಿಂಗ್ನ ಇತರ ವಿಧಾನಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಕೆ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಪ್ರೊಫೈಲಿಂಗ್ನ ಇತರ ವಿಧಾನಗಳಿಗಿಂತ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ-ಸೆಕ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುವ ಅನಾನುಕೂಲಗಳೆಂದರೆ ಇದು ಹೆಚ್ಚು ದುಬಾರಿಯಾಗಿದೆ, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಒಟ್ಟು ಆರ್ಎನ್ಎಯ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ, ವ್ಯಾಪಕ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಮೈಕ್ರೋಅರೇ ಮತ್ತು ಕ್ಯುಪಿಸಿಆರ್ ವಿಧಾನಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಸಮಯ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಅಲ್ಲದೆ, ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ-ಸೆಕ್ ಗ್ರಂಥಾಲಯ ತಯಾರಿಕಾ ವಿಧಾನಗಳು ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಪೂರಕದ ವ್ಯವಸ್ಥಿತ ಆದ್ಯತೆಯ ಪ್ರಾತಿನಿಧ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ ಎಂದು ತೋರುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಇದು ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಸಮೃದ್ಧಿಯ ನಿಖರವಾದ ನಿರ್ಣಯವನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ. ಅದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ವಿಧಾನವು ಹೈಬ್ರಿಡೈಸೇಶನ್ ಸ್ವತಂತ್ರವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಆದ್ದರಿಂದ ಆದ್ಯತೆಯ ಅನುಕ್ರಮ ಮಾಹಿತಿಯ ಅಗತ್ಯವಿರುವುದಿಲ್ಲ. ಈ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿ, ನಾವೆಲ್ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳು ಮತ್ತು ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಐಸೋಫಾರ್ಮ್ಗಳ (ಐಸೊಮಿರ್ಸ್) ಅನುಕ್ರಮಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಬಹುದು, ಅನುಕ್ರಮವಾಗಿ ಹೋಲುವ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಪಾಯಿಂಟ್ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಬಹುದು. ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ ಪ್ರೊಫೈಲಿಂಗ್ ಉಲ್ಲೇಖಗಳ ಡಿಎನ್ಎ ಅನುಕ್ರಮದ ವೇದಿಕೆ ಹೋಲಿಕೆ