SOS chromotest
ರಾಸಾಯನಿಕ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಜೀನೋಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲು ಎಸ್. ಓ. ಎಸ್. ಕ್ರೋಮೊಟೆಸ್ಟ್ ಒಂದು ಜೈವಿಕ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಾಗಿದೆ. ಈ ಪರೀಕ್ಷೆಯು ವರ್ಣಮಾಪಕ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಾಗಿದ್ದು, ಇದು β-ಗ್ಯಾಲಕ್ಟೋಸಿಡೇಸ್ನ ರಚನಾತ್ಮಕ ಜೀನ್ನೊಂದಿಗೆ ಸಮ್ಮಿಳನದ ಮೂಲಕ ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೋಲಿಯಲ್ಲಿನ ಜೀನೋಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಏಜೆಂಟ್ಗಳಿಂದ ಪ್ರೇರಿತವಾದ ಜೀನ್ಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಅಳೆಯುತ್ತದೆ. ಪರೀಕ್ಷೆಯ ಮಾದರಿಗಳ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯೊಂದಿಗೆ 96-ಬಾವಿಯ ಮೈಕ್ರೋಪ್ಲೇಟ್ನ ಕಾಲಮ್ಗಳಲ್ಲಿ ಕೆಲವು ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಜೀನೋಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಗಾಗಿ ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಅಮೆಸ್ ಪರೀಕ್ಷಾ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗೆ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪೂರಕವಾಗಿ ಅಥವಾ ಪರ್ಯಾಯವಾಗಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಅಗರ್ ಪ್ಲೇಟ್ಗಳ ಮೇಲೆ ಬೆಳೆಯುವ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನೈಸರ್ಗಿಕ ರೂಪಾಂತರದ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಸಂಭಾವ್ಯವಾಗಿ ಮ್ಯುಟಜೆನಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು ಅಥವಾ ಮಾದರಿಗಳಿಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಳ್ಳುವ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ರೂಪಾಂತರದ ದರಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸುತ್ತದೆ. ಎಸ್. ಓ. ಎಸ್. ಕ್ರೋಮೊಟೆಸ್ಟ್ ಅನ್ನು ಅಮೆಸ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯಂತಹ ಸ್ಥಾಪಿತ ವಿಧಾನಗಳಿಗೆ ನಿಖರತೆ ಮತ್ತು ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯಲ್ಲಿ ಹೋಲಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಇದು ಜೀನೋಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ಉಪಯುಕ್ತ ಸಾಧನವಾಗಿದೆ, ಇದು ಮಾನವರಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಸಿನೋಜೆನಿಕ್ ಎಂದು ಸಾಬೀತುಪಡಿಸಬಹುದು, ಮತ್ತಷ್ಟು ಆಳವಾದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ ರಾಸಾಯನಿಕಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು. ಇತರ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಜೆಂಟೊಕ್ಸಿಸಿಟಿ ಮತ್ತು ಮ್ಯುಟಜೆನಿಸಿಟಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳಂತೆ, ಚಟುವಟಿಕೆಗೆ ಚಯಾಪಚಯ ಕ್ರಿಯೆಯ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಎಸ್9 ಮೈಕ್ರೋಸೊಮಲ್ ಇಲಿ ಯಕೃತ್ತಿನ ಸಾರವನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ ತನಿಖೆ ಮಾಡಬಹುದು. ಕಾರ್ಯವಿಧಾನ ಎಸ್. ಓ. ಎಸ್. ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯು ಜೀನೋಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳಿಗೆ ಇ. ಕೋಲಿಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರ ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಇದು ವ್ಯಾಪಕ ಶ್ರೇಣಿಯ ರಾಸಾಯನಿಕ ಏಜೆಂಟ್ಗಳಿಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ಡಿಎನ್ಎ ಹಾನಿಯ ಆರಂಭಿಕ ಸಂಕೇತವಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ. ಎಸ್ಓಎಸ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಎರಡು ವಂಶವಾಹಿಗಳು ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರವಹಿಸುತ್ತವೆಃ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿನ ಎಲ್ಲಾ ವಂಶವಾಹಿಗಳಿಗೆ ಲೆಕ್ಸ್ಎ ಒಂದು ನಿರೋಧಕವನ್ನು ಸಂಕೇತಿಸುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಎಸ್ಓಎಸ್ ಪ್ರಚೋದಕ ಸಂಕೇತದಿಂದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಂಡ ನಂತರ ಲೆಕ್ಸ್ಎ ನಿರೋಧಕವನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುವ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ರೆಕ್ಎ ಸಂಕೇತಿಸುತ್ತದೆ (ಈ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ ಜೆನೋಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತದ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಿಂದ ಉಂಟಾಗುತ್ತದೆ). ಎಸ್ಓಎಸ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ನಿಖರವಾದ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ಇನ್ನೂ ತಿಳಿದಿಲ್ಲವಾದರೂ, ಡಿಎನ್ಎ ಗಾಯಗಳು ಡಿಎನ್ಎ ಪುನರಾವರ್ತನೆಯನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸಿದಾಗ ಅಥವಾ ನಿಲ್ಲಿಸಿದಾಗ ಇದು ಪ್ರಚೋದಿಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ. .. ವಿವಿಧ ಅಂತಿಮ-ಬಿಂದುಗಳು ಎಸ್ಓಎಸ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಸಂಭವನೀಯ ಸೂಚಕಗಳಾಗಿವೆ; ರೆಕಾ ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆ, ಲೆಕ್ಸ್ಎ ರಿಪ್ರೆಸರ್ನ ಸೀಳು, ಯಾವುದೇ ಎಸ್ಓಎಸ್ ವಂಶವಾಹಿಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಇತ್ಯಾದಿ. ಸರಳವಾದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾದ ಇ. ಕೋಲಿ β-ಗ್ಯಾಲಕ್ಟೋಸಿಡೇಸ್ನ ರಚನಾತ್ಮಕ ವಂಶವಾಹಿಯಾದ ಲ್ಯಾಕ್ಜಡ್ನೊಂದಿಗೆ ಸಮ್ಮಿಳನದ ಮೂಲಕ ಎಸ್ಓಎಸ್ ವಂಶವಾಹಿಯ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡುವುದು. ಎಸ್. ಓ. ಎಸ್. ಕ್ರೋಮೋಟೆಸ್ಟ್ ಪರೀಕ್ಷಿಸಬೇಕಾದ ರಾಸಾಯನಿಕದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಇ. ಕೋಲಿಯನ್ನು ಕಾವುಕೊಡುವುದನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಗೆ ಸಮಯವನ್ನು ಅನುಮತಿಸಿದ ನಂತರ, β-ಗ್ಯಾಲಕ್ಟೋಸಿಡೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಸರಳ ವರ್ಣಮಾಪಕ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅವನತಿಯ ನಂತರ ಬಣ್ಣದ ಸಂಯುಕ್ತವನ್ನು ನೀಡುವ ಲ್ಯಾಕ್ಟೋಸ್ ಅನಾಲಾಗ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ, ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿ ಸುಲಭವಾಗಿ ಗಮನಿಸಬಹುದಾದ ಅಥವಾ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಬಹುದಾದ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ಮೆಟ್ರಿಕ್ ಆಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದ ರಾಸಾಯನಿಕವು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ತಡೆಯುವುದರಿಂದ, ಇದು ಬಿ-ಗ್ಯಾಲಕ್ಟೋಸಿಡೇಸ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಅಂದಾಜು ಮಾಡಲು ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ, ಜೀವಕೋಶಗಳ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಗೆ ಡೇಟಾವನ್ನು ಅಳೆಯುವ ಸಲುವಾಗಿ ಕ್ಷಾರೀಯ ಫಾಸ್ಫೇಟೇಸ್ ಅನ್ನು β-ಗ್ಯಾಲಕ್ಟೋಸಿಡೇಸ್ನೊಂದಿಗೆ ಏಕಕಾಲದಲ್ಲಿ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಹಲವಾರು ಗಂಟೆಗಳಲ್ಲಿ ಸುಲಭವಾಗಿ ಪೂರ್ಣಗೊಳಿಸಬಹುದು. ಮೈಕ್ರೋ-ಪ್ಲೇಟ್ ರೀಡರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುತ್ತಿದ್ದರೆ, ಪರೀಕ್ಷೆಯು ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕವಾಗಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಡೋಸ್-ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವಕ್ರಾಕೃತಿಗಳು ಆರಂಭಿಕ ರೇಖೀಯ ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ. ಈ ರೇಖೀಯ ಪ್ರದೇಶದ ಇಳಿಜಾರು ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಸಂಯುಕ್ತದ ಏಕೈಕ ನಿಯತಾಂಕವಾದ ಎಸ್ಓಎಸ್-ಇಂಡ್ಯೂಸಿಂಗ್ ಪೊಟೆನ್ಸಿ (ಎಸ್ಒಎಸ್ಐಪಿ) ಯೊಂದಿಗೆ ನಿಸ್ಸಂದಿಗ್ಧವಾದ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಸಂಯುಕ್ತದ ಪ್ರಚೋದಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಿಂಬಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ಉದ್ದೇಶಗಳಿಗಾಗಿ ಗುಣಾತ್ಮಕ (ಬಣ್ಣದ ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ನ ಗೋಚರ ವೀಕ್ಷಣೆ) ಅಥವಾ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಸ್ವೀಕರಿಸಲಾದ ಮಾಪನಗಳ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರಕ್ಕಾಗಿ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಮಾಪನ (ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೊಮೆಟ್ರಿ) ಎರಡನ್ನೂ ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ. ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ, ಒಂದು ಸಂಯುಕ್ತದ ಡೋಸ್-ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು (ಬೀಟಾ-ಗ್ಯಾಲಕ್ಟೋಸಿಡೇಸ್ ಉತ್ಪಾದನೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಬಣ್ಣದ ಉತ್ಪಾದನೆ) ರೂಪಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಆರಂಭಿಕ ರೇಖೀಯ ಪ್ರದೇಶದ ಇಳಿಜಾರನ್ನು ಸಾರ್ವತ್ರಿಕ ನಿಯತಾಂಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಎಸ್ಓಎಸ್-ಪ್ರಚೋದಕ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ (ಎಸ್ಓಎಸ್ಐಪಿ), ಇದು ಎಸ್ಓಎಸ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪ್ರಚೋದಿಸುವ ಸಂಯುಕ್ತದ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಿಂಬಿಸುತ್ತದೆ (ಬೀಟಾ-ಗ್ಯಾಲಕ್ಟೋಸಿಡೇಸ್ನ ಉತ್ಪಾದನೆ ಮತ್ತು ಲ್ಯಾಕ್ಟೋಸ್ ಅನಲಾಗ್ ವಿಭಜನೆಯ ಮೂಲಕ ಪರೋಕ್ಷವಾಗಿ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ). ವಿಶಿಷ್ಟವಾಗಿ, ಲ್ಯಾಕ್ಟೋಸ್ ಅನಲಾಗ್ ಎಕ್ಸ್-ಗ್ಯಾಲ್ ಆಗಿದೆ, ಇದು ಬೀಟಾ-ಗ್ಯಾಲಕ್ಟೋಸಿಡೇಸ್ನಿಂದ ಬೇರ್ಪಟ್ಟಾಗ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ. ಡೋಸ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಜೀವಕೋಶಗಳ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯಿಂದ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, ಕ್ಷಾರೀಯ ಫಾಸ್ಫೇಟೇಸ್ನ ವಿಭಜನೆಯ ಮೂಲಕ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ (ಇದು ಹಳದಿ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ), ಇದು ಎಸ್ಓಎಸ್ಐಪಿ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರಕ್ಕೆ ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ. ಎಸ್. ಓ. ಎಸ್. ಐ. ಪಿ. ಯು ಸಾಂದ್ರತೆ-ಆಧಾರಿತ ಮೆಟ್ರಿಕ್ ಆಗಿದ್ದರೂ, ಸಾಂದ್ರತೆ ಅಥವಾ ಆಸಕ್ತಿಯ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು ತಿಳಿದಿಲ್ಲದ ಸಂಕೀರ್ಣ ಪರಿಸರ ಮಿಶ್ರಣಗಳಿಗೆ ಅದೇ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು. ಮಧ್ಯಂತರ ಎಸ್ಓಎಸ್-ಇಂಡಕ್ಷನ್ ಫ್ಯಾಕ್ಟರ್ (ಎಸ್ಓಎಸ್ಐಎಫ್) ಲೆಕ್ಕಾಚಾರದ ಮೂಲಕ, ಮಾದರಿಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣಾತ್ಮಕ ಅಳತೆಗಳಿಲ್ಲದೆ ಡೋಸ್-ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ವಿವರಣೆಯನ್ನು ನೀಡುವ ಸಲುವಾಗಿ ಅದೇ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ವಿರುದ್ಧ ಯೋಜಿಸಬಹುದು. ಪ್ರಯೋಜನಗಳು ಎಸ್. ಓ. ಎಸ್. ಕ್ರೋಮೊಟೆಸ್ಟ್ ಅನ್ನು ಜೀನೋಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಗೆ ಅತ್ಯಂತ ಸರಳ ಮತ್ತು ತ್ವರಿತ ಅಲ್ಪಾವಧಿಯ ಪರೀಕ್ಷೆಯೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ. ಇದು ಹಲವಾರು ಕಾರಣಗಳಿಗಾಗಿ ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಅಮೆಸ್ ಪರೀಕ್ಷೆಗೆ ಉಪಯುಕ್ತ ಮತ್ತು ವೆಚ್ಚ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಪೂರಕವಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ. ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, ಅದರ ಸರಳತೆ ಮತ್ತು ವೇಗದಿಂದಾಗಿ, ಎಸ್ಓಎಸ್ ಕ್ರೋಮೊಟೆಸ್ಟ್ ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಸಂಭಾವ್ಯ ಜೀನೋಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳಿಗೆ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು. ಎರಡನೆಯದಾಗಿ, ಇದು ಅಮೆಸ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯಲ್ಲಿ (ಎಸ್ಟ್ರಾಡಿಯೋಲ್, ಬೆಳೆಯುತ್ತಿರುವ ಕಾಳಜಿಯ ಸಂಯುಕ್ತ) ತಪ್ಪು ನಿರಾಕರಣೆಗಳನ್ನು ನೀಡುವ ಜೀನೋಟಾಕ್ಸಿಕ್ ರಾಸಾಯನಿಕಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ. ಮೂರನೆಯದಾಗಿ, ಅಮೆಸ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯಲ್ಲಿ ಸುಳ್ಳು ಧನಾತ್ಮಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ತಾರತಮ್ಯ ಮಾಡಲು ಇದು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ವಿಧಾನವೆಂದು ಸಾಬೀತುಪಡಿಸಬಹುದು. ಉಲ್ಲೇಖಗಳು ಜೈವಿಕ ತಂತ್ರಗಳು ಮತ್ತು ಉಪಕರಣಗಳು ಜೆನೆಟಿಕ್ಸ್ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳು