FLP-FRT recombination
ಜೆನೆಟಿಕ್ಸ್ನಲ್ಲಿ, ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ-ಎಫ್ಆರ್ಟಿ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯು ಸೈಟ್-ನಿರ್ದೇಶಿತ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವಾಗಿದೆ, ಇದನ್ನು ವಿವೊದಲ್ಲಿನ ನಿಯಂತ್ರಿತ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಜೀವಿಗಳ ಡಿಎನ್ಎಯನ್ನು ಕುಶಲತೆಯಿಂದ ನಿರ್ವಹಿಸಲು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಇದು ಕ್ರೀ-ಲಾಕ್ಸ್ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಗೆ ಹೋಲುತ್ತದೆ ಆದರೆ ಬೇಕರ್ನ ಯೀಸ್ಟ್ ಸ್ಯಾಕರೊಮೈಸಿಸ್ ಸೆರೆವಿಸಿಯದ 2 ಮೈಕ್ರೋ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ನಿಂದ ಪಡೆದ ರಿಕಾಂಬಿನೇಸ್ ಫ್ಲಿಪ್ಪೇಸ್ (ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ) ಮೂಲಕ ಸಣ್ಣ ಫ್ಲಿಪ್ಪೇಸ್ ಗುರುತಿಸುವಿಕೆ ಗುರಿ (ಎಫ್ಆರ್ಟಿ) ತಾಣಗಳ ನಡುವಿನ ಅನುಕ್ರಮಗಳ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ. 34 ಬಿಪಿ ಕನಿಷ್ಠ ಎಫ್ಆರ್ಟಿ ಸೈಟ್ ಅನುಕ್ರಮವು 5 '3' ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಇದಕ್ಕಾಗಿ ಫ್ಲಿಪ್ಪೇಸ್ (ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ) 13-ಬಿಪಿ 5 '-ಜಿಎಜಿಟಿಸಿಸಿಟಿಟಿಸಿ-3' ಎರಡೂ ತೋಳುಗಳಿಗೆ 8 ಬಿಪಿ ಸ್ಪೇಸರ್ ಅನ್ನು ಸುತ್ತುವರೆದಿದೆ, ಅಂದರೆ. ಸೈಟ್-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಮರುಸಂಯೋಜನೆ (ಕ್ರಾಸ್ಒವರ್ನ ಪ್ರದೇಶ) ಹಿಮ್ಮುಖ ದಿಕ್ಕಿನಲ್ಲಿ. ಎಫ್ಆರ್ಟಿ-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ಸೀಳು ಅಸಮಪಾರ್ಶ್ವದ 8 ಬಿಪಿ ಕೋರ್ ಪ್ರದೇಶದಿಂದ (5 '3') ಮೇಲ್ಭಾಗದ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ನ ಸ್ವಲ್ಪ ಮುಂದೆ ಮತ್ತು ಕೆಳಗಿನ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ನ ಈ ಅನುಕ್ರಮದ ಹಿಂದೆ ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ. ಹಲವಾರು ರೂಪಾಂತರದ ಎಫ್ಆರ್ಟಿ ತಾಣಗಳು ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿವೆ, ಆದರೆ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಎರಡು ಒಂದೇ ರೀತಿಯ ಎಫ್ಆರ್ಟಿಗಳ ನಡುವೆ ಮಾತ್ರ ಸಂಭವಿಸಬಹುದು ಆದರೆ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಒಂದೇ-ಅಲ್ಲದ ("ಭಿನ್ನ-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ") ಎಫ್ಆರ್ಟಿಗಳ ನಡುವೆ ಸಂಭವಿಸುವುದಿಲ್ಲ. ಯೀಸ್ಟ್ನಲ್ಲಿ, ಈ ಕಿಣ್ವವು ಅಪರೂಪದ ತಪ್ಪು ವಿಭಜನೆಯ ಘಟನೆಗಳಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ 2 ಮೈಕ್ರೋ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ನಕಲು ಸಂಖ್ಯೆಯಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ. ಡಿಎನ್ಎ ಪುನರಾವರ್ತನೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ 2 ಮೈಕ್ರೋ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ನಲ್ಲಿ ಎರಡು ತಲೆಕೆಳಗಾದ ಪುನರಾವರ್ತನೆಗಳ ನಡುವೆ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಇದು ಹಾಗೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಇದು ಒಂದು ಪ್ರತಿಕೃತಿ ಫೋರ್ಕ್ನ ದಿಕ್ಕನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಒಂದೇ ಪ್ರಾರಂಭದಲ್ಲಿ ಅನೇಕ ಸುತ್ತುಗಳ ನಕಲುಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ಎಫ್ಆರ್ಟಿ ಸೈಟ್ ಅನುಕ್ರಮವಾದ ಸೆನೆಕಾಫ್ ಮತ್ತು ಇತರರ ರೂಪಾಂತರಗಳು. (1987) ಎಫ್. ಆರ್. ಟಿ. ಯೊಳಗಿನ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಬದಲಿಗಳು ಎಫ್. ಎಲ್. ಪಿ-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವದ ಮೇಲೆ ಹೇಗೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಿವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ತನಿಖೆ ಮಾಡಿದರು. ಲೇಖಕರು ಒಂದು ಅಥವಾ ಎರಡೂ ಎಫ್ಆರ್ಟಿ ತಾಣಗಳಲ್ಲಿ ಬೇಸ್ ಬದಲಿಗಳನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಿದರು ಮತ್ತು ಸೈಟ್-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಗಳನ್ನು ವೀಕ್ಷಿಸಲು ಅಗತ್ಯವಾದ ಎಫ್ಎಲ್ಪಿಯ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದರು. ಎಫ್ಆರ್ಟಿ ತಾಣದೊಳಗಿನ ಹದಿಮೂರು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿಯೊಂದರ ಮೇಲೆ ಪ್ರತಿ ಬೇಸ್ ಪರ್ಯಾಯವನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು (ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಜಿ ಯಿಂದ ಎ, ಟಿ, ಮತ್ತು ಸಿ). ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, ಎಫ್ಆರ್ಟಿ ಅನುಕ್ರಮದೊಳಗಿನ ಹೆಚ್ಚಿನ ರೂಪಾಂತರಗಳು ಎರಡು ತಾಣಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದರೊಳಗೆ ಮಾತ್ರ ಇದ್ದರೆ ಕನಿಷ್ಠ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತವೆ ಎಂದು ಲೇಖಕರು ತೋರಿಸಿದರು. ಎರಡೂ ತಾಣಗಳಲ್ಲಿ ರೂಪಾಂತರಗಳು ಸಂಭವಿಸಿದರೆ, ಎಫ್ಎಲ್ಪಿಯ ದಕ್ಷತೆಯು ನಾಟಕೀಯವಾಗಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ. ಎರಡನೆಯದಾಗಿ, ಎಫ್ಎಲ್ಪಿಯ ಬಂಧಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಸೈಟ್-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವಕ್ಕೆ ಯಾವ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಗಳು ಅತ್ಯಂತ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿವೆ ಎಂಬುದರ ದತ್ತಾಂಶವನ್ನು ಲೇಖಕರು ಒದಗಿಸಿದ್ದಾರೆ. ಎರಡೂ ಎಫ್ಆರ್ಟಿ ತಾಣಗಳಲ್ಲಿನ ಮೊದಲ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಅನ್ನು ಸೈಟೋಸಿನ್ (ಜಿ ಯಿಂದ ಸಿ) ಗೆ ಬದಲಿಸಿದರೆ, ಮೂರನೇ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಅನ್ನು ಥೈಮಿನ್ (ಎ ಯಿಂದ ಟಿ) ಗೆ ಬದಲಿಸಿದರೆ, ಅಥವಾ ಏಳನೇ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಅನ್ನು ಅಡೆನೊಸಿನ್ (ಜಿ ಯಿಂದ ಎ) ಗೆ ಬದಲಿಸಿದರೆ, ನಂತರ ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ಸೈಟ್-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವವು 100 ಪಟ್ಟು ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ. ಮೇಲೆ ತಿಳಿಸಲಾದ ಯಾವುದೇ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಗಳ ಬೇಸ್ ಪರ್ಯಾಯವು ಕೇವಲ ಒಂದು ಎಫ್ಆರ್ಟಿ ಸೈಟ್ನಲ್ಲಿ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವವನ್ನು ಕ್ರಮವಾಗಿ ಹತ್ತು ಪಟ್ಟು, ಹತ್ತು ಪಟ್ಟು ಮತ್ತು ಐದು ಪಟ್ಟು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಕಾರಣವಾಯಿತು. ಕ್ಯಾಪಿಟಲೈಸ್ಡ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಗಳಲ್ಲಿನ ಬೇಸ್ ಸಬ್ಸ್ಟಿಟ್ಯೂಷನ್ಗಳು ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ-ಮಧ್ಯಸ್ಥ ಸೈಟ್-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಕಡಿತಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾದವು (ವೈಲ್ಡ್ಟೈಪ್ ಎಕ್ಸ್ ಮ್ಯುಟೆಂಟ್ ಮತ್ತು ಮ್ಯಟೆಂಟ್ ಎಕ್ಸ್ ಮ್ಯಟೆಂಟ್): 5 '3' ಲಭ್ಯವಿರುವ ಅನೇಕ ರಚನೆಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ತೋಳಿನ ಅನುಕ್ರಮಗಳು (5 '-3') ಅಪ್ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಅಂಶದಿಂದ ದೂರದಲ್ಲಿರುವ ಒಂದು ಬೇಸ್ ಜೋಡಿ ಮತ್ತು ಅದೇ ದೃಷ್ಟಿಕೋನದಲ್ಲಿ ಸೇರಿವೆಃ 5 '3' ಈ ವಿಭಾಗವನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲು ವಿತರಿಸಬಹುದು ಆದರೆ ಪುನಸ್ಸಂಯೋಜನೆ-ಮಧ್ಯಸ್ಥ ಕ್ಯಾಸೆಟ್ ವಿನಿಮಯವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ ಏಕೀಕರಣಕ್ಕೆ ಅವಶ್ಯಕವಾಗಿದೆ. ಏಕೆಂದರೆ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಆಯ್ದ ಅಂಗಕ್ಕೆ ಗುರಿಯಾಗಿಸಬಹುದು, ಅಥವಾ ಕಡಿಮೆ ಮಟ್ಟದ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಜೀವಕೋಶಗಳ ಉಪಗುಂಪಿನ ಡಿಎನ್ಎಯನ್ನು ಸ್ಥಿರವಾಗಿ ಬದಲಾಯಿಸಲು ಬಳಸಬಹುದು, ಬಹುಕೋಶೀಯ ಜೀವಿಗಳಲ್ಲಿ ಆನುವಂಶಿಕ ಮೊಸಾಯಿಕ್ಗಳನ್ನು ನಿರ್ಮಿಸಲು ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ-ಎಫ್ಆರ್ಟಿ ಅನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು. ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪ್ರಾಣಿಗಳು ಇತರ ಅಂಗಗಳಲ್ಲಿ ಈ ವಂಶವಾಹಿಯ ನಷ್ಟದಿಂದ ಬದುಕುಳಿಯದಿದ್ದರೂ ಸಹ, ಈ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, ಜೀನ್ನ ನಷ್ಟ ಅಥವಾ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಆಸಕ್ತಿಯ ಉದ್ದೇಶಿತ ಅಂಗದಲ್ಲಿ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಬಹುದು (ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ನಿಯಂತ್ರಣ). ಬೆಳವಣಿಗೆಯಲ್ಲಿ ತಡವಾಗಿ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರಚೋದಿಸಲು ಪ್ರಚೋದಕ ಪ್ರವರ್ತಕವನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೂಲಕ ಜೀನ್ ಅನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುವ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಕಾಲಾನಂತರದಲ್ಲಿ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಬಹುದು (ತಾತ್ಕಾಲಿಕ ನಿಯಂತ್ರಣ)-ಇದು ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ. ಎಫ್ಎಲ್ಪಿಯ ಜೀವರಾಸಾಯನಿಕ ರಚನೆ ಮತ್ತು ಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನ ಜೀವರಾಸಾಯನಿಕವಾಗಿ ಸಂಬಂಧಿತ ರಚನೆ ಮತ್ತು ಸಕ್ರಿಯ ತಾಣ ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ ಪ್ರೋಟೀನ್, ಕ್ರೀನಂತೆಯೇ, ಟೈರೋಸಿನ್ ಕುಟುಂಬದ ಸೈಟ್-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ರಿಕಾಂಬಿನೇಸ್ ಆಗಿದೆ. ಈ ರಿಕಾಂಬಿನೇಸ್ಗಳ ಕುಟುಂಬವು ಡಿಎನ್ಎಯ ಎರಡು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಎಳೆಗಳ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುವ ಒಂದು ವಿಧದ ಐಬಿ ಟೊಪೊಯಿಸೊಮೆರೇಸ್ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದ ಮೂಲಕ ತನ್ನ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ. ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಎರಡು-ಹಂತದ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ಮೂಲಕ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಆರಂಭಿಕ ಹಂತವು ಹಾಲಿಡೇ ಜಂಕ್ಷನ್ ಮಧ್ಯಂತರದ ಸೃಷ್ಟಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ಎರಡನೇ ಹಂತವು ಎರಡು ಪೂರಕ ಎಳೆಗಳ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ. ಅವರ ಕುಟುಂಬದ ಹೆಸರೇ ಸೂಚಿಸುವಂತೆ, ಹೆಚ್ಚು ಸಂರಕ್ಷಿತವಾದ ಟೈರೋಸಿನ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಫೈಲ್ ಡಿಎನ್ಎ ಎಳೆಗಳನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸುತ್ತದೆ. ಟೈರೋಸಿನ್ನ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಫಿಲಿಕ್ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು ಡಿಎನ್ಎ ಸೀಳುವಿಕೆಯ ಹಂತದಲ್ಲಿ 3 '-ಫಾಸ್ಫೇಟ್ನೊಂದಿಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತವೆ. ಸೀಳಿದ ಡಿಎನ್ಎಯ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ 5 '-ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸಿಲ್ ಗುಂಪು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಫೈಲ್ ಆಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪೂರಕವಾಗಿ ಸೀಳಿದ ಡಿಎನ್ಎ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ನ ಮೇಲೆ 3'-ಫಾಸ್ಫೇಟ್ನ ಮೇಲೆ ದಾಳಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಇದು ಯಶಸ್ವಿ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ಟೈರೋಸಿನ್ ಅವಶೇಷದ ಹೊರಗೆ, ಸಂರಕ್ಷಿತ ವೇಗವರ್ಧಕ ಪೆಂಟಾಡ್ ಇರುತ್ತದೆ. ಈ ಪೆಂಟಾಡ್ ಒಂದು ಲೈಸಿನ್ (ಲೈಸ್ಬಿಟಾ), ಎರಡು ಅರ್ಜಿನೈನ್ಗಳು (ಆರ್ಗ್ I ಮತ್ತು II), ಒಂದು ಹಿಸ್ಟಿಡಿನ್ (ಹಿಸ್-II), ಮತ್ತು ಒಂದು ಹಿಸ್ಟಿಡಿನ್/ಟ್ರಿಪ್ಟೋಫಾನ್ (ಹಿಸ್/ಟ್ರಿಪ್-III) ನಿಂದ ಕೂಡಿದೆ, ಇದು ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ ಮತ್ತು ಕ್ರೀನ ಸಕ್ರಿಯ ತಾಣಕ್ಕೆ (ಇತರ ಐಬಿ ಟೋಪಿಯೋಸೋಮರೇಸ್ಗಳೊಂದಿಗೆ) ಅವಶೇಷಗಳ ಕಡ್ಡಾಯ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚು ಸಂರಕ್ಷಿತ ಸಮೂಹವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. ಈ ಇತರ ಅವಶೇಷಗಳು ಡಿಎನ್ಎ ಎಳೆಗಳ ಮೇಲೆ ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ ಬಂಧಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಸ್ಥಾನದ ಸರಿಯಾದ ದೃಷ್ಟಿಕೋನಕ್ಕೆ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿವೆ. ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ಸೈಟ್-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯ ಅನ್ವಯ ಆರಂಭಿಕ ಸಮಸ್ಯೆಗಳು ಥರ್ಮೋಲಬಿಲಿಟಿ ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ-ಎಫ್ಆರ್ಟಿ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯ ಆರಂಭಿಕ ಅನ್ವಯವು ಸಸ್ತನಿಗಳಲ್ಲಿ ಕೆಲಸ ಮಾಡಲಿಲ್ಲ. ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಥರ್ಮೋಲಾಬೈಲ್ ಆಗಿತ್ತು (ಎತ್ತರದ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ವಿಕಲತೆಗೊಂಡಿತು) ಮತ್ತು ಆದ್ದರಿಂದ ಈ ಮಾದರಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳ ಎತ್ತರದ ದೇಹದ ತಾಪಮಾನದಿಂದಾಗಿ ಸಸ್ತನಿ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಉಪಯುಕ್ತವಾಗಿರಲಿಲ್ಲ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಪೇಟೆಂಟ್ಗಳು ಮತ್ತು ಕ್ರೀ-ಲಾಕ್ಸ್ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯ ಬಳಕೆಯ ಮೇಲಿನ ನಿರ್ಬಂಧಗಳಿಂದಾಗಿ, ಹೆಚ್ಚು ಥರ್ಮೋಸ್ಟೇಬಲ್ ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ-ಎಫ್ಆರ್ಟಿ ಕ್ಯಾಸೆಟ್ ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಹೆಚ್ಚಿನ ಆಸಕ್ತಿಯನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಲಾಯಿತು. ಕೆಲವು ಮೊದಲ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಬುಚ್ಹೋಲ್ಜ್ ಮತ್ತು ಇತರರು ತಯಾರಿಸಿದರು. (1997) ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೋಲಿಯಲ್ಲಿ ಸೈಕ್ಲಿಂಗ್ ಮ್ಯುಟಜೆನೆಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿ. ತಮ್ಮ ಸಂಶೋಧನೆಯಲ್ಲಿ, ಲೇಖಕರು ಇ. ಕೋಲಿ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಎರಡು ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿದರುಃ ಒಂದು ಅರೇಬಿನೋಸ್ ಪ್ರವರ್ತಕದ ಕೆಳಭಾಗದಲ್ಲಿ ಯಾದೃಚ್ಛಿಕವಾಗಿ ರೂಪಾಂತರಗೊಂಡ ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳಿಗೆ ಕೋಡಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಇನ್ನೊಂದು ಎಫ್ಆರ್ಟಿ ಕ್ಯಾಸೆಟ್ನೊಳಗೆ ಲ್ಯಾಕ್ಝಡ್ ಜೀನ್ ಪ್ರವರ್ತಕವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ. ಇ. ಕೋಲಿಯನ್ನು ಅರಾಬಿನೋಸ್ ಫಲಕಗಳ ಮೇಲೆ 37°ಸಿ ಮತ್ತು 40°ಸಿ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಯಲಾಗುತ್ತಿತ್ತು, ಮತ್ತು ಮರುಸಂಯೋಜನೆ ಸಂಭವಿಸಿದಲ್ಲಿ, ಲ್ಯಾಕ್ಝಡ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯು ಕ್ಷೀಣಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ವಸಾಹತುಗಳು ಬಿಳಿ ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿ ಕಾಣಿಸುತ್ತವೆ. ಪ್ರತಿ ಪೀಳಿಗೆಯಿಂದ ಬಿಳಿ ವಸಾಹತುಗಳನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಎಂಟು ತಲೆಮಾರುಗಳವರೆಗೆ ಅದೇ ಹಿಂದಿನ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಹೊಸ ಅರೇಬಿನೋಸ್ ಫಲಕಗಳ ಮೇಲೆ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು. ವೆಸ್ಟರ್ನ್-ಬ್ಲಾಟಿಂಗ್ನಿಂದ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ದೃಢೀಕರಿಸಿದ ನಂತರ ಮತ್ತು ರೂಪಾಂತರಗೊಂಡ ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ ವಂಶವಾಹಿಗಳನ್ನು ಅನುಕ್ರಮಗೊಳಿಸಿದ ನಂತರ, ಈ ಎಂಟನೇ ತಲೆಮಾರಿನ ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ (ಎಫ್ಎಲ್ಪಿಇ) ಅನ್ನು ಸಸ್ತನಿ ಜೀವಕೋಶ ಸಂವರ್ಧನೆಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಸಸ್ತನಿ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ದೃಢಪಡಿಸಲಾಯಿತು. ಎಫ್ಎಲ್ಪಿಯ ಈ ರೂಪಾಂತರವು ಕೇವಲ 4 ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲ ಬದಲಿಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆಃ ಪಿ2ಎಸ್, ಎಲ್33ಎಸ್, ವೈ108ಎನ್, ಮತ್ತು ಎಸ್294ಪಿ. ಆನುವಂಶಿಕ ಮೊಸಾಯಿಕ್ಸ್ನ ಉತ್ಪಾದನೆಯು ಒಂದು ಜೀವಿಯೊಳಗೆ ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ, ಒಂದೇ ರೀತಿಯ ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರಕಾರಗಳು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸ್ಥಳದಲ್ಲಿ ವಿಭಿನ್ನ ಜೀನೋಟೈಪ್ಗಳ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿ ವಿಭಿನ್ನ ಫಿನೋಟೈಪ್ಗಳನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುತ್ತವೆ. ಸರಳವಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, ಒಂದು ಜೀವಿಯು ವಿಭಿನ್ನ ಜೀನೋಟೈಪ್ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವಾಗ ಇದು ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಅಪರೂಪ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ-ಎಫ್ಆರ್ಟಿ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಇದನ್ನು ಸುಲಭವಾಗಿ (ಮತ್ತು ಸಮಸ್ಯಾತ್ಮಕವಾಗಿ) ಉತ್ಪಾದಿಸಬಹುದು. ಒಂದು ಕೋಶದೊಳಗೆ ಎರಡು ವಿಭಿನ್ನ ಎಫ್ಆರ್ಟಿ ತಾಣಗಳು ಇದ್ದರೆ, ಮತ್ತು ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ ಸೂಕ್ತ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿದ್ದರೆ, ಎಫ್ಆರ್ಟಿ ಕ್ಯಾಸೆಟ್ ಅನ್ನು ಎರಡು ಎಫ್ಆರ್ಟಿ ತಾಣಗಳ ನಡುವೆ ಹೊರತೆಗೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು ಅಗತ್ಯ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಿಗಿಂತ ಕಡಿಮೆಯಾಗುವವರೆಗೆ ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ಮುಂದುವರಿಯುತ್ತದೆ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ವಿಭಿನ್ನ ಜೀನೋಟೈಪ್ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಜೀವಿಗಳೊಳಗಿನ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಉಂಟಾಗುತ್ತವೆ. ಇದು ಹಣ್ಣಿನ ನೊಣಗಳಿಂದ ಇಲಿಗಳವರೆಗೆ ಕಂಡುಬರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ವರ್ಣತಂತುಗಳ (ದೈಹಿಕ ಮತ್ತು ಲಿಂಗ) ಅಥವಾ ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರಕಾರಗಳ (ದೈಹಿಕ ಮತ್ತು ಜರ್ಮ್ಲೈನ್) ವಿರುದ್ಧ ವಿವೇಚನಾರಹಿತವಾಗಿದೆ. ಡೈಮೆಕ್ಕಿ ಮತ್ತು ಇತರರ ಪ್ರಕಟಣೆಯ ಮೊದಲು ಜೀವಕೋಶದ ವಂಶಾವಳಿಗಳ ನಿರ್ಣಯ. (1998), ಎನ್2 ಪ್ರವರ್ತಕವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿನ ನರಕೋಶದ ಪ್ರೊಜೆನಿಟರ್ಗಳ ಜೀವಕೋಶ-ನಷ್ಟದ ಮ್ಯಾಪಿಂಗ್ಗಾಗಿ ಕ್ರೀ ರಿಕಾಂಬಿನೇಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಹೀಗಾಗಿ, ಡೈಮೆಕ್ಕಿ ಮತ್ತು ಇತರರ ಲೇಖಕರು. (1998) ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ ರಿಕಾಂಬಿನೇಸ್ ಅನ್ನು ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ ಕ್ರೀ ರಿಕಾಂಬಿನೇಸ್ನಂತೆಯೇ ಅದೇ ರೀತಿಯ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವದೊಂದಿಗೆ ಬಳಸಬಹುದೆಂದು ಸಿದ್ಧಾಂತ ಮಾಡಿದರು. ಲೇಖಕರು ಎರಡು ಟ್ರಾನ್ಸ್ಜೆನಿಕ್ ಮೌಸ್ ಲೈನ್ಗಳನ್ನು ರಚಿಸಿದರುಃ ಒಂದು ನರಕೋಶದ ಡಬ್ಲ್ಯೂ. ಎನ್. ಟಿ. 1:: ಎಫ್. ಎಲ್. ಪಿ. ಸಮ್ಮಿಳನ ಲೈನ್ ಮತ್ತು ಟಿ. ಎಂ. 1. ಸಿ. ಡಬ್ಲ್ಯೂ. ಆರ್. ನ 18ನೇ ಎಕ್ಸಾನ್ ಅನ್ನು ಸುತ್ತುವರೆದಿರುವ ಎಫ್. ಆರ್. ಟಿ ಕ್ಯಾಸೆಟ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಒಂದು ಲೈನ್. ಲೇಖಕರು ಈ ಎಕ್ಸಾನ್ ಅನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಿದರು ಏಕೆಂದರೆ ಅದನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಿದರೆ, ಅದು ಶೂನ್ಯ ಫಿನೋಟೈಪ್ಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ಲೇಖಕರು ಎರಡು ಸಾಲುಗಳನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸಿದರು ಮತ್ತು ಸಂತತಿಯನ್ನು ತ್ಯಾಗ ಮಾಡುವ ಮೊದಲು ಸಂತತಿಯನ್ನು ಪ್ರೌಢಾವಸ್ಥೆಯನ್ನು ತಲುಪಲು ಅವಕಾಶ ಮಾಡಿಕೊಟ್ಟರು. ನರಕೋಶ, ಸ್ನಾಯು, ಕರುಳಿನ ಮತ್ತು ಬಾಲ ಅಂಗಾಂಶಗಳ ಮೇಲೆ ಆರ್. ಎನ್. ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ರಿವರ್ಸ್-ಟ್ರಾನ್ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಮತ್ತು ನಾರ್ದರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟಿಂಗ್ ಮೆದುಳಿನ ಅಂಗಾಂಶದಲ್ಲಿ ಸಮೃದ್ಧವಾಗಿ ಮತ್ತು ಸ್ನಾಯುವಿನ ಅಂಗಾಂಶದಲ್ಲಿ ಮಧ್ಯಮವಾಗಿ ಟಿಎಂ 1 ಸಿಡಬ್ಲ್ಯೂಆರ್ನ 18 ನೇ ಎಕ್ಸಾನ್ನ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯನ್ನು ದೃಢಪಡಿಸಿತು (ಸ್ನಾಯುವಿನೊಳಗಿನ ಶ್ವಾನ್ ಕೋಶಗಳಿಂದಾಗಿ). ನಿರೀಕ್ಷಿಸಿದಂತೆ, ಇತರ ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಛೇದನವು ಕಂಡುಬಂದಿಲ್ಲ. ಲೇಖಕರು ಜೀವಕೋಶದ-ನಷ್ಟದ ನಿರ್ಣಯದಲ್ಲಿ ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಕ್ರೀ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಗಿಂತ ಸಮಾನವಾಗಿ, ಉತ್ತಮವಲ್ಲದಿದ್ದರೂ, ಕಂಡರು. ಡ್ರೊಸೊಫಿಲಾ ಮೆಲನೊಗಾಸ್ಟರ್ನಲ್ಲಿ (ಫ್ರೂಟ್ ಫ್ಲೈ) ಇಲ್ಲಿಯವರೆಗೆ, ಡಿ. ಮೆಲನೊಗಾಸ್ಟರ್ನಲ್ಲಿ ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ ರಿಕಾಂಬಿನೇಸ್ ಅನ್ನು ಅನೇಕ ಬಾರಿ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ. ಡಿ. ಮೆಲಾನೋಗಾಸ್ಟರ್ನಲ್ಲಿ ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ ರಿಕಾಂಬಿನೇಸ್ನ ಹೋಲಿಕೆಯನ್ನು ಕ್ರೀ ರಿಕಾಂಬಿನೇಸ್ಗೆ ಫ್ರಿಕೆನ್ಹೌಸ್ ಮತ್ತು ಇತರರು ಪ್ರಕಟಿಸಿದ್ದಾರೆ. (2015). ಫ್ರಿಕೆನ್ಹಾಸ್ ಮತ್ತು ಇತರರ ಲೇಖಕರು. (2015) ಎರಡು ಪಟ್ಟು ಉದ್ದೇಶವನ್ನು ಹೊಂದಿತ್ತುಃ ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ ರಿಕಾಂಬಿನೇಸ್ "ನಾಕ್-ಔಟ್" ನ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವವನ್ನು ಕ್ರೀ ರಿಕಾಂಬಿನೇಸ್ "ನಾಕ್-ಔಟ್" ಮತ್ತು ಆರ್ಎನ್ಎಐ ನಾಕ್ಡೌನ್ಗೆ ನಿರೂಪಿಸಿ ಮತ್ತು ಹೋಲಿಸಿ ಮತ್ತು ಡಿ. ಮೆಲಾನೋಗಾಸ್ಟರ್ನ ನರಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಸ್ನಾಯು ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಎಫ್ ಯು ಎಸ್ ಗೆ ಫ್ಲೈ ಆರ್ಥೋಲಾಗ್ ಆಗಿರುವ ಕ್ಯಾಬೆಜಾ (ಕ್ಯಾಜ್) ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸುತ್ತದೆ. ಮಾನವರಲ್ಲಿ ಅಮ್ಯೋಟ್ರೋಫಿಕ್ ಲ್ಯಾಟರಲ್ ಸ್ಕ್ಲೆರೋಸಿಸ್ (ಎಎಲ್ಎಸ್) ಮತ್ತು ಫ್ರಾಂಟೊಟೆಂಪೋರಲ್ ಬುದ್ಧಿಮಾಂದ್ಯತೆಗೆ ಎಫ್. ಯು. ಎಸ್ ಬಲವಾಗಿ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ. ಲೇಖಕರು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ನ್ಯೂರಾನ್ಗಳಲ್ಲಿ ರಿಕಾಂಬಿನೇಸ್ ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲು ಎಲಾವ್-ಗ್ಯಾಲ್4/ಯುಎಎಸ್-ಎಫ್ಲಿಪ್ ಅಥವಾ ಕ್ರೀ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸಿದರು ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಸ್ನಾಯುಗಳಲ್ಲಿ ಅದನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲು ಮೆಫ್2-ಗ್ಯಾಲ್4/ಯುಎಎಸ್-ಎಫ್ಲಿಪ್ ಅಥವಾ ಕ್ರೀ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸಿದರು. ಆರ್ಎನ್ಎಐ ಮತ್ತು ಆರ್ಎನ್ಎಐ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ಎರಡರಲ್ಲೂ ಕಂಡುಬರುವ ಸೋರಿಕೆಯ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ ಕೊರತೆಯಿಂದಾಗಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ಜೀವಕೋಶದ ರೇಖೆಗಳಲ್ಲಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ವಂಶವಾಹಿಗಳನ್ನು ಹೊರಹಾಕುವ ಉದ್ದೇಶಕ್ಕಾಗಿ ಆರ್ಎನ್ಎಐ ಮತ್ತು ಆರ್ಎನ್ಎಐ ಎರಡಕ್ಕಿಂತಲೂ ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ ರಿಕಾಂಬಿನೇಸ್ "ನಾಕ್-ಔಟ್" ಉಪಕರಣವು ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿದೆ ಎಂದು ಲೇಖಕರು ತೀರ್ಮಾನಿಸಿದ್ದಾರೆ. ಅಲ್ಲದೆ, ಲೇಖಕರು ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ನೊಂದಿಗೆ ಕಾಣಿಸದ ಕ್ರೀ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗೆ ವಿಷತ್ವವನ್ನು ಕಂಡರು. ಡೇನಿಯೊ ರೆರಿಯೊ (ಝೆಬ್ರಾಫಿಶ್) ನಲ್ಲಿ ಎಫ್ಎಲ್ಪಿಇ ರಿಕಾಂಬಿನೇಸ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವವನ್ನು ಝೆಬ್ರಾಫಿಶ್ನಲ್ಲಿ ವಾಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಿದರು. (2009). ಸ್ನಾಯು-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರವರ್ತಕದ ಕೆಳಭಾಗದ ಎಫ್ಆರ್ಟಿ-ಪಾರ್ಶ್ವದ ವರ್ಧಿತ ಹಸಿರು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪ್ರೋಟೀನ್ (ಇಜಿಎಫ್ಪಿ) ಗೆ ಹೆಮಿಜೈಗಸ್ ಆಗಿರುವ ಭ್ರೂಣಗಳಿಗೆ ಎಫ್ಎಲ್ಪಿಇ ಪ್ರೋಟೀನ್ನೊಂದಿಗೆ ಚುಚ್ಚುಮದ್ದು ನೀಡಲಾಯಿತು. ಎಫ್ಎಲ್ಪಿಇ ಇಲ್ಲದೆ, ಈ ಭ್ರೂಣಗಳು ಎಲ್ಲಾ ಸ್ನಾಯು ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಇಜಿಎಫ್ಪಿಯನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಬೇಕು, ಮತ್ತು ಕಾಡು ರೀತಿಯ ಎಳೆಗಳೊಂದಿಗೆ ದಾಟಿದರೆ, ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಬರುವ ಸಂತತಿಯ 50 ಪ್ರತಿಶತವು ಸ್ನಾಯು ಅಂಗಾಂಶದಲ್ಲಿ ಇಜಿಎಫ್ಪಿಯನ್ನು ಸಹ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಬೇಕು. ಎಫ್ಎಲ್ಪಿಇ ಚುಚ್ಚುಮದ್ದಿನೊಂದಿಗೆ ಭ್ರೂಣಗಳು ಸ್ನಾಯು ಅಂಗಾಂಶದಲ್ಲಿ ಇಜಿಎಫ್ಪಿಯ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿದ್ದವು ಮತ್ತು ಮೊಸೈಕಿಸಮ್ ಸಹ ಕಂಡುಬಂದಿತು. ಈ ಭ್ರೂಣಗಳು ಪ್ರೌಢಾವಸ್ಥೆಯನ್ನು ತಲುಪಿದಾಗ, ಅವು ಕಾಡು ವಿಧದ ತಳಿಗಳೊಂದಿಗೆ ಬೆಸೆದುಕೊಂಡವು, ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಬಂದ ಹಿಡಿತಗಳು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಸಂತತಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದವು, ಅದು ಸ್ನಾಯು ಅಂಗಾಂಶದಲ್ಲಿ ಇಜಿಎಫ್ಪಿಯನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುತ್ತದೆ (0-4%). ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ದೈಹಿಕ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಎಫ್ಎಲ್ಪಿಇ ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿರುವುದು ಮಾತ್ರವಲ್ಲದೆ, ಝೀಬ್ರಾಫಿಶ್ನ ಜರ್ಮ್ಲೈನ್ನಲ್ಲಿಯೂ ಇದು ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಸಸ್ಯಗಳಲ್ಲಿ "ಫೈಟೊಸೆನ್ಸರ್ಗಳು" ಅಥವಾ "ಸೆಂಟಿನೆಲ್ಗಳ" ಸೃಷ್ಟಿ ಅರಾಬಿಡೋಪ್ಸಿಸ್ ಥಾಲಿಯಾನಾ ಮತ್ತು ತಂಬಾಕು ಫೈಟೊಸೆನ್ಸರ್ಗಳು ಜೈವಿಕ ಅಥವಾ ಅಜೈವಿಕ ಮಾಲಿನ್ಯಕಾರಕಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ವರದಿ ಮಾಡುವ ತಳೀಯವಾಗಿ ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಸಸ್ಯಗಳಾಗಿವೆ. ಈ ಎಂಜಿನಿಯರಿಂಗ್ ಸ್ಥಾವರಗಳ ಉತ್ಪಾದನೆಯು ದೊಡ್ಡ ಕೃಷಿ ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಭರವಸೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಸೂಕ್ತವಾದ ವರದಿಗಾರ ವಾಹಕವನ್ನು ರಚಿಸುವುದು ಸಮಸ್ಯಾತ್ಮಕವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸಾಬೀತಾಗಿದೆ. ಸಸ್ಯಗಳಲ್ಲಿನ ವಂಶವಾಹಿಗಳ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಸಿಸ್-ನಿಯಂತ್ರಕ ಅಂಶಗಳು ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರವಹಿಸುತ್ತವೆ, ಮತ್ತು ಅನೇಕವುಗಳನ್ನು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲಾಗಿಲ್ಲ. ಅನೇಕ ಫೈಟೊಸೆನ್ಸರ್ಗಳು ತಮ್ಮ ವರದಿಗಾರ ಜೀನ್ಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುತ್ತವೆ ಅಥವಾ ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ ಪ್ರವರ್ತಕರಿಂದಾಗಿ ಸುಳ್ಳು-ಧನಾತ್ಮಕತೆಯನ್ನು ವರದಿ ಮಾಡುತ್ತವೆ. ರಾವ್ ಮತ್ತು ಇತರರ ಲೇಖಕರು. (2010) ಅತ್ಯಂತ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಫೈಟೊಸೆನ್ಸರ್ಗಳ ಉತ್ಪಾದನೆಗಾಗಿ ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ ರಿಕಾಂಬಿನೇಸ್ ಉಪಕರಣವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡಿತು. ಲೇಖಕರು ಎಫ್ಎಲ್ಪಿಯ ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಲು ಶಾಖ ಆಘಾತ ಪ್ರವರ್ತಕವನ್ನು ಬಳಸಿದರೆ, ಎಫ್ಆರ್ಟಿ-ಪಾರ್ಶ್ವದ ವಾಹಕವು ಸಿಎಎಂವಿ 35ಎಸ್ ಪ್ರವರ್ತಕವನ್ನು ಬೀಟಾ-ಗ್ಲೂಕುರೊನಿಡೇಸ್ ಜೀನ್ನಿಂದ (ಜಿಯುಎಸ್) ಬೇರ್ಪಡಿಸಿತು. ಸಸ್ಯಗಳು ಶಾಖ-ಆಘಾತಕ್ಕೆ ಒಳಗಾದಾಗ, ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ-ಪ್ರಚೋದನೆಯು ಎಫ್ಆರ್ಟಿ-ಫ್ಲ್ಯಾಂಕ್ಡ್ ವೆಕ್ಟರ್ನ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು, ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಜಿಯುಎಸ್ ಜೀನ್ ಅನ್ನು ಸಿಎಎಂವಿ 35ಎಸ್ ಪ್ರವರ್ತಕನ ನೇರವಾಗಿ ಕೆಳಮುಖವಾಗಿ ಚಲಿಸುತ್ತದೆ. ಜಿ. ಯು. ಎಸ್ನ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯು ಸಸ್ಯಗಳ ಎಲೆಗಳು ಹಸಿರು ಬಣ್ಣದಿಂದ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣಕ್ಕೆ ಬದಲಾಗಲು ಕಾರಣವಾಯಿತು; ಹೀಗಾಗಿ, ಫೈಟೊಸೆನ್ಸರ್ ಮಾದರಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗೆ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ವರದಿ ಮಾಡಿತು! ಕ್ರೀ-ರಿಕೊಂಬಿನೇಸ್ನೊಂದಿಗೆ ಗೇಟ್-ವೇ-ರೆಡಿ ಇಂಡ್ಯುಸಿಬಲ್ ಮಿಆರ್ಎನ್ಎ (ಜಿಆರ್ಐಎಂ) ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಆರ್ಎನ್ಎ ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪವು (ಆರ್ಎನ್ಎಐ) ಯುಕಾರ್ಯೋಟ್ಗಳಲ್ಲಿನ ಜೀನ್ಗಳು ಮತ್ತು ಸಂಭಾವ್ಯ ಜೀನ್ ನಾಕ್ಔಟ್ಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಒಂದು ಮಾದರಿ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಿದೆ. ಜಿಆರ್ಐಎಂ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಉತ್ಪಾದನೆಗೆ ಮೊದಲು, ಆರ್ಎನ್ಎಐ ವಾಹಕಗಳ ರಚನೆಯು ದುಬಾರಿಯಾಗಿತ್ತು ಮತ್ತು ಸಮಯ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತಿತ್ತು. ವಾಹಕಗಳನ್ನು ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ನಕಲು ಮತ್ತು ಅಂಟಿಸುವ ಆಣ್ವಿಕ ಅಬೀಜ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿ ವಿಧಾನದಿಂದ ಉತ್ಪಾದಿಸಲಾಯಿತು. ಗಾರ್ವಿಕ್-ಕೊಪ್ಪೆನ್ಸ್ ಮತ್ತು ಇತರರು. (2011) ಆರ್. ಎನ್. ಎ. ಐ ವಾಹಕಗಳ ಉತ್ಪಾದನೆಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ವಿಧಾನವನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿತು, ಇದರಲ್ಲಿ ಆರ್. ಎನ್. ಎ. ಐ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಕ್ರೀ-ರಿಕೊಂಬಿನೇಸ್ ಬಳಸಿ ನಾಕ್-ಇನ್ ಮಾಡಬಹುದು ಮತ್ತು ಎಫ್. ಎಲ್. ಪಿ-ರಿಕೊಂಬಿನೇಸ್ ಬಳಸಿ ನಾಕ್-ಔಟ್ ಮಾಡಬಹುದು. ಹೊಸ ಜಿಆರ್ಐಎಂ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಕೃತಕ ಆರ್ಎನ್ಎಐ ರಚನೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವಾಹಕಗಳನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ವೇಗವಾಗಿ ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ. ಆಣ್ವಿಕ ಸಂಶೋಧನೆಯಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯ ಮಾನವ ಅಮರ ಜೀವಕೋಶದ ರೇಖೆಯಾದ ಮಾನವ ಭ್ರೂಣದ ಮೂತ್ರಪಿಂಡಗಳಲ್ಲಿ (ಎಚ್. ಇ. ಕೆ) ತಮ್ಮ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಸಾಕಷ್ಟು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಲೇಖಕರು ತೋರಿಸಿದರು. ಸೈಟ್-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ರಿಕಾಂಬಿನೇಸ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನ ರಿಕಾಂಬಿನೇಸ್-ಮಧ್ಯಸ್ಥ ಕ್ಯಾಸೆಟ್ ವಿನಿಮಯ ಕ್ರೀ ರಿಕಾಂಬಿನೇಸ್ ಕ್ರೀ-ಲಾಕ್ಸ್ ರಿಕಾಂಬಿನೇಷನ್ ಜೆನೆಟಿಕ್ ರಿಕಾಂಬಿನೇಷನ್ ಹೋಮೋಲೋಗಸ್ ರಿಕಾಂಬಿನೇಷನ್ ಉಲ್ಲೇಖಗಳು ಬಾಹ್ಯ ಕೊಂಡಿಗಳು ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ-ಎಫ್ಆರ್ಟಿ ರಿಕಾಂಬಿನೇಸ್ಃ ಮೆಕ್ಯಾನಿಜಂ ಆಫ್ ಆಕ್ಷನ್ ವೀಡಿಯೊ ಆಫ್ ದ ಯುಟಿಲೈಸೇಶನ್ ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ-ಎಫ್ಆರ್ಟಿ ರಿಕಾಂಬಿನೇಸ್ ಇನ್ ಡಿ. ಮೆಲನೋಸ್ಟರ್ ಫೋಟೋರಿಸೆಪ್ಟರ್ ಅಪ್ಲಿಕೇಷನ್ ಆಫ್ ಎಫ್ಎಲ್ಪಿ ಮ್ಯುಟಟ್ಜೆನೆಸಿಸ್ ಆಫ್ ವಿಬ್ರಿಯೊ ಕಾಲರಾ ಜೆನೆಟಿಕ್ಸ್ ತಂತ್ರಗಳು ಮಾಲಿಕ್ಯುಲರ್ ಜೆನೆಟಿಕ್ಸ್