Reversed-phase chromatography
ರಿವರ್ಸ್ಡ್-ಫೇಸ್ ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ (ಆರ್. ಪಿ.-ಎಲ್. ಸಿ.) ಎಂಬುದು ದ್ರವ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯ ಒಂದು ವಿಧಾನವಾಗಿದ್ದು, ಇದರಲ್ಲಿ ಸಾವಯವ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸಲು ಧ್ರುವೀಯವಲ್ಲದ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತ ಮತ್ತು ಧ್ರುವೀಯ ಚಲನಶೀಲ ಹಂತಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಇತ್ತೀಚಿನ ವರ್ಷಗಳಲ್ಲಿ ಹೈ ಪರ್ಫಾರ್ಮೆನ್ಸ್ ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ-ಎಚ್. ಪಿ. ಎಲ್. ಸಿ. ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಬಹುಪಾಲು ಬೇರ್ಪಡಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ರಿವರ್ಸ್ಡ್ ಫೇಸ್ ಮೋಡ್ ಬಳಸಿ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ರಿವರ್ಸ್ಡ್ ಫೇಸ್ ಮೋಡ್ನಲ್ಲಿ, ಮಾದರಿ ಘಟಕಗಳನ್ನು ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅವು ಹೆಚ್ಚು ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಆಗಿರುತ್ತವೆ. ರಿವರ್ಸ್ಡ್ ಫೇಸ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಫಿಕ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ ದ್ರಾವಕಗಳ ಧಾರಣ ಮತ್ತು ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಅಂಶಗಳು ಈ ಕೆಳಗಿನಂತಿವೆಃ a. ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತದ ರಾಸಾಯನಿಕ ಸ್ವರೂಪ, ಅಂದರೆ, ಅದರ ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ಬಂಧಿಸಲಾದ ಲಿಗಂಡ್ಗಳು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಬಂಧದ ಸಾಂದ್ರತೆ, ಅವುಗಳ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯ ವ್ಯಾಪ್ತಿ. ಬಿ. ಸಂಚಾರಿ ಹಂತದ ಸಂಯೋಜನೆ. ಮಿಶ್ರಣಗಳು ಚಲಿಸುವ ಹಂತದ ಧ್ರುವೀಯತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಬೃಹತ್ ದ್ರಾವಕಗಳ ಪ್ರಕಾರ, ಆದ್ದರಿಂದ ಚಲಿಸುವ ಹಂತದ ಧ್ರುವೀಯತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಲು ದ್ರಾವಕಕ್ಕೆ ಹೆಸರನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಸಿ. ಬಫರ್ಗಳಂತಹ ಸೇರ್ಪಡೆಗಳು ಚಲಿಸುವ ಹಂತದ ಪಿಹೆಚ್ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತವೆ, ಇದು ದ್ರಾವಣಗಳ ಅಯಾನೀಕರಣ ಸ್ಥಿತಿ ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಧ್ರುವೀಯತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ. ಮಿಶ್ರಣಗಳಲ್ಲಿ ಸಾವಯವ ಘಟಕಗಳನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳುವ ಸಲುವಾಗಿ, ಕಾಲಮ್ಗಳೊಳಗೆ ಪ್ಯಾಕ್ ಮಾಡಲಾದ ಸ್ಥಿರ ಹಂತಗಳು, ವಿವಿಧ ಜ್ಯಾಮಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (ಗೋಳಾಕಾರದ, ಅನಿಯಮಿತ), ವಿವಿಧ ವ್ಯಾಸಗಳಲ್ಲಿ (ಸಬ್-2,3,5,7,10 ಉಮ್), ವಿವಿಧ ರಂಧ್ರ ವ್ಯಾಸಗಳೊಂದಿಗೆ (60,100,150,300, ಎ) ರಂಧ್ರಯುಕ್ತ ಸಿಲಿಕಾ-ಜೆಲ್ ಕಣಗಳ ಮೇಲ್ಮೈಗೆ ಬಂಧಿಸಲಾದ ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ತಲಾಧಾರಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತವೆ. ಕಣದ ಮೇಲ್ಮೈಯು ರಾಸಾಯನಿಕವಾಗಿ ಬಂಧಿಸಲಾದ ಸಿ3, ಸಿ4, ಸಿ8, ಸಿ18 ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಹೈಡ್ರೋಕಾರ್ಬನ್ಗಳಿಂದ ಆವೃತವಾಗಿದೆ. ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಹೈಡ್ರೋಕಾರ್ಬನ್ ಎಷ್ಟು ಉದ್ದವಾಗುತ್ತದೆಯೋ, ಮಾದರಿ ಘಟಕಗಳನ್ನು ಅಷ್ಟು ದೀರ್ಘಕಾಲ ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ. ಕೆಲವು ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಗಳನ್ನು ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಪಾಲಿಮರಿಕ್ ಕಣಗಳಿಂದ ಅಥವಾ ಹೈಬ್ರಿಡೈಸ್ಡ್ ಸಿಲಿಕಾ-ಆರ್ಗ್ಯಾನಿಕ್ ಗುಂಪುಗಳ ಕಣಗಳಿಂದ ತಯಾರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಈ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ ತೀವ್ರವಾದ pHನಲ್ಲಿ ಚಲಿಸುವ ಹಂತಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಜೈವಿಕ ವೈದ್ಯಕೀಯ ವಸ್ತುಗಳನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸುವ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಸ್ತುತ ವಿಧಾನಗಳು ಸಿ-18 ಅಂಕಣಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತವೆ, ಇದನ್ನು ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ ಒ. ಡಿ. ಎಸ್ (ಆಕ್ಟಾಡೆಸೈಲ್ಸಿಲೇನ್) ಅಥವಾ ಆರ್. ಪಿ-18 ನಂತಹ ವ್ಯಾಪಾರ ಹೆಸರುಗಳಿಂದ ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಚಲಿಸುವ ಹಂತಗಳು ನೀರು ಮತ್ತು ಧ್ರುವೀಯ ಸಾವಯವ ದ್ರಾವಕಗಳ ಮಿಶ್ರಣಗಳಾಗಿವೆ, ಅವುಗಳಲ್ಲಿ ಬಹುಪಾಲು ಮೆಥನಾಲ್ ಮತ್ತು ಅಸಿಟೋನಿಟ್ರಿಲ್ಗಳಾಗಿವೆ. ಈ ಮಿಶ್ರಣಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಫರ್ಗಳು (ಅಸಿಟೇಟ್, ಫಾಸ್ಫೇಟ್, ಸಿಟ್ರೇಟ್) ಮತ್ತು/ಅಥವಾ ಸರ್ಫ್ಯಾಕ್ಟಂಟ್ಗಳು (ಆಲ್ಕೈಲ್ ಅಮೈನ್ಗಳು ಅಥವಾ ಅಲ್ಕೈಲ್ ಸಲ್ಫೋನೇಟ್ಗಳು) ಮತ್ತು/ಅಥವಾ ವಿಶೇಷ ಸೇರ್ಪಡೆಗಳನ್ನು (ಇಡಿಟಿಎ) ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತವೆ. ಒಂದು ಅಥವಾ ಇನ್ನೊಂದು ರೀತಿಯ ಪೂರಕಗಳನ್ನು ಬಳಸುವ ಗುರಿಯು ದಕ್ಷತೆ ಮತ್ತು/ಅಥವಾ ಆಯ್ಕೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವುದು ಮತ್ತು ದ್ರಾವಣದ ಧಾರಣವನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವುದು. ಮೇಜರ್ಗಳು, ಡೋಲನ್, ಕಾರ್ ಮತ್ತು ಸ್ನೈಡರ್ ಅವರ ಲೇಖನವೊಂದರಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ರಿವರ್ಸ್ಡ್ ಹಂತದ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಗಳ ಇತಿಹಾಸ ಮತ್ತು ವಿಕಾಸ 1970ರ ದಶಕದಲ್ಲಿ, ಹೆಚ್ಚಿನ ದ್ರವ ವರ್ಣಪಟಲದ ಚಲನೆಗಳನ್ನು ಘನ ಕಣಗಳನ್ನು ಸ್ಥಿರ ಹಂತಗಳಾಗಿ ಬಳಸಿ, ಮಾರ್ಪಡಿಸದ ಸಿಲಿಕಾ-ಜೆಲ್ ಅಥವಾ ಅಲ್ಯುಮಿನಾದಿಂದ ತಯಾರಿಸಲಾಯಿತು. ಈ ರೀತಿಯ ತಂತ್ರವನ್ನು ಈಗ ಸಾಮಾನ್ಯ-ಹಂತದ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ತಂತ್ರದಲ್ಲಿ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತವು ಹೈಡ್ರೋಫಿಲಿಕ್ ಆಗಿರುವುದರಿಂದ ಮತ್ತು ಚಲಿಸುವ ಹಂತವು ಧ್ರುವೀಯವಾಗಿರುವುದರಿಂದ, ಹೆಕ್ಸೇನ್ ಮತ್ತು ಹೆಪ್ಟೇನ್ನಂತಹ ಧ್ರುವೀಯವಲ್ಲದ ಸಾವಯವ ದ್ರಾವಕಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವುದರಿಂದ, ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿನ ಹೈಡ್ರೋಫಿಲಿಕ್ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಜೈವಿಕ ಅಣುಗಳು ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದವು, ಆದ್ದರಿಂದ ಅವು ಅದಕ್ಕೆ ಬಲವಾಗಿ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ಅವು ಚಲಿಸುವ ಹಂತದ ದ್ರಾವಕಗಳಲ್ಲಿ ಸುಲಭವಾಗಿ ಕರಗುವುದಿಲ್ಲ. ಅದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಅಣುಗಳು ಧ್ರುವದ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಕ್ಕೆ ಕಡಿಮೆ ಆಕರ್ಷಣೆಯನ್ನು ಅನುಭವಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಸಾಕಷ್ಟು ಧಾರಣವಿಲ್ಲದೆಯೇ ಅದರ ಮೂಲಕ ಬೇಗನೆ ಹೊರಬರುತ್ತವೆ. 1970 ರ ದಶಕದಲ್ಲಿ ಸಿಲಿಕಾ ಆಧಾರಿತ ಕಣಗಳನ್ನು ಹೈಡ್ರೋಕಾರ್ಬನ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಸ್ಕರಿಸಿ, ಅವುಗಳ ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ನಿಶ್ಚಲಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು ಅಥವಾ ಬಂಧಿಸಲಾಯಿತು, ಮತ್ತು ಚಲಿಸುವ ಹಂತಗಳನ್ನು ಜೈವಿಕ ವೈದ್ಯಕೀಯ ಪದಾರ್ಥಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಜಲೀಯ ಮತ್ತು ಧ್ರುವೀಯ ಸ್ವರೂಪಕ್ಕೆ ಬದಲಾಯಿಸಲಾಯಿತು. ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತ ಮತ್ತು ಧ್ರುವೀಯ ಚಲನಶೀಲ ಹಂತಗಳ ಬಳಕೆಯು ಮೂಲಭೂತವಾಗಿ ಸಾಮಾನ್ಯ ಹಂತದ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯ ಹಿಮ್ಮುಖವಾಗಿದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಚಲನಶೀಲ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರ ಹಂತಗಳ ಧ್ರುವೀಯತೆಯನ್ನು ತಲೆಕೆಳಗಾಗಿ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ-ಆದ್ದರಿಂದ ಈ ಪದವನ್ನು ಹಿಮ್ಮುಖ-ಹಂತದ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ, ಧ್ರುವೀಯ ಚಲನಶೀಲ ಹಂತದಲ್ಲಿರುವ ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಅಣುಗಳು ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಕ್ಕೆ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ, ಮತ್ತು ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿರುವ ಹೈಡ್ರೋಫಿಲಿಕ್ ಅಣುಗಳು ಕಾಲಮ್ನ ಮೂಲಕ ಹಾದುಹೋಗುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಮೊದಲು ಹೊರಹಾಕಲ್ಪಡುತ್ತವೆ. ಸಾವಯವ (ಧ್ರುವೀಯವಲ್ಲದ) ದ್ರಾವಕವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಚಲಿಸುವ ಹಂತದ ಧ್ರುವೀಯತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಅಣುಗಳನ್ನು ಕಾಲಮ್ನಿಂದ ಹೊರಹಾಕಬಹುದು, ಇದು ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಅಣುವು ಹೆಚ್ಚು ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಆಗಿದ್ದರೆ, ಅದು ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚು ಬಲವಾಗಿ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅಣುವನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲು ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಸಾವಯವ ದ್ರಾವಕದ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ. ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಸಿದ್ಧಾಂತದ ಅನೇಕ ಗಣಿತದ ನಿಯತಾಂಕಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಫಿಕ್ ವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸುವ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪರಿಗಣನೆಗಳು ಆರ್ಪಿ-ಎಲ್ಸಿಗೂ ಅನ್ವಯಿಸುತ್ತವೆ (ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಸೆಲೆಕ್ಟಿವಿಟಿ ಫ್ಯಾಕ್ಟರ್, ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಫಿಕ್ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್, ಪ್ಲೇಟ್ ಎಣಿಕೆ, ಇತ್ಯಾದಿ). ಇದನ್ನು ವಿವಿಧ ರೀತಿಯ ಅಣುಗಳನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸಲು ಬಳಸಬಹುದು. ಇದನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಸಾಮಾನ್ಯ-ಹಂತದ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯಲ್ಲಿ ಬಳಸುವ ಸಾವಯವ ದ್ರಾವಕಗಳು ಅನೇಕ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳನ್ನು ವಿರೂಪಗೊಳಿಸಬಹುದು. ಇಂದು, ಆರ್. ಪಿ.-ಎಲ್. ಸಿ. ಯು ಆಗಾಗ್ಗೆ ಬಳಸಲಾಗುವ ವಿಶ್ಲೇಷಣಾತ್ಮಕ ತಂತ್ರವಾಗಿದೆ. ಆರ್ಪಿ-ಎಲ್ಸಿ ಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಲು ಅಪಾರ ವೈವಿಧ್ಯಮಯ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಗಳಿವೆ, ಇದು ಬೇರ್ಪಡಿಸುವ ವಿಧಾನಗಳ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ನಮ್ಯತೆಯನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ. ಸಿಲಿಕಾ-ಆಧಾರಿತ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಗಳಾದ ಸಿಲಿಕಾ ಜೆಲ್ ಕಣಗಳನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಹೈ-ಪರ್ಫಾರ್ಮೆನ್ಸ್ ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯಲ್ಲಿ (ಎಚ್. ಪಿ. ಎಲ್. ಸಿ.) ಹಲವಾರು ಕಾರಣಗಳಿಗಾಗಿ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅವುಗಳೆಂದರೆಃ ಹೆಚ್ಚಿನ ಮೇಲ್ಮೈ ವಿಸ್ತೀರ್ಣಃ ಸಿಲಿಕಾ ಜೆಲ್ ಕಣಗಳು ಹೆಚ್ಚಿನ ಮೇಲ್ಮೈ ವಿಸ್ತೀರ್ಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ, ಇದು ದ್ರಾವಕಗಳೊಂದಿಗೆ ನೇರ ಸಂವಹನವನ್ನು ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ ಅಥವಾ ಮಾದರಿ ಅಣುಗಳೊಂದಿಗೆ ಬಹುಮುಖ ಸಂವಹನಕ್ಕಾಗಿ ವಿವಿಧ ಲಿಗಂಡ್ಗಳ ಬಂಧದ ನಂತರ, ಉತ್ತಮ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ರಾಸಾಯನಿಕ ಮತ್ತು ಉಷ್ಣ ಸ್ಥಿರತೆ ಮತ್ತು ಜಡತ್ವಃ ಸಿಲಿಕಾ ಜೆಲ್ ರಾಸಾಯನಿಕವಾಗಿ ಸ್ಥಿರವಾಗಿದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಚಲಿಸುವ ಹಂತದ ದ್ರಾವಕಗಳೊಂದಿಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸುವುದಿಲ್ಲ ಅಥವಾ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸುವುದಿಲ್ಲ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ನಿಖರವಾದ, ಪುನರಾವರ್ತನೀಯ ಮತ್ತು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳು ನಡೆಯುತ್ತವೆ. ವ್ಯಾಪಕ ಅನ್ವಯಿಸುವಿಕೆಃ ಸಿಲಿಕಾ ಜೆಲ್ ಬಹುಮುಖಿಯಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಇದನ್ನು ವಿವಿಧ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಗುಂಪುಗಳೊಂದಿಗೆ ಮಾರ್ಪಡಿಸಬಹುದು, ಇದು ವ್ಯಾಪಕ ಶ್ರೇಣಿಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಮತ್ತು ಅನ್ವಯಗಳಿಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ. ದಕ್ಷ ಬೇರ್ಪಡಿಸುವಿಕೆಃ ಸಿಲಿಕಾ ಜೆಲ್ ಕಣಗಳ ವಿಶಿಷ್ಟ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು, ಅವುಗಳ ಹೆಚ್ಚಿನ ಮೇಲ್ಮೈ ವಿಸ್ತೀರ್ಣ ಮತ್ತು ನಿಯಂತ್ರಿತ ಸರಾಸರಿ ಕಣ ವ್ಯಾಸದ ರಂಧ್ರದ ಗಾತ್ರದೊಂದಿಗೆ ಸೇರಿ, ಎಚ್. ಪಿ. ಎಲ್. ಸಿ. ಯಲ್ಲಿ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಸಮರ್ಥವಾಗಿ ಮತ್ತು ನಿಖರವಾಗಿ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲು ಅನುಕೂಲ ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತವೆ. ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿಃ ಸಿಲಿಕಾ ಜೆಲ್ ಕಣಗಳು ಹೆಚ್ಚಿನ ಬ್ಯಾಚ್-ಟು-ಬ್ಯಾಚ್ ಪುನರುತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ನೀಡಬಲ್ಲವು, ಇದು ದಶಕಗಳಾದ್ಯಂತ ಸ್ಥಿರ ಮತ್ತು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಎಚ್. ಪಿ. ಎಲ್. ಸಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳಿಗೆ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ. ಕಣ ವ್ಯಾಸ ಮತ್ತು ರಂಧ್ರ ಗಾತ್ರ ನಿಯಂತ್ರಣಃ ಸಿಲಿಕಾ ಜೆಲ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ರಂಧ್ರ ಗಾತ್ರಗಳನ್ನು ಹೊಂದಲು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಬಹುದು, ಇದು ಆಣ್ವಿಕ ಗಾತ್ರದ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಬೇರ್ಪಡಿಸುವಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ನಿಖರವಾದ ನಿಯಂತ್ರಣವನ್ನು ಶಕ್ತಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ವೆಚ್ಚ-ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಃ ಸಿಲಿಕಾ ಭೂಮಿಯ ಮೇಲಿನ ಅತ್ಯಂತ ಹೇರಳವಾದ ಅಂಶವಾಗಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಅದರ ಜೆಲ್ ಎಚ್. ಪಿ. ಎಲ್. ಸಿ ಅನ್ವಯಗಳಿಗೆ ವೆಚ್ಚ-ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಆಯ್ಕೆಯಾಗಿದ್ದು, ಇದನ್ನು ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಅಳವಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲಾಗಿದೆ. ಯುನೈಟೆಡ್ ಸ್ಟೇಟ್ಸ್ ಫಾರ್ಮಾಕೋಪಿಯಾ (ಯುಎಸ್ಪಿ) ಎಚ್. ಪಿ. ಎಲ್. ಸಿ ಕಾಲಮ್ಗಳನ್ನು ಎಲ್ #ಪ್ರಕಾರಗಳಿಂದ ವರ್ಗೀಕರಿಸಿದೆ. ಈ ವರ್ಗೀಕರಣದಲ್ಲಿ ಅತ್ಯಂತ ಜನಪ್ರಿಯ ಅಂಕಣವೆಂದರೆ ಆಕ್ಟಾಡೆಸಿಲ್ ಕಾರ್ಬನ್ ಚೈನ್ (ಸಿ 18)-ಬಾಂಡೆಡ್ ಸಿಲಿಕಾ (ಯುಎಸ್ಪಿ ವರ್ಗೀಕರಣ ಎಲ್ 1). ಇದರ ನಂತರ C8-ಬಂಧಿತ ಸಿಲಿಕಾ (L7), ಶುದ್ಧ ಸಿಲಿಕಾ (L3), ಸಯಾನೋ-ಬಂಧಿತ ಸಿಲಿಕಾ (CN) (L10) ಮತ್ತು ಫಿನೈಲ್-ಬಂಧಿತ ಸಿಲಿಕಾ (L11) ಇವೆ. C18, C8 ಮತ್ತು ಫಿನೈಲ್ಗಳು ಮೀಸಲಾದ ಹಿಮ್ಮುಖ-ಹಂತದ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಗಳಾಗಿವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಗಮನಿಸಿ, ಆದರೆ CN ಕಾಲಮ್ಗಳನ್ನು ಅನಲೈಟ್ ಮತ್ತು ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತದ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ ಹಿಮ್ಮುಖ-ಹಂತದ ಕ್ರಮದಲ್ಲಿ ಬಳಸಬಹುದು. ಎಲ್ಲಾ C18 ಕಾಲಮ್ಗಳು ಒಂದೇ ರೀತಿಯ ಧಾರಣ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದಿಲ್ಲ. ಸಿಲಿಕಾದ ಮೇಲ್ಮೈ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕತೆಯನ್ನು ಮೊನೊಮೆರಿಕ್ ಅಥವಾ ಪಾಲಿಮರಿಕ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ವಿವಿಧ ಶಾರ್ಟ್-ಚೈನ್ ಆರ್ಗನೋಸಿಲೇನ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಮಾಡಬಹುದು, ಉಳಿದ ಸಿಲನಾಲ್ ಗುಂಪುಗಳನ್ನು (ಎಂಡ್-ಕ್ಯಾಪಿಂಗ್) ಒಳಗೊಳ್ಳಲು ಎರಡನೇ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಒಟ್ಟಾರೆ ಧಾರಣ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ಒಂದೇ ಆಗಿರುತ್ತದೆಯಾದರೂ, ವಿವಿಧ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಗಳ ಮೇಲ್ಮೈ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರಗಳಲ್ಲಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳು ಆಯ್ಕೆಯಲ್ಲಿ ಬದಲಾವಣೆಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತವೆ. ಆಧುನಿಕ ಕಾಲಮ್ಗಳು ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಕ್ಕೆ ಬಂಧಿಸಲಾದ ಲಿಗಂಡ್ ಅನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ ವಿಭಿನ್ನ ಧ್ರುವೀಯತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ. ಪಿಎಫ್ಪಿ ಪೆಂಟಾಫ್ಲೂರ್ಫೀನಿಲ್ ಆಗಿದೆ. ಸಿ. ಎನ್. ಎಂದರೆ ಸಯಾನೋ. ಎನ್. ಎಚ್. 2 ಅಮಿನೊ ಆಗಿದೆ. ಒ. ಡಿ. ಎಸ್. ಎಂದರೆ ಆಕ್ಟಾಡೆಸಿಲ್ ಅಥವಾ ಸಿ18. ಒ. ಡಿ. ಸಿ. ಎನ್. ಯು ಸಿ18 ಮತ್ತು ನೈಟ್ರೈಲ್ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಮಿಶ್ರ ಕ್ರಮದ ಕಾಲಮ್ ಆಗಿದೆ. ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಫಿಕ್ ಬೆಂಬಲಗಳು ಮತ್ತು ದ್ರವ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ (ಎಲ್ಸಿ) ಯ ಸಲಕರಣೆಗಳಲ್ಲಿನ ಇತ್ತೀಚಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಗಳು ವಿವಿಧ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಗಳ ಜ್ಯಾಮಿತಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ತ್ವರಿತ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಬೇರ್ಪಡಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಸುಗಮಗೊಳಿಸುತ್ತವೆ. ವಿವಿಧ ವಿಶ್ಲೇಷಣಾತ್ಮಕ ಕಾರ್ಯತಂತ್ರಗಳನ್ನು ಪ್ರಸ್ತಾಪಿಸಲಾಗಿದೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಸಿಲಿಕಾ-ಆಧಾರಿತ ಏಕಶಿಲೆಯ ಆಧಾರಗಳ ಬಳಕೆ, ಹೆಚ್ಚಿದ ಚಲನಶೀಲ ಹಂತದ ತಾಪಮಾನಗಳು ಮತ್ತು ಉಪ-3 ಮೈಕ್ರೋಮೀಟರ್ ಮೇಲ್ಮೈ ರಂಧ್ರಯುಕ್ತ ಕಣಗಳಿಂದ (ಬೆಸೆಯಲ್ಪಟ್ಟ ಅಥವಾ ಘನ ಕೋರ್) ತುಂಬಿದ ಕಾಲಮ್ಗಳು ಅಥವಾ ಅಲ್ಟ್ರಾ-ಹೈ-ಪ್ರೆಶರ್ ಎಲ್ಸಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳಲ್ಲಿ (ಯುಹೆಚ್ಪಿಎಲ್ಸಿ) ಬಳಸಲು ಉಪ-2 ಮೈಕ್ರೋಮೀಟರ್ ಸಂಪೂರ್ಣ ರಂಧ್ರಯುಕ್ತ ಕಣಗಳು. ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತಗಳು ರಿವರ್ಸ್ಡ್ ಫೇಸ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯಲ್ಲಿ ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತದ ಆಯ್ಕೆಯ ಆಧುನಿಕ ಪ್ರವೃತ್ತಿಗಳು ಮತ್ತು ಉತ್ತಮ ಅಭ್ಯಾಸಗಳ ಕುರಿತು ಸಮಗ್ರ ಲೇಖನವನ್ನು ಬೋಯ್ಸ್ ಮತ್ತು ಡಾಂಗ್ ಪ್ರಕಟಿಸಿದ್ದಾರೆ. ರಿವರ್ಸ್ಡ್ ಫೇಸ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯಲ್ಲಿ ಚಲಿಸುವ ಹಂತವು ನೀರು ಅಥವಾ ಜಲೀಯ ಬಫರ್ಗಳ ಮಿಶ್ರಣಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ, ಇದಕ್ಕೆ ಸಾವಯವ ದ್ರಾವಕಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಆಯ್ದ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ರಿವರ್ಸ್ಡ್-ಫೇಸ್ ಕಾಲಮ್ನಿಂದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯುತ್ತದೆ. ಸೇರಿಸಲಾದ ಸಾವಯವ ದ್ರಾವಕಗಳು ನೀರಿನಿಂದ ಮಿಶ್ರವಾಗಿರಬೇಕು ಮತ್ತು ಬಳಸಲಾಗುವ ಎರಡು ಸಾಮಾನ್ಯ ಸಾವಯವ ದ್ರಾವಕಗಳೆಂದರೆ ಅಸಿಟೋನಿಟ್ರೈಲ್, ಮೆಥನಾಲ್. ಎಥೆನಾಲ್ ಅಥವಾ 2-ಪ್ರೊಪನಾಲ್ (ಐಸೊಪ್ರೊಪೈಲ್ ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್) ಮತ್ತು ಟೆಟ್ರಾಹೈಡ್ರೋಫುರಾನ್ (ಟಿಎಚ್ಎಫ್) ನಂತಹ ಇತರ ದ್ರಾವಕಗಳನ್ನು ಸಹ ಬಳಸಬಹುದು. ಸಾವಯವ ದ್ರಾವಕವನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಕ ಎಂದೂ ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಇದನ್ನು ಚಲಿಸುವ ಹಂತದ ಧ್ರುವೀಯತೆಯನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸುವ ಸಲುವಾಗಿ ಚಲಿಸುವ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಜಲೀಯ ದ್ರಾವಣಕ್ಕೆ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ರಿವರ್ಸ್ಡ್ ಫೇಸ್ ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತದಲ್ಲಿ ನೀರು ಅತ್ಯಂತ ಧ್ರುವೀಯ ದ್ರಾವಕವಾಗಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ, ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತದ ಧ್ರುವೀಯತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವುದರಿಂದ ಅದರ ಎಲುಷನ್ ಶಕ್ತಿಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ. ಅತ್ಯಂತ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ಎರಡು ಸಾವಯವ ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳೆಂದರೆ ಅಸಿಟೋನಿಟ್ರೈಲ್ ಮತ್ತು ಮೆಥನಾಲ್, ಆದಾಗ್ಯೂ ಅಸಿಟೋನಿಟ್ರೈಲ್ ಹೆಚ್ಚು ಜನಪ್ರಿಯ ಆಯ್ಕೆಯಾಗಿದೆ. ಐಸೊಪ್ರೊಪನಾಲ್ (2-ಪ್ರೊಪನಾಲ್) ಅನ್ನು ಅದರ ಬಲವಾದ ಎಲ್ಯೂಟಿಂಗ್ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳಿಂದಲೂ ಬಳಸಬಹುದು, ಆದರೆ ಅದರ ಬಳಕೆಯು ಅದರ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸ್ನಿಗ್ಧತೆಯಿಂದ ಸೀಮಿತವಾಗಿದೆ, ಇದು ಹೆಚ್ಚಿನ ಹಿಮ್ಮುಖ ಒತ್ತಡಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ಅಸಿಟೋನಿಟ್ರೈಲ್ ಮತ್ತು ಮೆಥನಾಲ್ ಎರಡೂ ಐಸೊಪ್ರೊಪನಾಲ್ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಸ್ನಿಗ್ಧತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ, ಆದಾಗ್ಯೂ 50:50% ನಷ್ಟು ಮೆಥನಾಲ್ಃ ನೀರಿನ ಮಿಶ್ರಣವು ತುಂಬಾ ಸ್ನಿಗ್ಧತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಬೆನ್ನು ಒತ್ತಡವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ. ಎಲ್ಲಾ ಮೂರು ದ್ರಾವಕಗಳು ಮೂಲಭೂತವಾಗಿ ಯುವಿ ಪಾರದರ್ಶಕವಾಗಿವೆ. ಮಾದರಿ ಘಟಕಗಳನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಯುವಿ ಡಿಟೆಕ್ಟರ್ಗಳು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವುದರಿಂದ ಸಾಮಾನ್ಯ ಹಿಮ್ಮುಖ ಹಂತದ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಗೆ ಇದು ನಿರ್ಣಾಯಕ ಲಕ್ಷಣವಾಗಿದೆ. ಕಡಿಮೆ ಯುವಿ ತರಂಗಾಂತರಗಳ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿರುವ ಇತರವುಗಳಿಗಿಂತ ಅಸಿಟೋನಿಟ್ರೈಲ್ ಹೆಚ್ಚು ಪಾರದರ್ಶಕವಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ಗಳಂತಹ ದುರ್ಬಲ ಅಥವಾ ಯಾವುದೇ ವರ್ಣತಂತುಗಳಿಲ್ಲದ (ಯುವಿ-ವಿಐಎಸ್ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಗುಂಪುಗಳು) ಅಣುಗಳನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸುವಾಗ ಇದನ್ನು ಬಹುತೇಕ ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚಿನ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ಗಳು ನೇರಳಾತೀತ ವರ್ಣಪಟಲದಲ್ಲಿ (ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 225 ಎನ್. ಎಂ. ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ) ಕಡಿಮೆ ತರಂಗಾಂತರಗಳಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಅಸಿಟೋನಿಟ್ರೈಲ್ ಇತರ ಸಾಮಾನ್ಯ ದ್ರಾವಕಗಳಿಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ತರಂಗಾಂತರಗಳಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆ ಹಿನ್ನೆಲೆ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ. ಚಲಿಸುವ ಹಂತದ pH ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳುವಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕೆಲವು ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳ ಆಯ್ಕೆಯನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಬಹುದು. ಅಮೈನ್ಗಳು, ಕಾರ್ಬಾಕ್ಸಿಲ್ಗಳು, ಫಾಸ್ಫೇಟ್ಗಳು, ಫಾಸ್ಫೋನೇಟ್ಗಳು, ಸಲ್ಫೇಟ್ಗಳು ಮತ್ತು ಸಲ್ಫೋನೇಟ್ಗಳಂತಹ ಅಯಾನೀಕರಿಸಿದ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಗುಂಪುಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ದ್ರಾವಕಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಮಾದರಿಗಳಿಗೆ, ಈ ಗುಂಪುಗಳ ಅಯಾನೀಕರಣವನ್ನು ಚಲನಶೀಲ ಹಂತದ ಬಫರ್ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನಿಯಂತ್ರಿಸಬಹುದು. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ದ್ರಾವಕಗಳಲ್ಲಿನ ಕಾರ್ಬಾಕ್ಸಿಲಿಕ್ ಗುಂಪುಗಳು ಚಲನಶೀಲ ಹಂತದ pH ಅವುಗಳ pKa ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಾದಂತೆ ಋಣಾತ್ಮಕ ಆವೇಶಕ್ಕೆ ಒಳಗಾಗುತ್ತವೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಇಡೀ ಅಣುವು ಹೆಚ್ಚು ಧ್ರುವೀಯವಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು a-ಧ್ರುವೀಯ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆ ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಈ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ, ಹಂತದ ಚಲನಶೀಲದ pH ಅನ್ನು 4-5 = pH ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿಸುವುದು (ಇದು ಕಾರ್ಬಾಕ್ಸಿಲಿಕ್ ಗುಂಪುಗಳಿಗೆ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ pKa ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಾಗಿದೆ) ಅವುಗಳ ಅಯಾನೀಕರಣವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಅವುಗಳ ಧಾರಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಇದಕ್ಕೆ ವಿರುದ್ಧವಾಗಿ, 4 ಕ್ಕಿಂತ ಕಡಿಮೆ pH ನಲ್ಲಿ ಚಲಿಸುವ ಹಂತವನ್ನು ಬಳಸುವುದರಿಂದ ಅವುಗಳ ಧಾರಣ ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಇದು ಅವುಗಳ ಅಯಾನೀಕರಣದ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಅವು ಕಡಿಮೆ ಧ್ರುವೀಯವಾಗುತ್ತವೆ. ಅದೇ ಪರಿಗಣನೆಗಳು ಮೂಲ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಗುಂಪುಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಪದಾರ್ಥಗಳಿಗೆ ಅನ್ವಯಿಸುತ್ತವೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಅಮೈನ್ಗಳು, ಅವುಗಳ ಪಿಕೆಎ ಶ್ರೇಣಿಗಳು ಸುಮಾರು 8 ಮತ್ತು ಅದಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಾಗಿರುತ್ತವೆ, ಚಲಿಸುವ ಹಂತದ ಪಿಹೆಚ್ ಹೆಚ್ಚಾದಂತೆ ಹೆಚ್ಚು ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ, 8 ಮತ್ತು ಅದಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಸಮೀಪಿಸುತ್ತದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಅವು ಕಡಿಮೆ ಅಯಾನೀಕರಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿರುತ್ತವೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಕಡಿಮೆ ಧ್ರುವೀಯವಾಗಿರುತ್ತವೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಹೆಚ್ಚಿನ pH ಸಂಚಾರಿ ಹಂತಗಳ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಸಿಲಿಕಾ ಜೆಲ್ ಆಧಾರಿತ ರಿವರ್ಸ್ಡ್ ಫೇಸ್ ಕಾಲಮ್ಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ pH 8 ಮತ್ತು ಅದಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಚಾರಿ ಹಂತಗಳೊಂದಿಗೆ ಬಳಸಲು ಸೀಮಿತವಾಗಿವೆ, ಆದ್ದರಿಂದ, ಈ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಅಮೈನ್ಗಳ ಧಾರಣದ ಮೇಲಿನ ನಿಯಂತ್ರಣವು ಸೀಮಿತವಾಗಿದೆ. ಆರ್ಪಿ-ಎಲ್ಸಿ ವಿಧಾನದ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯಲ್ಲಿ ಬಫರ್ ಪ್ರಕಾರದ ಆಯ್ಕೆಯು ಒಂದು ಪ್ರಮುಖ ಅಂಶವಾಗಿದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಇದು ಆಸಕ್ತಿಯ ವಿಶ್ಲೇಷಕರ ಧಾರಣ, ಆಯ್ಕೆ ಮತ್ತು ನಿರ್ಣಯದ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ. ಆರ್. ಪಿ.-ಎಚ್. ಪಿ. ಎಲ್. ಸಿ. ಗೆ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡುವಾಗ, ಪರಿಗಣಿಸಬೇಕಾದ ಹಲವಾರು ಅಂಶಗಳಿವೆ, ಅವುಗಳೆಂದರೆಃ ಸಂಚಾರಿ ಹಂತದ ಅಪೇಕ್ಷಿತ ಪಿ. ಎಚ್.: ಬಫರ್ಗಳು ಅವುಗಳ ಪಿ. ಕೆ. ಎ. ಮೌಲ್ಯದ ಸುತ್ತ ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿರುತ್ತವೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಸಂಚಾರಿ ಹಂತದ ಪಿ. ಎಚ್. ಗೆ ಹತ್ತಿರವಿರುವ ಪಿ. ಕೆ. ಎ. ಹೊಂದಿರುವ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡುವುದು ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ. ಸಾವಯವ ದ್ರಾವಕದಲ್ಲಿ ಬಫರ್ನ ಕರಗುವಿಕೆಃ ಚಲಿಸುವ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ಸಾವಯವ ದ್ರಾವಕದೊಂದಿಗೆ ಬಫರ್ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗಬೇಕು, ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಮೇಲೆ ತಿಳಿಸಲಾದ ಸಾಮಾನ್ಯ ಸಾವಯವ ದ್ರಾವಕಗಳು, ಅಸಿಟೋನಿಟ್ರೈಲ್, ಮೆಥನಾಲ್ ಮತ್ತು ಐಸೊಪ್ರೊಪನಾಲ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗಬೇಕು. ಬಫರ್ನ ಯುವಿ ಕಟ್-ಆಫ್ಃ ಯುವಿ ಪತ್ತೆಯ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ, ಬಫರ್ ಯು ಯುವಿ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರಬೇಕು, ಅದು ಆಸಕ್ತಿಯ ವಿಶ್ಲೇಷಕರ ಪತ್ತೆ ತರಂಗಾಂತರಕ್ಕಿಂತ ಕಡಿಮೆಯಿರುತ್ತದೆ. ಇದು ಬಫರ್ ಆ ವಿಶ್ಲೇಷಕರ ಪತ್ತೆಯಲ್ಲಿ ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪ ಮಾಡುವುದನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ. ಡಿಟೆಕ್ಟರ್ನೊಂದಿಗೆ ಬಫರ್ನ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಃ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ (ಎಂಎಸ್) ಅನ್ನು ಬಳಸುತ್ತಿದ್ದರೆ, ಬಫರ್ ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ (ಎಂಎಸ್) ಉಪಕರಣದೊಂದಿಗೆ ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳಬೇಕು. ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಲವಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವಂತಹ ಕೆಲವು ಬಫರ್ಗಳನ್ನು ಎಂಎಸ್ ಡಿಟೆಕ್ಟರ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಬಳಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ, ಏಕೆಂದರೆ ಅವು ಅಗತ್ಯವಿರುವಷ್ಟು ಅಸ್ಥಿರವಾಗಿರುವುದಿಲ್ಲ, ಮತ್ತು ಅವು ಅನಲೈಟ್ಸ್ ಅಯಾನೀಕರಣವನ್ನು ನಿಗ್ರಹಿಸುವ ಮೂಲಕ ಎಂಎಸ್ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಿಕೆಗೆ ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುತ್ತವೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಅವುಗಳನ್ನು ಎಂಎಸ್ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ. ಆರ್ಪಿ-ಎಚ್. ಪಿ. ಎಲ್. ಸಿ. ಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ಕೆಲವು ಸಾಮಾನ್ಯ ಬಫರ್ಗಳು ಹೀಗಿವೆಃ ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಬಫರ್ಗಳುಃ ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಬಫರ್ ಬಹುಮುಖಿಯಾಗಿದೆ ಮತ್ತು 3 ಪಿಕೆಎ ಮೌಲ್ಯಗಳಿಗೆ ಧನ್ಯವಾದಗಳು, ವ್ಯಾಪಕ ಶ್ರೇಣಿಯ ಪಿಹೆಚ್ ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಇದನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು. ಅವರು ಯುವಿ ಪತ್ತೆಗಾಗಿ ಬಹಳ ಕಡಿಮೆ ಯುವಿ ಹಿನ್ನೆಲೆಯನ್ನು ಸಹ ಹೊಂದಿದ್ದಾರೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಅವು ಎಂಎಸ್ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಸೂಕ್ತವಲ್ಲ. ಅಸಿಟೇಟ್ ಬಫರ್ಗಳು ಸಹ ಬಹುಮುಖವಾಗಿವೆ ಮತ್ತು ಆರ್ಪಿ-ಎಲ್ಸಿ ಯಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ಪಿಹೆಚ್ ಮೌಲ್ಯಗಳ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಬಳಸಬಹುದು. 220 ಎನ್ಎಂ ತರಂಗಾಂತರಕ್ಕಿಂತ ಕಡಿಮೆ ತರಂಗಾಂತರದಲ್ಲಿ ಯುವಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಿಕೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದಂತೆ, ಇದು ಅಷ್ಟು ಅನುಕೂಲಕರವಾಗಿಲ್ಲ. ಅಮೋನಿಯಂ ಅಸಿಟೇಟ್ ಬಫರ್ ಎಂ. ಎಸ್. ಫಾರ್ಮೇಟ್ ಬಫರ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆಃ ಫಾರ್ಮೇಟ್ ಬಫರ್ಗಳು 225 ಎನ್ಎಂ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಬಳಸುವ ಪಿಹೆಚ್ ಮತ್ತು ಸೀಮಿತ ಯುವಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಿಕೆಯ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಅಸಿಟೇಟ್ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಹೋಲುತ್ತವೆ. ಇದರ ಅಮೋನಿಯಂ ಅಸಿಟೇಟ್ ಕೂಡ ಎಂಎಸ್ನೊಂದಿಗೆ ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಅಮೋನಿಯಂ ಬಫರ್ಗಳು-ಅಮೋನಿಯಂ ಬಫರ್ಗಳು ಅಸ್ಥಿರವಾಗಿರುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಅವುಗಳನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಎಲ್ಸಿ-ಎಂಎಸ್ ವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಕಡಿಮೆ ಯುವಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಸಹ ಅವು ಸೀಮಿತವಾಗಿವೆ. ಚಾರ್ಜ್ ಮಾಡಲಾದ ವಿಶ್ಲೇಷಕಗಳನ್ನು ಅಯಾನು-ಜೋಡಣೆಯ ಮೂಲಕ (ಅಯಾನು-ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆ ಎಂದೂ ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ) ಹಿಮ್ಮುಖ-ಹಂತದ ಕಾಲಮ್ನಲ್ಲಿ ಬೇರ್ಪಡಿಸಬಹುದು. ಈ ತಂತ್ರವನ್ನು ರಿವರ್ಸ್ಡ್-ಫೇಸ್ ಅಯಾನ್-ಪೇಯರಿಂಗ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಎಲ್ಯೂಷನ್ ಅನ್ನು ಐಸೋಲೋಕ್ರಾಟಿಕ್ ಆಗಿ ಮಾಡಬಹುದು (ಬೇರ್ಪಡಿಸುವ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ನೀರಿನ-ದ್ರಾವಕ ಸಂಯೋಜನೆಯು ಬದಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ) ಅಥವಾ ದ್ರಾವಣದ ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿ (ಬೇರ್ಪಡಿಸುವ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ನೀರಿನ-ದ್ರಾವಕ ಸಂಯೋಜನೆಯು ಬದಲಾಗುತ್ತದೆ, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಧ್ರುವೀಯತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ). ಜಲೀಯ ಸಾಮಾನ್ಯ-ಹಂತದ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಉಲ್ಲೇಖಗಳು ಬಾಹ್ಯ ಕೊಂಡಿಗಳು ವಿವಿಧ ರೀತಿಯ ಹಿಮ್ಮುಖ ಹಂತಗಳನ್ನು ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತಗೊಳಿಸುವ ಕೋಷ್ಟಕಗಳು ಮತ್ತು ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕತೆಯ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಸಹ ನೋಡಿ.