Endospore staining
ಎಂಡೋಸ್ಪೋರ್ ಸ್ಟೇನಿಂಗ್ ಎಂಬುದು ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಎಂಡೋಸ್ಪೋರ್ಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾಲಜಿಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ತಂತ್ರವಾಗಿದೆ. ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದೊಳಗೆ, ಎಂಡೋಸ್ಪೋರ್ಗಳು ತೀವ್ರವಾದ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಬದುಕುಳಿಯಲು ಬಳಸುವ ರಕ್ಷಣಾತ್ಮಕ ರಚನೆಗಳಾಗಿವೆ, ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನವು ಅವುಗಳನ್ನು ರಾಸಾಯನಿಕಗಳಿಗೆ ಹೆಚ್ಚು ನಿರೋಧಕವಾಗಿಸುತ್ತದೆ. ಎಂಡೋಸ್ಪೋರ್ಗಳು ಕಡಿಮೆ ಅಥವಾ ಯಾವುದೇ ಎಟಿಪಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದಿಲ್ಲ, ಇದು ಅವು ಎಷ್ಟು ಸುಪ್ತವಾಗಿರಬಹುದು ಎಂಬುದನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಎಂಡೊಸ್ಪೋರ್ಗಳು ಕೆರಾಟಿನ್ ನಿಂದ ಮಾಡಲ್ಪಟ್ಟ ಕಠಿಣವಾದ ಹೊರ ಪದರವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ, ಇದು ಅವುಗಳನ್ನು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಡಿಎನ್ಎ ಮತ್ತು ಇತರ ರೂಪಾಂತರಗಳಿಂದ ರಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ. ಎಂಡೋಸ್ಪೋರ್ಗಳು ಸಸ್ಯಜನ್ಯ ಜೀವಕೋಶಗಳಾಗಿ ಪುನರುತ್ಪಾದನೆಗೊಳ್ಳಲು ಸಮರ್ಥವಾಗಿರುತ್ತವೆ, ಇದು ರಕ್ಷಣಾತ್ಮಕ ಸ್ವರೂಪವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಸರಳ ಕಲಬೆರಕೆ ಮತ್ತು ಕಡಲೆ ಕಲಬೆರಕೆಯಂತಹ ಸಾಮಾನ್ಯ ತಂತ್ರಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಕಲಬೆರಕೆ ಮಾಡಲು ಕಷ್ಟವಾಗುತ್ತದೆ. ಎಂಡೋಸ್ಪೋರ್ ಸ್ಟೇನಿಂಗ್ನ ವಿಶೇಷ ತಂತ್ರಗಳಲ್ಲಿ ಸ್ಕೇಫರ್-ಫುಲ್ಟನ್ ಸ್ಟೇನ್ ಮತ್ತು ಮೊಯ್ಲರ್ ಸ್ಟೇನ್ ಸೇರಿವೆ. ಎಂಡೋಸ್ಪೋರ್ಗಳ ಇತಿಹಾಸವನ್ನು ಮೊದಲ ಬಾರಿಗೆ 1876ರಲ್ಲಿ ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳಾದ ಕೊಹ್ನ್ ಮತ್ತು ಕೋಚ್ ಅವರು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಿದರು. ಮಿಥಿಲೀನ್ ನೀಲಿ, ಸಫ್ರಾನಿನ್ ಮತ್ತು ಕಾರ್ಬೋಲ್ ಫುಚ್ಸಿನ್ನಂತಹ ಸರಳ ಕಲೆಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಎಂಡೋಸ್ಪೋರ್ಗಳನ್ನು ಬಣ್ಣ ಮಾಡಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ ಎಂದು ಕಂಡುಬಂದಿದೆ. ಈ ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳು, ಇತರ ಕೆಲವರೊಂದಿಗೆ, ಬೀಜಕಗಳು ಸುಪ್ತವಾಗಿರುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಶಾಖಕ್ಕೆ ನಿರೋಧಕವಾಗಿರುತ್ತವೆ ಎಂದು ಕಂಡುಹಿಡಿದರು. 1900 ರ ದಶಕದ ಆರಂಭದಲ್ಲಿ, ಸಂಶೋಧಕರು ಈ ಎಂಡೋಸ್ಪೋರ್ಗಳಿಂದ ರೋಗ ಮತ್ತು ಸೋಂಕನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ಪರ್ಯಾಯ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸುತ್ತಿದ್ದರು. 1922ರಲ್ಲಿ, ಡಾರ್ನರ್ ಎಂಡೊಸ್ಪೋರ್ಗಳನ್ನು ಕಲೆಹಾಕುವ ವಿಧಾನವನ್ನು ಪ್ರಕಟಿಸಿದರು. ಎಂಡೊಸ್ಪೋರ್ಗಳು ಹಸಿರು ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ಸಸ್ಯಕ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಗುಲಾಬಿ ಬಣ್ಣದ ಕೆಂಪು ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿ ಕಾಣಿಸಿಕೊಳ್ಳುವ ಡಿಫರೆನ್ಷಿಯಲ್ ಸ್ಟೇನಿಂಗ್ ತಂತ್ರವನ್ನು ಅವರು ಕಂಡುಕೊಂಡರು. ಡಾರ್ನರ್ ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಶಾಖವನ್ನು ಒಂದು ಹಂತವಾಗಿ ಬಳಸಿದರು, ಆದರೆ ಇದು ಸಮಯ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತಿತ್ತು, ಆದ್ದರಿಂದ 1933 ರಲ್ಲಿ, ಶೇಫರ್ ಮತ್ತು ಫುಲ್ಟನ್ ತಮ್ಮ ವಿಧಾನವನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದರು. ಶೇಫರ್ ಮತ್ತು ಫುಲ್ಟನ್ ಅವರು ಬನ್ಸೆನ್ ಬರ್ನರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೂಲಕ ತಾಪನ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ವೇಗವಾಗಿ ಮಾಡಿದರು. ಈ ವಿಧಾನವು ಹೆಚ್ಚು ಪ್ರಯೋಜನಕಾರಿಯಾಗಿರಲಿಲ್ಲವಾದರೂ, ಇದು ಡಾರ್ನರ್ರ ವಿಧಾನಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಅನುಕೂಲಕರವಾಗಿತ್ತು. ಈ ಸುಧಾರಿತ ವಿಧಾನವು ತ್ವರಿತ ಮತ್ತು ಸುಲಭವಾದ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸಿತು ಮತ್ತು ಬೀಜಕಗಳು ಬಣ್ಣಗಳಿಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಒಳಗಾಗಲು ಅವಕಾಶ ಮಾಡಿಕೊಟ್ಟಿತು. ಇಂದಿಗೂ, ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾವನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡಲು ಸ್ಕೇಫರ್-ಫುಲ್ಟನ್ ಸ್ಟೇನ್ ಅನ್ನು ಇನ್ನೂ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಎಂಡೊಸ್ಪೋರ್ಗಳು ಒಣಗುವುದು ಮತ್ತು ಘನೀಕರಿಸುವಂತಹ ಅನೇಕ ಕಠಿಣ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ದಶಕಗಳವರೆಗೆ ಉಳಿಯಲು ಸಮರ್ಥವಾಗಿವೆ. ಏಕೆಂದರೆ ಎಂಡೋಸ್ಪೋರ್ ಒಳಗಿನ ಡಿಎನ್ಎ ದೀರ್ಘಕಾಲದವರೆಗೆ ಬದುಕಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚಿನ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾಗಳು ತಮ್ಮ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರತಿರೋಧದಿಂದಾಗಿ ಎಂಡೋಸ್ಪೋರ್ಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುವುದಿಲ್ಲ, ಆದರೆ ಕೆಲವು ಸಾಮಾನ್ಯ ಪ್ರಭೇದಗಳೆಂದರೆ ಬ್ಯಾಸಿಲಸ್ ಕುಲ (100ಕ್ಕೂ ಹೆಚ್ಚು ಪ್ರಭೇದಗಳು) ಮತ್ತು ಕ್ಲೊಸ್ಟ್ರಿಡಿಯಮ್ (160ಕ್ಕೂ ಹೆಚ್ಚು ಪ್ರಭೇದಗಳು). - ಆಂಥ್ರಾಕ್ಸ್ಗೆ ಕಾರಣವಾಗುವ ಬ್ಯಾಸಿಲಸ್ ಆಂಥ್ರಾಸಿಸ್-ಬ್ಯಾಸಿಲಸ್ ಸೆರಿಯಸ್-ಎರಡು ರೀತಿಯ ಆಹಾರ ವಿಷವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಬಹುದುಃ ಎಮೆಟಿಕ್ ಮತ್ತು ಅತಿಸಾರ-ಬ್ಯಾಸಿಲಸ್ ಸಬ್ಟಿಲಿಸ್-ಮಣ್ಣಿನಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುತ್ತದೆ-ಕ್ಲೋಸ್ಟ್ರಿಡಿಯಮ್ ಟೆಟಾನಿ,-ಲಾಕ್ ದವಡೆಯನ್ನು (ಟೆಟನಸ್) ಮತ್ತು ಕಟ್ಟುನಿಟ್ಟಾದ ಪಾರ್ಶ್ವವಾಯುಗೆ ಕಾರಣವಾಗುವ ಬೀಜಕ. ಕ್ಲೋಸ್ಟ್ರಿಡಿಯಮ್ ಬೊಟುಲಿನಮ್-ಸರಿಯಾಗಿ ಡಬ್ಬಿಯಲ್ಲಿ ತುಂಬಿರದ ಆಹಾರಗಳಲ್ಲಿ ಬೀಜಕಗಳು ಕಂಡುಬರುತ್ತವೆ. ಕ್ಲೊಸ್ಟ್ರಿಡಿಯಮ್ ಬೊಟುಲಿನಮ್ ಅನ್ನು ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ ಬೊಟೊಕ್ಸ್ ಎಂದು ಮಾರಾಟ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನರಗಳ ಪ್ರಸರಣವನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ. - ಕ್ಲೋಸ್ಟ್ರಿಡಿಯಮ್ ಡಿಫಿಸೈಲ್-ಕೊಲೊನ್ನಲ್ಲಿ ಉರಿಯೂತವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ, ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಇತರ ಪ್ರತಿಜೀವಕಗಳಿಂದ. ರೋಗಲಕ್ಷಣಗಳಲ್ಲಿ ಅತಿಸಾರ, ಹೊಟ್ಟೆ ನೋವು ಮತ್ತು ಜ್ವರ ಸೇರಿವೆ. ಗುರುತಿಸಬಹುದಾದ ಎಂಡೋಸ್ಪೋರ್ಗಳ ಪ್ರಕಾರಗಳಲ್ಲಿ ಮುಕ್ತ ಎಂಡೋಸ್ಪೋರ್ಗಳು, ಕೇಂದ್ರ ಎಂಡೋಸ್ಪೋರ್ಗಳು (ಜೀವಕೋಶದ ಮಧ್ಯಭಾಗ), ಉಪ-ಟರ್ಮಿನಲ್ (ಜೀವಕೋಶದ ತುದಿ ಮತ್ತು ಮಧ್ಯದ ನಡುವೆ) ಮತ್ತು ಟರ್ಮಿನಲ್ (ಜೀವಕೋಶದ ತುದಿ) ಎಂಡೋಸ್ಪೋರ್ಗಳು ಸೇರಿವೆ. ಟರ್ಮಿನಲ್ ಅಥವಾ ಸಬ್ಟರ್ಮಿನಲ್ಗಳ ಸಂಯೋಜನೆಯೂ ಇರಬಹುದು. ಜೀವಕೋಶಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಗಾತ್ರ, ಗೋಳಾಕಾರದ ಅಥವಾ ಅಂಡಾಕಾರದ (ಅಂಡಾಕಾರದ) ಆಕಾರ ಮತ್ತು ಅವು ಜೀವಕೋಶವು ಊದಿಕೊಂಡಂತೆ ಕಾಣುವಂತೆ ಮಾಡುತ್ತವೆಯೇ ಅಥವಾ ಇಲ್ಲವೇ ಎಂಬುದರ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಎಂಡೋಸ್ಪೋರ್ಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಬಹುದು. ಸ್ಕೇಫರ್-ಫುಲ್ಟನ್ ಕಲಬೆರಕೆ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ, ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾವನ್ನು ಆವಿಯಾಗಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮಲಾಕೈಟ್ ಹಸಿರು ಹೊಂದಿರುವ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಕಲೆಯನ್ನು ಬೀಜಕಕ್ಕೆ ಒತ್ತಾಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಬೀಜಕಗಳನ್ನು ಕಲೆಹಾಕಲು ಮಲಾಕೈಟ್ ಹಸಿರು ಬಣ್ಣವನ್ನು ಸ್ಲೈಡ್ನಲ್ಲಿ 15 ನಿಮಿಷ ಅಥವಾ ಅದಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಕಾಲ ಬಿಡಬಹುದು. ಬೀಜಕಗಳು ಅವುಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಯಿಂದಾಗಿ ಕಲೆಹಾಕಲು ಬಹಳ ಸಮಯ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಈ ಭೇದಾತ್ಮಕ ಕಲೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವಾಗ ಶಾಖವು ಮೋರ್ಡಂಟ್ ಆಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ. ಮಲಾಕೈಟ್ ಹಸಿರು ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಕರಗಬಲ್ಲದು ಆದ್ದರಿಂದ ಸಸ್ಯಕ ಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಬೀಜಕಗಳ ಮಾತೃ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರಿನಿಂದ ವರ್ಣರಹಿತಗೊಳಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಶೇಕಡಾ 0.5ರಷ್ಟು ಸಫ್ರಾನಿನ್ನೊಂದಿಗೆ ಪ್ರತಿಕೃತಿ ಮಾಡಬಹುದು. ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ, ಸರಿಯಾದ ಸ್ಮೀಯರ್ ಕೆಂಪು ಅಥವಾ ಗುಲಾಬಿ ಬಣ್ಣದ ಜೀವಕೋಶದೊಳಗೆ ಎಂಡೋಸ್ಪೋರ್ ಅನ್ನು ಹಸಿರು ಚುಕ್ಕೆಯಾಗಿ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಮೈಕೋಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಂ ಈ ರೀತಿಯ ಕಲೆ ಹಾಕುವ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಎದುರಿಸುವ ಒಂದು ಅಡಚಣೆಯಾಗಿದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಇದು ಯಾವುದೇ ಎಂಡೋಸ್ಪೋರ್ಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸದಿದ್ದರೂ ಸಹ ಹಸಿರು ಬಣ್ಣವನ್ನು ಕಲೆಹಾಕುತ್ತದೆ. ಇದು ಅದರ ಮೇಣದ ಕೋಶದ ಗೋಡೆಯ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿ, ಇದು ಡಿಕಲರೈಸಿಂಗ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ನಂತರವೂ ಮಲಾಕೈಟ್ ಹಸಿರು ಬಣ್ಣವನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಈ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ರೀತಿಯ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಬಗ್ಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಆಸಿಡ್-ಫಾಸ್ಟ್ ಸ್ಟೇನ್ ಎಂಬ ಬೇರೆ ರೀತಿಯ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಮಾಡಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ. ಕಲಬೆರಕೆಯ ವಿಧಾನವು ಅಸೆಪ್ಟಿಕ್ ತಂತ್ರವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, ಬಯಸಿದ ಜೀವಿಯೊಂದಿಗೆ ಶಾಖದ ಸ್ಥಿರ ಸ್ಲೈಡ್ ಅನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ ಮತ್ತು ಗಾಳಿಯಲ್ಲಿ ಒಣಗಿಸಿ. ಕುದಿಯುವ ನೀರಿನ ಸ್ನಾನವನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ. ಕಾಗದದ ಟವಲ್ನೊಂದಿಗೆ ಸ್ಲೈಡ್ ಅನ್ನು ಕವರ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ನೀರಿನ ಸ್ನಾನದ ಮೇಲೆ ಸ್ಟೇನಿಂಗ್ ರ್ಯಾಕ್ ಮೇಲೆ ಇರಿಸಿ. ಕಾಗದದ ಟವಲ್ ಅನ್ನು ಸ್ಲೈಡ್ ಮೇಲೆ ಮಲಾಕೈಟ್ ಗ್ರೀನ್ (ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಕಲೆ) ನಿಂದ ತುಂಬಿಸಿ. ಸ್ಲೈಡ್ ಅನ್ನು 5 ರಿಂದ 7 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಆವಿಯಾಗಿಸಿ. ಸಮಯ ಮುಗಿದ ನಂತರ, ಫೋರ್ಸೆಪ್ಸ್ ಬಳಸಿ ನೀರಿನ ಸ್ನಾನದಿಂದ ಸ್ಲೈಡ್ ಅನ್ನು ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ತೆಗೆದುಹಾಕಿ. ಪೇಪರ್ ಟವಲ್ ತೆಗೆದುಹಾಕಿ. ಸ್ಲೈಡ್ ಅನ್ನು ತಣ್ಣಗಾಗಲು ಬಿಡಿ, ಮತ್ತು ನಂತರ ಸ್ಟೇನಿಂಗ್ ರ್ಯಾಕ್ನ ಮೇಲೆ ಫೋರ್ಸೆಪ್ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ, ಹರಿವು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗುವವರೆಗೆ ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರಿನಿಂದ ನಿಧಾನವಾಗಿ ತೊಳೆಯಿರಿ (ಡಿಕೋಲರೈಸರ್). ಯಾವುದೇ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ನೀರನ್ನು ಸುರಿಯಿರಿ ಮತ್ತು ಒಂದು ನಿಮಿಷದ ಕಾಲ ಸಫ್ರಾನಿನ್ (ಕೌಂಟರ್ಸ್ಟೇನ್) ನೊಂದಿಗೆ ಸ್ಟೇನಿಂಗ್ ರ್ಯಾಕ್ ಮತ್ತು ಫ್ಲಡ್ನ ಮೇಲೆ ಸ್ಲೈಡ್ ಅನ್ನು ಇರಿಸಿ. ಯಾವುದೇ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಸಫ್ರಾನಿನ್ ಅನ್ನು ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರಿನಿಂದ ನಿಧಾನವಾಗಿ ತೊಳೆದುಕೊಳ್ಳಿ ಮತ್ತು ಎರಡೂ ಬದಿಗಳನ್ನು ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ಒಣಗಿಸಿ. ಸ್ಲೈಡ್ ಒಣಗಿದಾಗ, ತೈಲ ಇಮ್ಮರ್ಶನ್ ಆಬ್ಜೆಕ್ಟಿವ್ (100X) ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಸ್ಲೈಡ್ ಅನ್ನು ವೀಕ್ಷಿಸಿ. ಉಲ್ಲೇಖಗಳು ಸ್ಟೇನಿಂಗ್ ಮೈಕ್ರೋಬಯಾಲಜಿ ತಂತ್ರಗಳು ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾಲಜಿ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ