Miles and Misra method
ಮೈಲ್ಸ್ ಮತ್ತು ಮಿಶ್ರಾ ವಿಧಾನವು (ಅಥವಾ ಮೇಲ್ಮೈ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯವಾದ ಎಣಿಕೆ) ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಜೀವವಿಜ್ಞಾನದಲ್ಲಿ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಅಮಾನತು ಅಥವಾ ಏಕರೂಪದಲ್ಲಿ ವಸಾಹತು ರಚಿಸುವ ಘಟಕಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಬಳಸುವ ತಂತ್ರವಾಗಿದೆ. ಈ ತಂತ್ರವನ್ನು ಮೊದಲ ಬಾರಿಗೆ 1938ರಲ್ಲಿ ಆ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಎಲ್ಎಸ್ಎಚ್ಟಿಎಂನಲ್ಲಿ ಕೆಲಸ ಮಾಡುತ್ತಿದ್ದ ಮೈಲ್ಸ್, ಮಿಶ್ರಾ ಮತ್ತು ಇರ್ವಿನ್ ಅವರು ವಿವರಿಸಿದರು. ಮೈಲ್ಸ್ ಮತ್ತು ಮಿಶ್ರಾ ವಿಧಾನವು ನಿಖರವಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಪದಾರ್ಥಗಳು ಕ್ಯಾಲಿಬ್ರೇಟೆಡ್ ಡ್ರಾಪ್ ಪಿಪೆಟ್, ಅಥವಾ ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತ ಪಿಪೆಟ್, 20ಮಿ. ಲೀ. ನಷ್ಟು ಹನಿಗಳನ್ನು ತಲುಪಿಸುತ್ತದೆ. ಪೋಷಕಾಂಶ ಅಗರ್ ಅಥವಾ ಇತರ ಸೂಕ್ತ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಪೆಟ್ರಿ ಭಕ್ಷ್ಯಗಳು. ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಬಫರ್ಡ್ ಸಲೈನ್ (ಪಿಬಿಎಸ್) ಅಥವಾ ಇತರ ಸೂಕ್ತವಾದ ದ್ರಾವಕ. ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಅಮಾನತು ಅಥವಾ ಹೋಮೋಜೆನೇಟ್. ವಿಧಾನ ಇನಾಕ್ಯುಲಮ್/ಸಸ್ಪೆನ್ಷನ್ ಅನ್ನು 9x ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆಗೆ 1x ಅಮಾನತು ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಅನುಕ್ರಮವಾಗಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಪ್ರಮಾಣವು ತಿಳಿದಿಲ್ಲದಿದ್ದಾಗ, ಕನಿಷ್ಠ 10−8 ಗೆ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಬೇಕು. ಪ್ರತಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವ ಸರಣಿಗೆ ಮೂರು ಫಲಕಗಳು ಬೇಕಾಗುತ್ತವೆ, ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಕಾರಣಗಳಿಗಾಗಿ ಕನಿಷ್ಠ 3 ಎಣಿಕೆಗಳ ಸರಾಸರಿ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ. ಫಲಕಗಳ ಮೇಲ್ಮೈಯು ಸಾಕಷ್ಟು ಒಣಗಿರಬೇಕು, ಇದು 15-20 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ 20 ಮಿ. ಲೀ. ನಷ್ಟು ಕುಸಿತವನ್ನು ಹೀರಿಕೊಳ್ಳಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ. ಪ್ಲೇಟ್ಗಳನ್ನು ಸಮಾನ ವಲಯಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ (ಪ್ರತಿ ಪ್ಲೇಟ್ಗೆ 8 ವರೆಗೆ ಬಳಸಲು ಸಾಧ್ಯವಿದೆ). ವಲಯಗಳನ್ನು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ಪ್ರತಿ ವಲಯದಲ್ಲೂ, ಸೂಕ್ತವಾದ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ 1 x 20 μl ಅನ್ನು ಅಗರ್ನ ಮೇಲ್ಮೈಗೆ ಬೀಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಹನಿ ನೈಸರ್ಗಿಕವಾಗಿ ಹರಡಲು ಅವಕಾಶ ನೀಡುತ್ತದೆ. ಈ ವಿಧಾನದ ಮೂಲ ವಿವರಣೆಯಲ್ಲಿ 2.5 ಸೆಂ. ಮೀ. ಎತ್ತರದಿಂದ ಬೀಳುವಿಕೆಯು 1.5-2.0 ಸೆಂ. ಮೀ. ವಿಸ್ತೀರ್ಣದಲ್ಲಿ ಹರಡಿದೆ. ಅಗರ್ನ ಮೇಲ್ಮೈಯನ್ನು ಪಿಪೆಟ್ನಿಂದ ಸ್ಪರ್ಶಿಸುವುದನ್ನು ತಪ್ಪಿಸುವುದು ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ. 18-24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 37 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್ನಲ್ಲಿ (ಅಥವಾ ಬಳಸಿದ ಜೀವಿ ಮತ್ತು ಅಗರ್ ಅನ್ನು ಪರಿಗಣಿಸಿ ಸೂಕ್ತವಾದ ಕಾವು ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು) ತಿರುವು ಮತ್ತು ಕಾವು ನೀಡುವ ಮೊದಲು ಒಣಗಲು ಫಲಕಗಳನ್ನು ಬೆಂಚ್ ಮೇಲೆ ನೇರವಾಗಿ ಬಿಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪ್ರತಿ ವಲಯವನ್ನು ಬೆಳವಣಿಗೆಗಾಗಿ ಗಮನಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಕುಸಿತದ ಪ್ರದೇಶದ ಮೇಲೆ ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಸಣ್ಣ/ವಿಲೀನಗೊಂಡ ವಸಾಹತುಗಳ ಮೇಲೆ ಸಮೃದ್ಧ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಪೂರ್ಣ-ಗಾತ್ರದ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ವಸಾಹತುಗಳನ್ನು ಕಾಣಬಹುದಾದ ವಲಯದಲ್ಲಿ ವಸಾಹತುಗಳನ್ನು ಎಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ (ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 2-20 ವಸಾಹತುಗಳ ನಡುವಿನ ವಲಯಗಳನ್ನು ಎಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ). ಈ ಕೆಳಗಿನ ಸಮೀಕರಣವನ್ನು ಮೂಲ ಅಲಿಕೋಟ್/ಸ್ಯಾಂಪಲ್ನಿಂದ ಪ್ರತಿ ಎಂಎಲ್ಗೆ ಕಾಲೋನಿ ರೂಪಿಸುವ ಘಟಕಗಳ (ಸಿಎಫ್ಯು) ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆಃ ಪ್ರತಿ ಎಂಎಲ್ಗೆ ಸಿಎಫ್ಯು = ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವ x 50 x ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವ ಅಂಶಕ್ಕೆ ಸರಾಸರಿ ಸಂಖ್ಯೆಯ ವಸಾಹತುಗಳು. ಪ್ರಯೋಜನಗಳು ಇತರ ವಿಧಾನಗಳಿಗಿಂತ ವೇಗವಾಗಿ. ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುವ ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ. ಸಹ ನೋಡಿ ವಸಾಹತು-ರೂಪಿಸುವ ಘಟಕ ಉಲ್ಲೇಖಗಳು ಜೀವಕೋಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ತಂತ್ರಗಳು ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಜೀವವಿಜ್ಞಾನ ತಂತ್ರಗಳು