Tandem affinity purification
ಟ್ಯಾಂಡೆಮ್ ಅಫಿನಿಟಿ ಪ್ಯೂರಿಫಿಕೇಷನ್ (ಟಿ. ಎ. ಪಿ.) ಎಂಬುದು ಪ್ರೋಟೀನ್-ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಇಮ್ಯುನೊಪ್ರೆಸಿಪಿಟೇಶನ್ ಆಧಾರಿತ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ತಂತ್ರವಾಗಿದೆ. ಜೀವಕೋಶದಿಂದ ಆಸಕ್ತಿಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಮಾತ್ರ ಹೊರತೆಗೆಯುವುದು ಇದರ ಗುರಿಯಾಗಿದೆ, ಅದು ಸಂವಹನ ನಡೆಸುವ ಯಾವುದೇ ಇತರ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಕೀರ್ಣವಾಗಿದೆ. ಟಿಎಪಿ ಎರಡು ರೀತಿಯ ಅಗರೋಸ್ ಮಣಿಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಅದು ಆಸಕ್ತಿಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅದನ್ನು ಕೋಶದ ಲೈಸೇಟ್ನಿಂದ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮೂಲಕ ಬೇರ್ಪಡಿಸಬಹುದು, ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳನ್ನು ತೊಂದರೆಗೊಳಗಾಗದಂತೆ, ವಿಕೃತೀಕರಿಸದೆ ಅಥವಾ ಕಲುಷಿತಗೊಳಿಸದೆ. ಆಸಕ್ತಿಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಮಣಿಗಳೊಂದಿಗೆ ಬಂಧಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡಲು, ಅದನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಿದ ತುಂಡು, ಟಿಎಪಿ ಟ್ಯಾಗ್ನೊಂದಿಗೆ ಟ್ಯಾಗ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮೂಲ ಟಿಎಪಿ ವಿಧಾನವು ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿರುವ ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಸಿ-ಟರ್ಮಿನಸ್ಗೆ ಟಿಎಪಿ ಟ್ಯಾಗ್ನ ಸಮ್ಮಿಳನವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ. ಟಿಎಪಿ ಟ್ಯಾಗ್ ಮೂರು ಘಟಕಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆಃ ಕ್ಯಾಲ್ಮೋಡುಲಿನ್ ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ (ಸಿಬಿಪಿ), ಟಿಇವಿ ಪ್ರೋಟೀಸ್ ಸೀಳು ತಾಣ, ಮತ್ತು ಎರಡು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಎ ಡೊಮೇನ್ಗಳು, ಇದು ಐಜಿಜಿಗೆ ಬಿಗಿಯಾಗಿ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ (ಟಿಎಪಿ ಟ್ಯಾಗ್ ಅನ್ನು ಒಂದು ರೀತಿಯ ಎಪಿಟೋಪ್ ಟ್ಯಾಗ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ). ಟಿಎಪಿ ತತ್ವವನ್ನು ಮೊದಲು ಪ್ರಕಟಿಸಿದಾಗಿನಿಂದ ಅನೇಕ ಇತರ ಟ್ಯಾಗ್/ಮಣಿ/ಎಲುಯೆಂಟ್ ಸಂಯೋಜನೆಗಳನ್ನು ಪ್ರಸ್ತಾಪಿಸಲಾಗಿದೆ. ರೂಪಾಂತರ ಟ್ಯಾಗ್ಗಳು ಈ ಟ್ಯಾಗ್ ಅನ್ನು ಸಿ-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಟಿಎಪಿ ಟ್ಯಾಗ್ ಎಂದೂ ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಎನ್-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಆವೃತ್ತಿಯೂ ಸಹ ಲಭ್ಯವಿದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ವಿವರಿಸಬೇಕಾದ ವಿಧಾನವು ಸಿ-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಟ್ಯಾಗ್ನ ಬಳಕೆಯನ್ನು ಊಹಿಸುತ್ತದೆ, ಆದಾಗ್ಯೂ ವಿಧಾನದ ಹಿಂದಿನ ತತ್ವವು ಇನ್ನೂ ಒಂದೇ ಆಗಿರುತ್ತದೆ. 1990ರ ದಶಕದ ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ ಯುರೋಪಿಯನ್ ಮಾಲಿಕ್ಯುಲರ್ ಬಯಾಲಜಿ ಲ್ಯಾಬೊರೇಟರಿಯಲ್ಲಿ ಕೆಲಸ ಮಾಡುತ್ತಿದ್ದ ಸಂಶೋಧನಾ ತಂಡವು ಟಿಎಪಿ ಟ್ಯಾಗಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿದಿದೆ (ರಿಗಾಟ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 1999, ಪುಯಿಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2001) ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟಿಯೋಮ್ ಪರಿಶೋಧನೆಗೆ ಹೊಸ ಸಾಧನವಾಗಿ ಪ್ರಸ್ತಾಪಿಸಲಾಗಿದೆ. ಇದನ್ನು ತಂಡವು ಹಲವಾರು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳನ್ನು ನಿರೂಪಿಸಲು ಬಳಸಿತು (ರಿಗಾಟ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 1999, ಕ್ಯಾಸ್ಪರಿ ಮತ್ತು ಇತರರು. 1999, ಬೌವೆರೆಟ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2000, ಪುಯಿಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2001). ಈ ತಂತ್ರದ ಮೊದಲ ದೊಡ್ಡ ಪ್ರಮಾಣದ ಅನ್ವಯವು 2002 ರಲ್ಲಿ ನಡೆಯಿತು, ಇದರಲ್ಲಿ ಸಂಶೋಧನಾ ತಂಡವು ಪ್ರತಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗೆ ಟಿಎಪಿ ಟ್ಯಾಗ್ ಅನ್ನು ವ್ಯವಸ್ಥಿತವಾಗಿ ಟ್ಯಾಗ್ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಯೀಸ್ಟ್ ಕೋಶದಲ್ಲಿನ 230 ಕ್ಕೂ ಹೆಚ್ಚು ಬಹು-ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯ ದೃಶ್ಯ ನಕ್ಷೆಯನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲು ಪ್ರೋಟಿಯೋಮಿಕ್ಸ್ ಕಂಪನಿ ಸೆಲ್ಜೋಮ್ನ ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳ ಸಹಯೋಗದೊಂದಿಗೆ ಕೆಲಸ ಮಾಡಿತು. ಸಸ್ಯಗಳಲ್ಲಿ ಟಿ. ಎ. ಪಿ. ಟ್ಯಾಗ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೊದಲ ಯಶಸ್ವಿ ವರದಿಯು 2004ರಲ್ಲಿ ಬಂದಿತು (ರೋಹಿಲ್ಲಾ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2004). ಆತಿಥೇಯವು ಯೀಸ್ಟ್ ಆಗಿದ್ದರೆ, ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ಗಳ ಬಳಕೆಯು ಒಂದು ವಿಧಾನವಾಗಿರಬಹುದು, ಅದು ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಆತಿಥೇಯದೊಳಗೆ ಸಮ್ಮಿಳನ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಭಾಷಾಂತರಿಸುತ್ತದೆ. ಯಾವುದೇ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆಯಾದರೂ, ಸಮ್ಮಿಳನ ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಅದರ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಮಟ್ಟಕ್ಕೆ ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಹತ್ತಿರವಾಗಿ ನಿರ್ವಹಿಸುವುದು ಉತ್ತಮ. ಸಮ್ಮಿಳನ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಆತಿಥೇಯದೊಳಗೆ ಭಾಷಾಂತರಿಸಿದ ನಂತರ, ಅದು ಇತರ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂವಹನ ನಡೆಸುತ್ತದೆ, ಆದರ್ಶಪ್ರಾಯವಾಗಿ ಟಿಎಪಿ ಟ್ಯಾಗ್ನಿಂದ ಪ್ರಭಾವಿತವಾಗದ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ. ತರುವಾಯ, ಟ್ಯಾಗ್ ಮಾಡಲಾದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು (ಅದರ ಬಂಧಿಸುವ ಪಾಲುದಾರರೊಂದಿಗೆ) ಅಫಿನಿಟಿ ಆಯ್ಕೆ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹಿಂಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮೊದಲ ವಿಧದ ಮಣಿಗಳನ್ನು ಇಮ್ಯುನೊಗ್ಲಾಬ್ಯುಲಿನ್ ಜಿ ಯೊಂದಿಗೆ ಲೇಪಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಟಿಎಪಿ ಟ್ಯಾಗ್ನ ಹೊರಗಿನ ತುದಿಯಲ್ಲಿ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ. ಆಸಕ್ತಿಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಮಣಿಗಳನ್ನು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮೂಲಕ ಲೈಸೇಟ್ನಿಂದ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳನ್ನು ನಂತರ ಮಣಿಗಳಿಂದ ಕಿಣ್ವದಿಂದ (ಟಿಇವಿ ಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್) ಬಿಡುಗಡೆ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಮಧ್ಯದಲ್ಲಿರುವ ಟಿಇವಿ ಸೀಳು ಸ್ಥಳದಲ್ಲಿ ಟ್ಯಾಗ್ ಅನ್ನು ಮುರಿಯುತ್ತದೆ. ಈ ಮೊದಲ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಹಂತದ ನಂತರ, ಬಿಡುಗಡೆಯಾದ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳಿಗೆ ಎರಡನೇ ವಿಧದ ಮಣಿಗಳನ್ನು (ಕ್ಯಾಲ್ಮೋಡುಲಿನ್ನೊಂದಿಗೆ ಲೇಪಿಸಲಾಗಿದೆ) ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಇನ್ನೂ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳ ಮೇಲಿರುವ ಟಿಎಪಿ ಟ್ಯಾಗ್ನ ಉಳಿದ ತುಂಡಿಗೆ ಹಿಮ್ಮುಖವಾಗಿ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ. ಮಣಿಗಳನ್ನು ಮತ್ತೆ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಗಳಿಂದ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಮಾಲಿನ್ಯಕಾರಕಗಳನ್ನು ಮತ್ತು ಟಿಇವಿ ಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್ ಅನ್ನು ಮತ್ತಷ್ಟು ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಇ. ಜಿ. ಟಿ. ಎ. ಯಿಂದ ಮಣಿಗಳನ್ನು ಬಿಡುಗಡೆ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಆಸಕ್ತಿಯ ಪ್ರೋಟೀನ್, ಅದರ ಬೌಂಡ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪಾಲುದಾರರು ಮತ್ತು ಟಿ. ಎ. ಪಿ. ಟ್ಯಾಗ್ನ ಉಳಿದ ಸಿಬಿಪಿ ತುಣುಕನ್ನು ಮಾತ್ರ ಹೊಂದಿರುವ ಸ್ಥಳೀಯ ಎಲ್ಯುಯೇಟ್ ಅನ್ನು ಬಿಟ್ಟುಬಿಡುತ್ತದೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಬಂಧಿಸುವ ಪಾಲುದಾರರನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸ್ಥಳೀಯ ಎಲ್ಯುಯೇಟ್ ಅನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಬಹುದು. ಪ್ರಯೋಜನಗಳು ಈ ವಿಧಾನದ ಒಂದು ಪ್ರಯೋಜನವೆಂದರೆ ಸಂಕೀರ್ಣ ಸಂಯೋಜನೆಯ ಬಗ್ಗೆ ಪೂರ್ವ ಜ್ಞಾನವಿಲ್ಲದೆ ವಿವೋದಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪಾಲುದಾರರನ್ನು ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕವಾಗಿ ನಿರ್ಧರಿಸಬಹುದು. ಇದನ್ನು ಕಾರ್ಯಗತಗೊಳಿಸುವುದು ಸಹ ಸರಳವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಇಳುವರಿಯನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡುವಲ್ಲಿನ ಅಡೆತಡೆಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದು ಗುರಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಮಾಲಿನ್ಯವಾಗಿದೆ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ನಮಗೆ ಅದರ ಬಗ್ಗೆ ಯಾವುದೇ ಪೂರ್ವ ಜ್ಞಾನವಿಲ್ಲದಿದ್ದಾಗ. ಟಿಎಪಿ ಗುರಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾದ ವಿಧಾನವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ. ಸತತ 2 ಅಫಿನಿಟಿ ಶುದ್ಧೀಕರಣಗಳ ನಂತರ, ಮಾಲಿನ್ಯಕಾರಕಗಳನ್ನು ಎಲ್ಯೂಟೇಟ್ನಲ್ಲಿ ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳುವ ಅವಕಾಶವು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ. ಅನಾನುಕೂಲಗಳು ಆದಾಗ್ಯೂ, ಪ್ರೋಟೀನ್ಗೆ ಸೇರಿಸಲಾದ ಟ್ಯಾಗ್ ಹೊಸ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಅದರ ಸಂವಹನ ಪಾಲುದಾರರಿಗೆ ಬಂಧಿಸುವುದನ್ನು ಅಸ್ಪಷ್ಟಗೊಳಿಸುವ ಸಾಧ್ಯತೆಯೂ ಇದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ಟ್ಯಾಗ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟಗಳ ಮೇಲೂ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಬಹುದು. ಮತ್ತೊಂದೆಡೆ, ಟ್ಯಾಗ್ ಸಹ ಅಫಿನಿಟಿ ಮಣಿಗಳಿಗೆ ಸಾಕಷ್ಟು ಒಡ್ಡಿಕೊಳ್ಳದಿರಬಹುದು, ಆದ್ದರಿಂದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಓರೆಯಾಗಿಸುತ್ತದೆ. ಟಿಇವಿ ಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್ನಿಂದ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳ ಸೀಳುವಿಕೆಯ ಸಾಧ್ಯತೆಯೂ ಇರಬಹುದು, ಆದಾಗ್ಯೂ ಟಿಇವಿ ಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್ನ ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಗಮನಿಸಿದರೆ ಇದು ಆಗಾಗ್ಗೆ ಸಂಭವಿಸುವ ಸಾಧ್ಯತೆಯಿಲ್ಲ. ಈ ವಿಧಾನವು ಕನಿಷ್ಠ 2 ಸುತ್ತುಗಳ ತೊಳೆಯುವಿಕೆಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವುದರಿಂದ, ಯೀಸ್ಟ್ ಎರಡು-ಹೈಬ್ರಿಡ್ ವಿಧಾನಕ್ಕಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿ ಅಥವಾ ಫೋಟೋ-ರಿಯಾಕ್ಟಿವ್ ಅಮೈನೋ ಆಸಿಡ್ ಅನಲಾಗ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ವಿವೋ ಕ್ರಾಸ್ಲಿಂಕಿಂಗ್ನಲ್ಲಿ, ಇದು ಅಸ್ಥಿರ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ಸೂಕ್ತವಲ್ಲ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಇದು ಸ್ಥಿರವಾದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ಉತ್ತಮ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಕೀರ್ಣವನ್ನು ಎಷ್ಟು ಬಾರಿ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಮೂಲಕ ವಿವಿಧ ಹಂತದ ತನಿಖೆಗೆ ಅವಕಾಶ ನೀಡುತ್ತದೆ. 2002ರಲ್ಲಿ, ಬಹು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳನ್ನು ನಿರೂಪಿಸುವ ಮೂಲಕ ಯೀಸ್ಟ್ನ ಪ್ರೋಟಿಯೋಮಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ವ್ಯವಸ್ಥಿತವಾಗಿ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲು ದೊಡ್ಡ ಪ್ರಮಾಣದ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿಯೊಂದಿಗೆ ಟಿಎಪಿ ಟ್ಯಾಗ್ ಅನ್ನು ಮೊದಲ ಬಾರಿಗೆ ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಅಧ್ಯಯನವು 491 ಸಂಕೀರ್ಣಗಳನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿತು, ಅವುಗಳಲ್ಲಿ 257 ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಹೊಸವು. ಉಳಿದವರು ಇತರ ಸಂಶೋಧನೆಗಳಿಂದ ಪರಿಚಿತರಾಗಿದ್ದರು, ಆದರೆ ಈಗ ವಾಸ್ತವಿಕವಾಗಿ ಅವರೆಲ್ಲರೂ ಹೊಸ ಘಟಕಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದು ಕಂಡುಬಂದಿದೆ. ಅವರು ಸಂಕೀರ್ಣ ಜಾಲದಲ್ಲಿ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಎಲ್ಲಾ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಘಟಕಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ನಕ್ಷೆಯನ್ನು ರಚಿಸಿದರು. ಇತರ ಅನೇಕ ಪ್ರೋಟಿಯೋಮಿಕ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳು ಟಿಎಪಿ ಟ್ಯಾಗ್ನ ಬಳಕೆಯನ್ನು ಸಹ ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತವೆ. ಇ. ಎಂ. ಬಿ. ಓ. (ಡಿಜೆಂಬೊವ್ಸ್ಕಿ, 2004) ನಡೆಸಿದ ಸಂಶೋಧನೆಯು ಪರಮಾಣು ಪೂರ್ವ-ಎಂ. ಆರ್. ಎನ್. ಎ. ಧಾರಣ ಮತ್ತು ವಿಭಜನೆಗೆ ಅಗತ್ಯವಾದ ಹೊಸ ಸಂಕೀರ್ಣವನ್ನು ಗುರುತಿಸಿದೆ. ಅವರು ಇತರ 3 ಉಪಘಟಕಗಳನ್ನು (ಸ್ನೂ17ಪಿ, ಬಡ್13ಪಿ ಮತ್ತು ಪಿಎಂಎಲ್1ಪಿ) ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಹೊಸ ಟ್ರೈಮೆರಿಕ್ ಸಂಕೀರ್ಣವನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ್ದಾರೆ ಮತ್ತು ಈ ಉಪಘಟಕಗಳು ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಗೆ ಅನಿವಾರ್ಯವಲ್ಲ ಆದರೆ ಪೂರ್ವ-ಎಂಆರ್ಎನ್ಎಯ ದಕ್ಷ ಸ್ಪ್ಲೈಸಿಂಗ್ (ಇಂಟ್ರಾನ್ಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುವುದು) ಗೆ ಅಗತ್ಯವೆಂದು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದಾರೆ. 2006ರಲ್ಲಿ, ಫ್ಲೀಷರ್ ಮತ್ತು ಇತರರು. ಯುಕಾರ್ಯೋಟಿಕ್ ರೈಬೋಸೋಮಲ್ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳನ್ನು ವ್ಯವಸ್ಥಿತವಾಗಿ ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ. ಅವರು ಯೀಸ್ಟ್ ರೈಬೋಸೋಮಲ್ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಬಹುಮುಖಿ ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ ಪ್ರೋಟಿಯೋಮಿಕ್ ಪರದೆಗಳನ್ನು ಬಳಸಿದರು ಮತ್ತು ನಂತರ ಈ ಎಲ್ಲಾ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳನ್ನು ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಜೋಡಿಸಲು ಟಿಎಪಿ ಟ್ಯಾಗಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿದರು. ಇತರ ಎಪಿಟೋಪ್-ಟ್ಯಾಗ್ ಸಂಯೋಜನೆಗಳು ಬಹು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳ ಟಂಡೆಮ್-ಅಫಿನಿಟಿ ಶುದ್ಧೀಕರಣದ ತತ್ವವು ರಿಗಾಟ್ ಮತ್ತು ಇತರರು ಮೂಲ ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಿದ ಸಿಬಿಪಿ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಎ ಟ್ಯಾಗ್ಗಳ ಸಂಯೋಜನೆಗೆ ಸೀಮಿತವಾಗಿಲ್ಲ. (1999). ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಸಸ್ತನಿ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಂದ ಹಲವಾರು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲು ನಕತಾನಿಯ ಗುಂಪು 2000 ರಿಂದ ಫ್ಲಾಗ್-ಮತ್ತು ಎಚ್ಎ-ಟ್ಯಾಗ್ಗಳ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಬಳಸುತ್ತಿದೆ. ಟಿಎಪಿ ತತ್ವವನ್ನು ಪ್ರಕಟಿಸಿದಾಗಿನಿಂದ ಅನೇಕ ಇತರ ಟ್ಯಾಗ್ ಸಂಯೋಜನೆಗಳನ್ನು ಪ್ರಸ್ತಾಪಿಸಲಾಗಿದೆ. ಉಲ್ಲೇಖಗಳು ಜೀವರಾಸಾಯನಿಕ ಬೇರ್ಪಡಿಸುವಿಕೆ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳು ಪ್ರೋಟೀನ್-ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪರಸ್ಪರ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳು