Solid-phase reversible immobilization
ಘನ-ಹಂತದ ರಿವರ್ಸಿಬಲ್ ಇಮ್ಮೊಬಿಲೈಸೇಶನ್, ಅಥವಾ ಎಸ್. ಪಿ. ಆರ್. ಐ, ದ್ರಾವಣದಿಂದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸುವ ಒಂದು ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ. ಇದು ಸಿಲಿಕಾ-ಅಥವಾ ಕಾರ್ಬಾಕ್ಸಿಲ್-ಲೇಪಿತ ಪ್ಯಾರಾಮ್ಯಾಗ್ನೆಟಿಕ್ ಮಣಿಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಪಾಲಿಥಿಲೀನ್ ಗ್ಲೈಕಾಲ್ ಮತ್ತು ಉಪ್ಪಿನ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳೊಂದಿಗೆ ಹಿಮ್ಮುಖವಾಗಿ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ. ಎಸ್. ಪಿ. ಆರ್. ಐ. ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದ ಸಾಮಾನ್ಯ ಅನ್ವಯವೆಂದರೆ ಅನುಕ್ರಮ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗಾಗಿ ಪಿ. ಸಿ. ಆರ್. ನಿಂದ ವರ್ಧಿಸಲಾದ ಡಿ. ಎನ್. ಎ. ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸುವುದುಃ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಶುದ್ಧೀಕರಣದಲ್ಲಿ ಬಳಸುವ ಎಸ್ಪಿಆರ್ಐ ಮಣಿಗಳು ಸಿಲಿಕಾ ಅಥವಾ ಕಾರ್ಬಾಕ್ಸಿಲ್ ಗುಂಪುಗಳೊಂದಿಗೆ ಲೇಪಿತವಾದ ಪ್ಯಾರಾಮ್ಯಾಗ್ನೆಟಿಕ್ ಮಣಿಗಳಾಗಿವೆ. ಪಾಲಿಥಿಲೀನ್ ಗ್ಲೈಕಾಲ್ ಮತ್ತು ಲವಣಗಳ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ದ್ರಾವಣಗಳಲ್ಲಿ ಮಣಿಗಳನ್ನು ಮರುಹೊಂದಿಸಿದಾಗ, ಅವು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳಿಗೆ ಹಿಮ್ಮುಖವಾಗಿ ಬಂಧಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ. ಈ ಬಂಧವು ಗಾತ್ರದ ಆಯ್ಕೆಯಾಗಿದೆ, ಇದರಲ್ಲಿ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳ ಉದ್ದವಾದ ಪಾಲಿಮರ್ಗಳು ಚಿಕ್ಕದಾದವುಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಬಂಧಿಸುತ್ತವೆ. ಎಸ್ಪಿಆರ್ಐ ಶುದ್ಧೀಕರಣವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಈ ಕೆಳಗಿನ ಹಂತಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆಃ ಪಾಲಿಥಿಲೀನ್ ಗ್ಲೈಕಾಲ್ ಮತ್ತು ಸೋಡಿಯಂ ಕ್ಲೋರೈಡ್ನ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಎಸ್ಪಿಆರ್ಐ ಮಣಿಗಳನ್ನು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳ ಮಾದರಿಯೊಂದಿಗೆ ಬೆರೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳು ಮಣಿಗಳೊಂದಿಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತವೆ. ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಆಯಸ್ಕಾಂತೀಯ ಕ್ಷೇತ್ರದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್-ಆಸಿಡ್ ಬೌಂಡ್ ಮಣಿಗಳನ್ನು ದ್ರಾವಣದಿಂದ ಬೇರ್ಪಡಿಸುತ್ತದೆ. ದ್ರಾವಣವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಮಣಿಗಳನ್ನು ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಶೇಕಡಾ 80ರಷ್ಟು ಎಥೆನಾಲ್ನಿಂದ ಅನೇಕ ಬಾರಿ ತೊಳೆದುಕೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ. ಉಳಿದಿರುವ ಎಥೆನಾಲ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಮಣಿಗಳನ್ನು ಒಣಗಲು ಬಿಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮಣಿಗಳನ್ನು ಕಾಂತೀಯ ಕ್ಷೇತ್ರದಿಂದ ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ಎಲ್ಯೂಷನ್ ಬಫರ್ನಲ್ಲಿ ಮರುಹೊಂದಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಮಣಿಗಳಿಂದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳನ್ನು ಬಿಡುಗಡೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಮತ್ತೊಮ್ಮೆ ಆಯಸ್ಕಾಂತೀಯ ಕ್ಷೇತ್ರದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಮಣಿಗಳನ್ನು ದ್ರಾವಣದಿಂದ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈಗ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕೆಳಭಾಗದ ಅನ್ವಯಗಳಿಗೆ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ವಿಧಾನಗಳು ಡಿ. ಎನ್. ಎ. ಅನುಕ್ರಮ ಘನ-ಹಂತದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ ಉಲ್ಲೇಖಗಳು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳನ್ನು ಸಹ ನೋಡಿ.