PBR322
ಪಿಬಿಆರ್322 ಒಂದು ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಆಗಿದ್ದು, ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾದ ಮೊದಲ ಇ. ಕೋಲಿ ಅಬೀಜ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿ ವಾಹಕಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾಗಿದೆ. 1977 ರಲ್ಲಿ ಸ್ಯಾನ್ ಫ್ರಾನ್ಸಿಸ್ಕೋದ ಕ್ಯಾಲಿಫೋರ್ನಿಯಾ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾಲಯದ ಹರ್ಬರ್ಟ್ ಬೋಯರ್ ಅವರ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದಲ್ಲಿ ರಚಿಸಲಾದ ಇದಕ್ಕೆ ಪೋಸ್ಟ್ ಡಾಕ್ಟರಲ್ ಸಂಶೋಧಕ ಫ್ರಾನ್ಸಿಸ್ಕೊ ಬೊಲಿವರ್ ಜಪಾಟಾ ಮತ್ತು ರೇಮಂಡ್ ಎಲ್. ರೊಡ್ರಿಗಜ್ ಅವರ ಹೆಸರನ್ನು ಇಡಲಾಗಿದೆ. ಪಿ ಎಂದರೆ "ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್", ಮತ್ತು ಬಿಆರ್ ಎಂದರೆ "ಬೊಲಿವಾರ್" ಮತ್ತು "ರೊಡ್ರಿಗಜ್". ಪಿಬಿಆರ್322 ಉದ್ದದಲ್ಲಿ 4361 ಬೇಸ್ ಜೋಡಿಗಳು ಮತ್ತು ಎರಡು ಪ್ರತಿಜೀವಕ ನಿರೋಧಕ ವಂಶವಾಹಿಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ-ಜೀನ್ ಬ್ಲಾ ಆಂಪಿಸಿಲಿನ್ ಪ್ರತಿರೋಧ (ಆಂಪಿಆರ್) ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಎನ್ಕೋಡಿಂಗ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಜೀನ್ ಟಿಟಿಎ ಟೆಟ್ರಾಸೈಕ್ಲಿನ್ ಪ್ರತಿರೋಧ (ಟಿಟಿಆರ್) ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಎನ್ಕೋಡಿಂಗ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಇದು pMB1 ನ ಪ್ರತಿಕೃತಿಯ ಮೂಲವನ್ನು ಮತ್ತು ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ನಕಲು ಸಂಖ್ಯೆಯ ನಿರ್ಬಂಧಕವನ್ನು ಸಂಕೇತಿಸುವ ರೋಪ್ ಜೀನ್ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ನಲ್ವತ್ತಕ್ಕೂ ಹೆಚ್ಚು ನಿರ್ಬಂಧಿತ ಕಿಣ್ವಗಳಿಗೆ ವಿಶಿಷ್ಟ ನಿರ್ಬಂಧಿತ ತಾಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಈ ನಲವತ್ತು ತಾಣಗಳಲ್ಲಿ ಹನ್ನೊಂದು ತಾಣಗಳು ಟಿ. ಟಿ. ಆರ್ ಜೀನ್ನಲ್ಲಿವೆ. ಟೆಟ್ರ್ ಜೀನ್ನ ಪ್ರವರ್ತಕರೊಳಗೆ ಹಿನ್ದ್ III ಮತ್ತು ಕ್ಲೈ ಎಂಬ ನಿರ್ಬಂಧಿತ ಕಿಣ್ವಗಳಿಗೆ ಎರಡು ತಾಣಗಳಿವೆ. ಈ ಪ್ರತಿಜೀವಕ ನಿರೋಧಕ ವಂಶವಾಹಿಗಳ ಮೂಲವಾದ ಆಂಪಿಆರ್ gene.The ಒಳಗೆ ಆರು ಪ್ರಮುಖ ನಿರ್ಬಂಧಿತ ತಾಣಗಳಿವೆ, ಅವು ಟೆಟ್ರಾಸೈಕ್ಲಿನ್ಗೆ ಪಿಎಸ್ಸಿ101 ಮತ್ತು ಆಂಪಿಸಿಲಿನ್ಗೆ ಆರ್ಎಸ್ಎಫ್2124 ಆಗಿವೆ. ವೃತ್ತಾಕಾರದ ಅನುಕ್ರಮವು 0 ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಇಕೋಆರ್ಐ ಸೈಟ್ನ ಮಧ್ಯದಲ್ಲಿದೆ ಮತ್ತು ಟಿಟಿಆರ್ ಜೀನ್ನ ಮೂಲಕ ಎಣಿಕೆ ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ನಾವು ಆಂಪಿಸಿಲಿನ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಬೇಕಾದರೆ, ನಾವು ಪಿ. ಎಸ್. ಟಿ. ಐ ವಿರುದ್ಧ ನಿರ್ಬಂಧದ ಎಂಡೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಅಥವಾ ಆಣ್ವಿಕ ಕತ್ತರಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಬೇಕು ಮತ್ತು ನಂತರ ಪಿಬಿಆರ್ 322 ಆಂಪಿಸಿಲಿನ್ಗೆ ನಿರೋಧಕವಾಗುತ್ತದೆ. ಅದೇ ರೀತಿಯ ಇನ್ಸರ್ಷನಲ್ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಟೆಟ್ರಾಸೈಕ್ಲಿನ್ಗೆ ಅನ್ವಯಿಸಬಹುದು. ಆಂಪಿಆರ್ ವಂಶವಾಹಿಯು ಪೆನ್ಸಿಲಿನ್ ಬೀಟಾ-ಲ್ಯಾಕ್ಟಮೇಸ್ ಆಗಿದೆ. ಪ್ರವರ್ತಕಗಳಾದ ಪಿ1 ಮತ್ತು ಪಿ3ಗಳು ಬೀಟಾ-ಲ್ಯಾಕ್ಟಮೇಸ್ ವಂಶವಾಹಿಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿವೆ. ಪಿ3 ನೈಸರ್ಗಿಕ ಪ್ರವರ್ತಕವಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಪಿಬಿಆರ್322 ಅನ್ನು ರಚಿಸಲು ಎರಡು ವಿಭಿನ್ನ ಡಿಎನ್ಎ ತುಣುಕುಗಳ ಬಂಧನದಿಂದ ಪಿ1 ಅನ್ನು ಕೃತಕವಾಗಿ ರಚಿಸಲಾಗಿದೆ. ಪಿ2ಯು ಪಿ1ನ ಅದೇ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿದೆ, ಆದರೆ ಇದು ವಿರುದ್ಧ ಎಳೆಗಳಲ್ಲಿದೆ ಮತ್ತು ಟೆಟ್ರಾಸೈಕ್ಲಿನ್ ಪ್ರತಿರೋಧ ಜೀನ್ನ ದಿಕ್ಕಿನಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿಲೇಖನವನ್ನು ಪ್ರಾರಂಭಿಸುತ್ತದೆ. ಹಿನ್ನೆಲೆ ಆರಂಭಿಕ ಅಬೀಜ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿಯ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ನೈಸರ್ಗಿಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ಗಳಾದ ಕೋಲ್ಇ1 ಮತ್ತು ಪಿಎಸ್ಸಿ101 ಬಳಸಿ ನಡೆಸಬಹುದು. ಈ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ಗಳು ಅದರ ಅನುಕೂಲಗಳು ಮತ್ತು ಅನಾನುಕೂಲಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರಬಹುದು. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಕೋಲ್ಇ1 ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಮತ್ತು ಅದರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಹೆಚ್ಚಿನ ನಕಲು ಸಂಖ್ಯೆಯ ಪ್ರಯೋಜನವನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ ಮತ್ತು ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ನ ಕ್ಲೋರಾಮ್ಫೆನಿಕೋಲ್ ವರ್ಧನೆಯು ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ನ ಹೆಚ್ಚಿನ ಇಳುವರಿಯನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ, ಆದಾಗ್ಯೂ ಕೊಲಿಸಿನ್ ಇ1ಗೆ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣೆಗಾಗಿ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ಮಾಡುವುದು ತಾಂತ್ರಿಕವಾಗಿ ಸರಳವಲ್ಲ. ಸಾಲ್ಮೊನೆಲ್ಲಾ ಪನಾಮಾದ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಪಿಎಸ್ಸಿ 101, ಟೆಟ್ರಾಸೈಕ್ಲಿನ್ ಪ್ರತಿರೋಧವನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ, ಇದು ಪ್ರತಿಜೀವಕ ಆಯ್ಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಸರಳವಾದ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಇದು ಕಡಿಮೆ ನಕಲು ಸಂಖ್ಯೆಯ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಆಗಿದ್ದು ಇದು ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ನ ಹೆಚ್ಚಿನ ಇಳುವರಿಯನ್ನು ನೀಡುವುದಿಲ್ಲ. ಮತ್ತೊಂದು ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್, ಆರ್ಎಸ್ಎಫ್ 2124, ಇದು ಕೋಲ್ಇ1ನಿಂದ ವ್ಯುತ್ಪನ್ನವಾಗಿದೆ, ಇದು ಆಂಪಿಸಿಲಿನ್ ಪ್ರತಿರೋಧವನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ ಆದರೆ ದೊಡ್ಡದಾಗಿದೆ. ಕ್ಲೋನಿಂಗ್ ಉದ್ದೇಶಕ್ಕಾಗಿ ಸೂಕ್ತವಾದ ಒಂದನ್ನು ರಚಿಸಲು ಅನೇಕ ಇತರ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ಗಳನ್ನು ಕೃತಕವಾಗಿ ನಿರ್ಮಿಸಲಾಯಿತು, ಮತ್ತು ಪಿಬಿಆರ್ 322 ಅನೇಕರಿಂದ ಬಹುಮುಖವೆಂದು ಕಂಡುಬಂದಿದೆ ಮತ್ತು ಆದ್ದರಿಂದ ಇದನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಜನಪ್ರಿಯವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಇದು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಬಹುದಾದ ಗುರುತುಗಳಾಗಿ ಎರಡು ಪ್ರತಿಜೀವಕ ನಿರೋಧಕ ವಂಶವಾಹಿಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು ಅಬೀಜ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿ ವಾಹಕವಾಗಿ ಸೂಕ್ತವಾದ ಹಲವಾರು ಅನುಕೂಲಕರ ಅನನ್ಯ ನಿರ್ಬಂಧಿತ ತಾಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಅನ್ನು 3 ಪ್ರಮುಖ ಮೂಲಗಳಿಂದ ಆನುವಂಶಿಕ ವಸ್ತುಗಳೊಂದಿಗೆ ನಿರ್ಮಿಸಲಾಗಿದೆ-ಪಿಎಸ್ಸಿ 101 ರ ಟೆಟ್ರಾಸೈಕ್ಲಿನ್ ಪ್ರತಿರೋಧ ಜೀನ್, ಆರ್ಎಸ್ಎಫ್ 2124 ರ ಆಂಪಿಸಿಲಿನ್ ಪ್ರತಿರೋಧ ಜೀನ್ ಮತ್ತು ಕೋಲ್ಇ 1 ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ನ ಹತ್ತಿರದ ಸಂಬಂಧಿಯಾದ ಪಿಎಂಬಿ 1 ನ ಪ್ರತಿಕೃತಿ ಅಂಶಗಳು. ಪಿಬಿಆರ್322ಅನ್ನು ಆಧರಿಸಿದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಇತರ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ಗಳನ್ನು ವಿವಿಧ ಉದ್ದೇಶಗಳಿಗಾಗಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ. ಉದಾಹರಣೆಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ಗಳ ಪಿ. ಯು. ಸಿ ಸರಣಿಗಳು ಸೇರಿವೆ. ಎಕ್ಸ್ಟ್ರಾಕ್ರೋಮೋಸೋಮಲ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮತ್ತು ನೌಕೆಯ ವಾಹಕಗಳಿಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವಾಹಕಗಳು ಪ್ರತಿಕೃತಿಯ ಮೂಲವಾದ ಪಿಬಿಆರ್322 ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ, ಮತ್ತು ಡಿಬಿಆರ್322 ತುಣುಕುಗಳು ಇಂಟ್ರಾಸ್ಪೀಸಿಸ್ ನೌಕೆಯ ಅಥವಾ ಬೈನರಿ ವಾಹಕಗಳ ನಿರ್ಮಾಣದಲ್ಲಿ ಬಹಳ ಜನಪ್ರಿಯವಾಗಿವೆ ಮತ್ತು ಕ್ರೋಮೋಸೋಮ್ನಿಂದ ಡಿಎನ್ಎಯ ಉದ್ದೇಶಿತ ಏಕೀಕರಣ ಮತ್ತು ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಗಾಗಿ ವಾಹಕಗಳಾಗಿವೆ. ಡಿಎನ್ಎ ಅನುಕ್ರಮ pBR322ರಲ್ಲಿನ ಅನುಕ್ರಮವು ನಿರ್ಬಂಧಿತ ಕಿಣ್ವ ಕತ್ತರಿಸುವ ತಾಣಗಳ ಪಟ್ಟಿಯನ್ನು ಸಹ ನೋಡಿ ಉಲ್ಲೇಖಗಳು ಬಾಹ್ಯ ಕೊಂಡಿಗಳು pBR322 ನಕ್ಷೆ pBR322 ವೈಶಿಷ್ಟ್ಯಗಳು pBR322 ಡಿಎನ್ಎ ಚಲಿಸುವ ಆನುವಂಶಿಕ ಅಂಶಗಳು ಆಣ್ವಿಕ ಜೀವಶಾಸ್ತ್ರ ತಂತ್ರಗಳು ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ಗಳು