Salt bridge (protein and supramolecular)
ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರದಲ್ಲಿ, ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಯು ಎರಡು ಕೋವೆಲೆಂಟ್ ಅಲ್ಲದ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳ ಸಂಯೋಜನೆಯಾಗಿದೆಃ ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಬಂಧ ಮತ್ತು ಅಯಾನಿಕ್ ಬಂಧ (ಚಿತ್ರ 1). ಅಯಾನು ಜೋಡಣೆಯು ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರದಲ್ಲಿ, ಜೈವಿಕ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳಲ್ಲಿ, ವಿವಿಧ ವಸ್ತುಗಳಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ಅಯಾನು ಜೋಡಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯಂತಹ ಅನೇಕ ಅನ್ವಯಗಳಲ್ಲಿ ಅತ್ಯಂತ ಪ್ರಮುಖ ಸಹಸಂಯೋಜಕವಲ್ಲದ ಶಕ್ತಿಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾಗಿದೆ. ಇದು ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳ ಎಂಟ್ರೊಪಿಕ್ ಆಗಿ ಪ್ರತಿಕೂಲವಾದ ಮಡಿಸಿದ ರಚನೆಯ ಸ್ಥಿರತೆಗೆ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಕಂಡುಬರುವ ಕೊಡುಗೆಯಾಗಿದೆ. ಕೋವೆಲೆಂಟ್ ಅಲ್ಲದ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ದುರ್ಬಲವಾದ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳೆಂದು ತಿಳಿದಿದ್ದರೂ, ಸಣ್ಣ ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸುವ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು ಅನುಕೂಲಕರವಾದ ಒಟ್ಟಾರೆ ಸ್ಥಿರತೆಗೆ ಪ್ರಮುಖ ಕೊಡುಗೆಯನ್ನು ನೀಡುತ್ತವೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಗಳು ಮಾತ್ರವಲ್ಲ, ಅವು ಸುಪ್ರಾಮೋಲಿಕ್ಯುಲರ್ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರದಲ್ಲಿಯೂ ಕಂಡುಬರುತ್ತವೆ. ರಾಜ್ಯದ ಒಟ್ಟಾರೆ ಮುಕ್ತ ಶಕ್ತಿಗೆ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಯ ಉಚಿತ ಶಕ್ತಿಯ ಕೊಡುಗೆಯನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳ ಮೂಲಕ ಪ್ರತಿಯೊಂದರ ಉಷ್ಣಬಲವಿಜ್ಞಾನವನ್ನು ಅನ್ವೇಷಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ರಾಸಾಯನಿಕ ಬಂಧದಲ್ಲಿ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಗಳು ನೀರಿನಲ್ಲಿ, ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಗಳು ಅಥವಾ ಅಯಾನು ಜೋಡಿಗಳ ರಚನೆಯು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಎಂಟ್ರೊಪಿಯಿಂದ ನಡೆಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಸಂಯೋಗದ ಮೇಲೆ ಪರಸ್ಪರ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸುವ ಅಯಾನುಗಳ ವಿನಾಶದ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿ ಪ್ರತಿಕೂಲವಾದ δH ಕೊಡುಗೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಇರುತ್ತದೆ. ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಬಂಧಗಳು ಅಯಾನು ಜೋಡಿಗಳ ಸ್ಥಿರತೆಗೆ ಕೊಡುಗೆ ನೀಡುತ್ತವೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ. ಪ್ರೊಟೋನೇಟೆಡ್ ಅಮೋನಿಯಂ ಅಯಾನುಗಳು, ಮತ್ತು ಕಾರ್ಬಾಕ್ಸಿಲೇಟ್, ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಇತ್ಯಾದಿಗಳಂತೆಯೇ ಅಯಾನುಗಳೊಂದಿಗೆ ಡಿಪ್ರೋಟೋನೇಶನ್ನಿಂದ ರೂಪುಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ; ನಂತರ ಅಸೋಸಿಯೇಷನ್ ಸ್ಥಿರಾಂಕಗಳು pH ಅನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿರುತ್ತವೆ. ಅಯಾನು ಜೋಡಣೆಗೆ (ಗಮನಾರ್ಹ ಎಚ್-ಬಂಧದ ಕೊಡುಗೆಗಳ ಅನುಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ) ಎಂಟ್ರೋಪಿಕ್ ಚಾಲನಾ ಶಕ್ತಿಗಳು ಸಹ ಮಿಥನಾಲ್ನಲ್ಲಿ ದ್ರಾವಕವಾಗಿ ಕಂಡುಬರುತ್ತವೆ. ಧ್ರುವೀಯವಲ್ಲದ ದ್ರಾವಕಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಯೋಜನೆಯ ಸ್ಥಿರಾಂಕಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಸಂಪರ್ಕ ಅಯಾನು ಜೋಡಿಗಳು ರೂಪುಗೊಳ್ಳುತ್ತವೆ; ಅನಿಲ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಸಂಯೋಜನೆಯ ಶಕ್ತಿಗಳು ಉದಾ. ಕ್ಷಾರೀಯ ಹಾಲೈಡ್ಗಳು 200 kJ/mol ವರೆಗೆ ತಲುಪುತ್ತವೆ. ಬ್ಜೆರಮ್ ಅಥವಾ ಫ್ಯೂಸ್ ಸಮೀಕರಣವು ಅಯಾನು ಜೋಡಿ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಅಯಾನು ಚಾರ್ಜ್ಗಳಾದ zA ಮತ್ತು zB ಮತ್ತು ಮಾಧ್ಯಮದ ಅವಾಹಕ ಸ್ಥಿರಾಂಕ ε ಯ ಕಾರ್ಯವೆಂದು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ; ಸ್ಥಿರತೆಯ ಅನುಗುಣವಾದ ಪ್ಲಾಟ್ ΔG ವರ್ಸಸ್ zAzB 200 ಕ್ಕೂ ಹೆಚ್ಚು ಅಯಾನು ಜೋಡಿಗಳಿಗೆ ದೊಡ್ಡ ವೈವಿಧ್ಯಮಯ ಅಯಾನುಗಳಿಗೆ ನಿರೀಕ್ಷಿತ ರೇಖೀಯ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಅಜೈವಿಕ ಮತ್ತು ಸಾವಯವ ಅಯಾನುಗಳು ಮಧ್ಯಮ ಅಯಾನಿಕ್ ಶಕ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತವೆ I ಇದೇ ರೀತಿಯ ಸಾಲ್ಟ್ ಬ್ರಿಡ್ಜ್ ಅಸೋಸಿಯೇಷನ್ ಅಯಾನುಗಳು ಮತ್ತು ಕ್ಯಾಟಯಾನ್ನ 1:1 ಸಂಯೋಜನೆಗೆ ಸುಮಾರು 5 ರಿಂದ 6 kJ/mol ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತವೆ, ಅಯಾನುಗಳ ಸ್ವರೂಪದಿಂದ (ಗಾತ್ರ, ಧ್ರುವೀಕರಣ ಇತ್ಯಾದಿ) ಬಹುತೇಕ ಸ್ವತಂತ್ರವಾಗಿರುತ್ತವೆ. δG ಮೌಲ್ಯಗಳು ಸಂಯೋಜಕವಾಗಿವೆ ಮತ್ತು ಸರಿಸುಮಾರು ಚಾರ್ಜ್ಗಳ ರೇಖೀಯ ಕಾರ್ಯವಾಗಿದೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ. ಏಕ ಆವೇಶದ ಅಮೋನಿಯಂ ಕ್ಯಾಟಯಾನ್ ಹೊಂದಿರುವ ದ್ವಿಗುಣ ಆವೇಶದ ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಅಯಾನು ಸುಮಾರು 2x5 = 10 kJ/mol ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ. ಡೆಬೈ-ಹಕೆಲ್ ಸಮೀಕರಣದಿಂದ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ, δG ಮೌಲ್ಯಗಳು ದ್ರಾವಣದ ಅಯಾನಿಕ್ ಶಕ್ತಿ I ಅನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿರುತ್ತದೆ, ಶೂನ್ಯ ಅಯಾನಿಕ್ ಶಕ್ತಿಯಲ್ಲಿ δG = 8 kJ/mol ಅನ್ನು ಗಮನಿಸಬಹುದು. ಕ್ಷಾರ-ಅಯಾನು ಜೋಡಿಗಳ ಸ್ಥಿರತೆಗಳನ್ನು ಅಯಾನು ಚಾರ್ಜ್ z ನ ಕಾರ್ಯವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚು ವಿವರವಾದ ಸಮೀಕರಣದಿಂದ ವಿವರಿಸಬಹುದು. ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವ ಉಪ್ಪು ಸೇತುವೆಗಳು ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಯು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಆಸ್ಪರ್ಟಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಅಥವಾ ಗ್ಲುಟಾಮಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಅಯಾನಿಕ್ ಕಾರ್ಬಾಕ್ಸಿಲೇಟ್ (ಆರ್ಸಿಒಒ−) ಮತ್ತು ಲೈಸಿನ್ನಿಂದ ಕ್ಯಾಟಯಾನಿಕ್ ಅಮೋನಿಯಂ (ಆರ್ಎನ್ಹೆಚ್3 +) ಅಥವಾ ಅರ್ಜಿನೈನ್ನ ಗ್ವಾನಿಡಿನಿಯಂ (ಆರ್ಎನ್ಹೆಚ್ಸಿ (ಎನ್ಎಚ್2) 2 +) ನಿಂದ ಉಂಟಾಗುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರ 2). ಇವುಗಳು ಅತ್ಯಂತ ಸಾಮಾನ್ಯವಾದರೂ, ಹಿಸ್ಟಿಡಿನ್, ಟೈರೋಸಿನ್ ಮತ್ತು ಸೆರಿನ್ಗಳಂತಹ ಅಯಾನೀಕರಿಸಬಹುದಾದ ಅಡ್ಡ ಸರಪಳಿಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಇತರ ಅವಶೇಷಗಳು ಸಹ ಅವುಗಳ ಪಿಕೆಎಗಳನ್ನು ತೊಂದರೆಗೊಳಗಾಗುವ ಹೊರಗಿನ ಅಂಶಗಳನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ ಭಾಗವಹಿಸಬಹುದು. ಉಪ್ಪು ಸೇತುವೆಯಲ್ಲಿ ಭಾಗವಹಿಸುವ ಅವಶೇಷಗಳ ನಡುವಿನ ಅಂತರವನ್ನು ಸಹ ಮುಖ್ಯವೆಂದು ಉಲ್ಲೇಖಿಸಲಾಗಿದೆ. ಅಗತ್ಯವಿರುವ ದೂರವು 4 Å (400 ಪಿ. ಎಂ.) ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆಯಿರುತ್ತದೆ. ಈ ಅಂತರಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಂತರದಲ್ಲಿರುವ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳು ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಯನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ. ಪ್ರೋಟೀನಿನ ಉದ್ದಕ್ಕೂ ಕಂಡುಬರುವ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳ ಹಲವಾರು ಅಯಾನೀಕರಿಸಬಹುದಾದ ಅಡ್ಡ ಸರಪಳಿಗಳಿಂದಾಗಿ, ಪ್ರೋಟೀನ್ನನ್ನು ಇರಿಸಲಾಗಿರುವ pH ಅದರ ಸ್ಥಿರತೆಗೆ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್-ಲಿಗಂಡ್ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವ ಉಪ್ಪು ಸೇತುವೆಗಳು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮತ್ತು ಸಣ್ಣ ಅಣು ಲಿಗಂಡ್ಗಳ ನಡುವೆ ಸಹ ರೂಪುಗೊಳ್ಳಬಹುದು. ಪ್ರೋಟೀನ್ ಡೇಟಾಬ್ಯಾಂಕ್ನ 1100 ಕ್ಕೂ ಹೆಚ್ಚು ವಿಶಿಷ್ಟ ಪ್ರೋಟೀನ್-ಲಿಗ್ಯಾಂಡ್ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳು ತಮ್ಮ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಗುರಿಗಳೊಂದಿಗೆ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ಕಂಡುಬಂದಿದೆ, ಇದು ಔಷಧ-ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಗಳು ಆಗಾಗ್ಗೆ ಕಂಡುಬರುತ್ತವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಇವುಗಳು ಹೈಡ್ರೋಲೇಸ್, ಟ್ರಾನ್ಸ್ಫರೇಸ್ಗಳು, ಕೈನೇಸ್ಗಳು, ರಿಡಕ್ಟೇಸ್, ಆಕ್ಸಿಡೊರೆಡಕ್ಟೇಸ್, ಲೈಸೇಸ್ಗಳು ಮತ್ತು ಜಿ ಪ್ರೋಟೀನ್-ಕಪಲ್ಡ್ ಗ್ರಾಹಕಗಳು (ಜಿಪಿಸಿಆರ್ಗಳು) ಸೇರಿದಂತೆ ವಿವಿಧ ಕಿಣ್ವ ವರ್ಗಗಳ ರಚನೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್-ಲಿಗಂಡ್ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳನ್ನು ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸುವಲ್ಲಿ ಉಪ್ಪು ಸೇತುವೆಗಳು ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರವಹಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ಇತ್ತೀಚಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ, ಇದು ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ರಚನೆಯನ್ನು ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸುವ ಆಣ್ವಿಕ ತುಣುಕುಗಳಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿರೋಧಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ನೂರಾರು ಪಟ್ಟು ಹೆಚ್ಚಿಸಬಹುದು. ಆದ್ದರಿಂದ ಲಿಗಂಡ್ಗಳು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಗುರಿಗಳ ನಡುವೆ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವುದು ತರ್ಕಬದ್ಧ ಔಷಧ ವಿನ್ಯಾಸದಲ್ಲಿ ಮೌಲ್ಯಯುತವಾದ ಸಾಧನವಾಗಿದೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳಲ್ಲಿ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಯ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸುವ ವಿಧಾನಗಳು ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಮಡಿಸಿದ ಸ್ಥಿತಿಗೆ ಒಟ್ಟಾರೆ ಸ್ಥಿರತೆಗೆ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಯ ಕೊಡುಗೆಯನ್ನು ಮ್ಯುಟಜೆನೆಸಿಸ್ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಮತ್ತು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ ಮ್ಯಾಗ್ನೆಟಿಕ್ ರೆಸೋನೆನ್ಸ್ ತಂತ್ರಗಳಿಂದ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿದ ಥರ್ಮೋಡೈನಾಮಿಕ್ ಡೇಟಾದ ಮೂಲಕ ನಿರ್ಣಯಿಸಬಹುದು. ಹೆಚ್ಚಿನ pH ನಲ್ಲಿ ಮಳೆಯನ್ನು ತಡೆಗಟ್ಟಲು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ರೂಪಾಂತರಗೊಂಡ ಹುಸಿ-ಕಾಡು-ರೀತಿಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿ, ಮಡಿಸಿದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸ್ಥಿತಿಯ ಒಟ್ಟಾರೆ ಮುಕ್ತ ಶಕ್ತಿಗೆ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಯ ಕೊಡುಗೆಯನ್ನು ಪಾಯಿಂಟ್-ರೂಪಾಂತರವನ್ನು ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ, ಬದಲಾಯಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ, ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಯನ್ನು ಒಡೆಯುವ ಮೂಲಕ ನಿರ್ಧರಿಸಬಹುದು. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಅವಶೇಷ 70ರಲ್ಲಿ ಆಸ್ಪರ್ಟಿಕ್ ಆಮ್ಲ (ಆಸ್ಪ್) ಮತ್ತು ಅವಶೇಷ 31ರಲ್ಲಿ ಹಿಸ್ಟಿಡಿನ್ (ಹಿಸ್) ನಡುವೆ ಟಿ4 ಲೈಸೋಜೈಮ್ನಲ್ಲಿ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಯೊಂದು ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿದೆ ಎಂದು ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ (ಚಿತ್ರ 3). ಆಸ್ಪ್ಯಾರಜಿನ್ (ಆಸ್ನ್) (ಚಿತ್ರ 4) ನೊಂದಿಗೆ ಸೈಟ್-ನಿರ್ದೇಶಿತ ಮ್ಯುಟಜೆನೆಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಮೂರು ಹೊಸ ಮ್ಯುಟೆಂಟ್ಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಯಿತುಃ ಆಸ್ಪ್ 70 ಆಸ್ನ್ ಹಿಸ್ 31 (ಮ್ಯುಟೆಂಟ್ 1), ಆಸ್ಪ್ 70 ಹಿಸ್ 31 ಆಸ್ನ್ (ಮ್ಯಟೆಂಟ್ 2), ಮತ್ತು ಆಸ್ಪ್ 70 ಆಸ್ನ್ ಹಿಸ್ 31 ಆಸ್ನ್ (ಡಬಲ್ ಮ್ಯಟೆಂಟ್). ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಸ್ಥಾಪಿಸಿದ ನಂತರ, ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಮುಕ್ತ ಶಕ್ತಿಯನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲು ಎರಡು ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು. ಒಂದು ವಿಧಾನವು ವೈಲ್ಡ್-ಟೈಪ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಕರಗುವ ತಾಪಮಾನ ಮತ್ತು ಮೂರು ಮ್ಯುಟೆಂಟ್ಗಳ ತಾಪಮಾನದ ಅವಲೋಕನವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ. ವೃತ್ತಾಕಾರದ ಡೈಕ್ರೋಯಿಸಮ್ನಲ್ಲಿನ ಬದಲಾವಣೆಯ ಮೂಲಕ ವಿಕೃತೀಕರಣವನ್ನು ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡಬಹುದು. ಕರಗುವ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿನ ಇಳಿಕೆಯು ಸ್ಥಿರತೆಯಲ್ಲಿನ ಇಳಿಕೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಇದನ್ನು ಬೆಕ್ಟೆಲ್ ಮತ್ತು ಷೆಲ್ಮನ್ ವಿವರಿಸಿದ ವಿಧಾನದ ಮೂಲಕ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅಲ್ಲಿ ಇವೆರಡರ ನಡುವಿನ ಮುಕ್ತ ಶಕ್ತಿಯ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ΔTδS ಮೂಲಕ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರದಲ್ಲಿ ಕೆಲವು ಸಮಸ್ಯೆಗಳಿವೆ ಮತ್ತು ಅತ್ಯಂತ ನಿಖರವಾದ ದತ್ತಾಂಶದೊಂದಿಗೆ ಮಾತ್ರ ಇದನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು. T4 ಲೈಸೋಜೈಮ್ ಉದಾಹರಣೆಯಲ್ಲಿ, ಸೂಡೋ-ವೈಲ್ಡ್-ಮಾದರಿಯ δS ಅನ್ನು ಈ ಹಿಂದೆ pH 5.5ರಲ್ಲಿ ವರದಿ ಮಾಡಲಾಗಿತ್ತು, ಆದ್ದರಿಂದ ಈ pHನಲ್ಲಿ 11°Cನ ಮಧ್ಯಬಿಂದು ತಾಪಮಾನದ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು 360 ಕ್ಯಾಲೋರಿ/(mol·K) (1.5 kJ/(mol·K)) ನ ವರದಿಯಾದ δSನಿಂದ ಗುಣಿಸಿದಾಗ ಸುಮಾರು −4 kcal/mol (−17 kJ/mol) ನಷ್ಟು ಮುಕ್ತ ಶಕ್ತಿಯ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ. ಈ ಮೌಲ್ಯವು ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಯಿಂದ ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಸ್ಥಿರತೆಗೆ ಕೊಡುಗೆ ನೀಡಿದ ಉಚಿತ ಶಕ್ತಿಯ ಪ್ರಮಾಣಕ್ಕೆ ಅನುರೂಪವಾಗಿದೆ. ಎರಡನೇ ವಿಧಾನವು ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಯ ಮುಕ್ತ ಶಕ್ತಿಯನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ ಮ್ಯಾಗ್ನೆಟಿಕ್ ರೆಸೋನೆನ್ಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ. ಕಾರ್ಬಾಕ್ಸಿಲೇಟ್ ಅಥವಾ ಅಮೋನಿಯಂ ಗುಂಪಿನ ಪಕ್ಕದಲ್ಲಿರುವ ಇಂಗಾಲದ ಪ್ರೋಟಾನ್ಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾದ ರಾಸಾಯನಿಕ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ದಾಖಲಿಸುವಾಗ ಟೈಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಟೈಟ್ರೇಶನ್ ವಕ್ರರೇಖೆಯ ಮಧ್ಯಬಿಂದುವು ಪಿಕೆಎ ಅಥವಾ ಪಿಹೆಚ್ಗೆ ಅನುರೂಪವಾಗಿದೆ, ಅಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೋನೇಟೆಡ್ಃ ಡಿಪ್ರೋಟೋನೇಟೆಡ್ ಅಣುಗಳ ಅನುಪಾತವು 1:1 ಆಗಿದೆ. ಟಿ4 ಲೈಸೋಜೈಮ್ನ ಉದಾಹರಣೆಯನ್ನು ಮುಂದುವರೆಸುತ್ತಾ, ಹಿಸ್ಟಿಡಿನ್ 31ರ ಸಿ2 ಪ್ರೋಟಾನ್ನಲ್ಲಿನ ಬದಲಾವಣೆಯ ಅವಲೋಕನದ ಮೂಲಕ ಟೈಟ್ರೇಶನ್ ವಕ್ರರೇಖೆಯನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರ 5). ಚಿತ್ರ 5 ವೈಲ್ಡ್-ಟೈಪ್ ಮತ್ತು ಉತ್ಪರಿವರ್ತನದ ನಡುವಿನ ಟೈಟ್ರೇಶನ್ ವಕ್ರರೇಖೆಯಲ್ಲಿನ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಲ್ಲಿ ಎಎಸ್ಪಿ 70 ಎಎಸ್ಎನ್ ಆಗಿದೆ. ರೂಪುಗೊಂಡ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಯು ಡಿಪ್ರೋಟೋನೇಟೆಡ್ ಆಸ್ಪ್ 70 ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೋನೇಟೆಡ್ ಹಿಸ್ 31ರ ನಡುವೆ ಇದೆ. ಈ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯು ಆತನ 31ರ ಪಿಕೆಎಯಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ. ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆ ಇಲ್ಲದ ತೆರೆದ ಕಾಡು-ರೀತಿಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ನಲ್ಲಿ, ಹಿಸ್ 31 ಮಧ್ಯಮ ಅಯಾನಿಕ್ ಶಕ್ತಿಯ H2O ಬಫರ್ಗಳಲ್ಲಿ 6.8 pKa ಅನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ವರದಿಯಾಗಿದೆ. ಚಿತ್ರ 5 9.05 ರ ಕಾಡು-ಪ್ರಕಾರದ ಪಿಕೆಎಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಪಿಕೆಎಯಲ್ಲಿನ ಈ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಆಸ್ಪ್ 70ರೊಂದಿಗಿನ ಹಿಸ್ 31ರ ಸಂವಹನವು ಬೆಂಬಲಿಸುತ್ತದೆ. ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲು, ಹಿಸ್ 31 ತನ್ನ ಪ್ರೋಟಾನ್ ಅನ್ನು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಕಾಲ ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸುತ್ತದೆ. ಉತ್ಪರಿವರ್ತಿತ D70Nನಲ್ಲಿರುವಂತೆ, ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಗೆ ಅಡ್ಡಿಯಾದಾಗ, pKaಯು 6.9ರ ಮೌಲ್ಯಕ್ಕೆ ಹಿಂತಿರುಗುತ್ತದೆ, ಇದು ತೆರೆದ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿರುವ ಆತನ 31ರ ಮೌಲ್ಯಕ್ಕೆ ಬಹಳ ಹತ್ತಿರವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಮುಕ್ತ ಶಕ್ತಿಗೆ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಯ ಕೊಡುಗೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಿಂಬಿಸಲು ಪಿಕೆಎಯಲ್ಲಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಬಹುದು. ಗಿಬ್ಸ್ ಮುಕ್ತ ಶಕ್ತಿಯನ್ನು ಬಳಸುವುದುಃ δG = −RTln (Keq), ಇಲ್ಲಿ R ಎಂಬುದು ಸಾರ್ವತ್ರಿಕ ಅನಿಲ ಸ್ಥಿರಾಂಕವಾಗಿದೆ, T ಎಂಬುದು ಕೆಲ್ವಿನ್ಗಳಲ್ಲಿನ ತಾಪಮಾನವಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು Keq ಎಂಬುದು ಸಮತೋಲನದಲ್ಲಿರುವ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಸಮತೋಲನ ಸ್ಥಿರಾಂಕವಾಗಿದೆ. ಹಿಸ್ 31 ರ ಡಿಪ್ರೋಟೋನೇಶನ್ ಎಂಬುದು ಆಸಿಡ್ ಡಿಸೋಸಿಯೇಷನ್ ಕಾನ್ಸ್ಟೆಂಟ್, ಕಾಃ ಹಿಸ್ 31-ಎಚ್ + ಹಿಸ್ 31 + ಎಚ್ + ಎಂದು ಕರೆಯಲ್ಪಡುವ ವಿಶೇಷ ಕೆಕ್ನೊಂದಿಗೆ ಆಸಿಡ್ ಸಮತೋಲನ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಾಗಿದೆ. ಪಿಕೆಎ ನಂತರ ಈ ಕೆಳಗಿನಂತೆ ಕಾ ಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆಃ ಪಿಕೆಎ =-ಲಾಗ್ (ಕಾ). ರೂಪಾಂತರಿತ ಮತ್ತು ಕಾಡು-ವಿಧದ ಮುಕ್ತ ಶಕ್ತಿಯ ವ್ಯತ್ಯಾಸದ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರವನ್ನು ಈಗ ಮುಕ್ತ ಶಕ್ತಿಯ ಸಮೀಕರಣ, ಪಿಕೆಎ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನ, ಗಮನಿಸಿದ ಪಿಕೆಎ ಮೌಲ್ಯಗಳು ಮತ್ತು ನೈಸರ್ಗಿಕ ಲಾಗರಿಥಮ್ಗಳು ಮತ್ತು ಲಾಗರಿಥಮ್ಗಳ ನಡುವಿನ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮಾಡಬಹುದು. ಟಿ4 ಲೈಸೋಜೈಮ್ನ ಉದಾಹರಣೆಯಲ್ಲಿ, ಈ ವಿಧಾನವು ಒಟ್ಟಾರೆ ಮುಕ್ತ ಶಕ್ತಿಗೆ ಸುಮಾರು 3 ಕೆ. ಸಿ. ಎಲ್/ಎಂ. ಓ. ಎಲ್. ನ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರದ ಕೊಡುಗೆಯನ್ನು ನೀಡಿತು. ಉಪ್ಪು ಸೇತುವೆಯಲ್ಲಿ ಭಾಗವಹಿಸುವ ಇತರರೊಂದಿಗೆ ಇದೇ ರೀತಿಯ ವಿಧಾನವನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಬಹುದು, ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಟಿ 4 ಲೈಸೋಜೈಮ್ ಉದಾಹರಣೆಯಲ್ಲಿ ಆಸ್ಪ್ 70, ಹಿಸ್ 31 ರ ರೂಪಾಂತರದ ನಂತರ ಪಿಕೆಎಯಲ್ಲಿ ಅದರ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ. ಸೂಕ್ತವಾದ ಪ್ರಯೋಗವನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡುವಾಗ ಎಚ್ಚರಿಕೆಯ ಒಂದು ಪದವು ಪ್ರೋಟೀನ್ನೊಳಗೆ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಯ ಸ್ಥಳವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ. ಪರಸ್ಪರ ಸಂವಹನದಲ್ಲಿ ಪರಿಸರವು ದೊಡ್ಡ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಯಾನಿಕ್ ಸಾಮರ್ಥ್ಯಗಳಲ್ಲಿ, ಸ್ಥಿರವಿದ್ಯುತ್ತಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯು ಒಳಗೊಂಡಿರುವುದರಿಂದ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಯನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಮುಚ್ಚಬಹುದು. ಟಿ4 ಲೈಸೋಜೈಮ್ನಲ್ಲಿರುವ ಆತನ 31-ಎ. ಎಸ್. ಪಿ. 70 ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಯನ್ನು ಪ್ರೋಟೀನಿನೊಳಗೆ ಹೂಳಲಾಯಿತು. ಮೇಲ್ಮೈ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಗಳಲ್ಲಿ ಎಂಟ್ರೊಪಿ ದೊಡ್ಡ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ, ಅಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಚಲಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಅವಶೇಷಗಳು ಅವುಗಳ ಸ್ಥಾಯೀವಿದ್ಯುತ್ತಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆ ಮತ್ತು ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಬಂಧದಿಂದ ಸಂಕುಚಿತಗೊಳ್ಳುತ್ತವೆ. ಇದು ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯ ಕೊಡುಗೆಯನ್ನು ಬಹುತೇಕ ಅಳಿಸಿಹಾಕುವಷ್ಟು ಎಂಟ್ರೊಪಿಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಮೇಲ್ಮೈ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಗಳನ್ನು ಸಮಾಧಿ ಮಾಡಲಾದ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಗಳಂತೆಯೇ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಬಹುದು, ಎರಡು ರೂಪಾಂತರಿತ ಚಕ್ರಗಳು ಮತ್ತು ಎನ್ಎಂಆರ್ ಟೈಟ್ರೇಶನ್ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಳ್ಳಬಹುದು. ಹೂತುಹೋದ ಉಪ್ಪು ಸೇತುವೆಗಳು ಸ್ಥಿರತೆಗೆ ಕೊಡುಗೆ ನೀಡುವ ಪ್ರಕರಣಗಳು ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿದ್ದರೂ, ಇತರ ಎಲ್ಲದರಂತೆ, ವಿನಾಯಿತಿಗಳು ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿವೆ ಮತ್ತು ಹೂತುಹೋದ ಉಪ್ಪು ಸೇತುವೆಗಳು ಅಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸುವ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಬಹುದು. ಅಲ್ಲದೆ, ಮೇಲ್ಮೈ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಗಳು, ಕೆಲವು ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ, ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸುವ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಬಹುದು. ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸುವ ಅಥವಾ ಅಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸುವ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಕೇಸ್ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಬೇಕು ಮತ್ತು ಕೆಲವು ಕಂಬಳಿ ಹೇಳಿಕೆಗಳನ್ನು ಮಾಡಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುತ್ತದೆ. ಸುಪ್ರಾಮಾಲಿಕ್ಯುಲರ್ ಕೆಮಿಸ್ಟ್ರಿ ಎಂಬುದು ಮ್ಯಾಕ್ರೋಮಾಲಿಕ್ಯೂಲ್ಗಳ ನಡುವಿನ ನಾನ್-ಕೋವೆಲೆಂಟ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಒಂದು ಕ್ಷೇತ್ರವಾಗಿದೆ. ಲವಣ ಸೇತುವೆಗಳನ್ನು ಈ ಕ್ಷೇತ್ರದ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರಜ್ಞರು ಅಯಾನುಗಳ ಸಂವೇದನೆ, ಆಣ್ವಿಕ ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲ್ಗಳ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ ಮತ್ತು ಡಬಲ್ ಹೇಲಿಕಲ್ ಪಾಲಿಮರ್ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ ವೈವಿಧ್ಯಮಯ ಮತ್ತು ಸೃಜನಶೀಲ ವಿಧಾನಗಳೆರಡರಲ್ಲೂ ಬಳಸಿದ್ದಾರೆ. ಅಯಾನು ಸಂಕೀರ್ಣತೆ ಅತಿ ಆಣ್ವಿಕ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರದ ಪ್ರಮುಖ ಕೊಡುಗೆಗಳನ್ನು ಅಯಾನುಗಳ ಗುರುತಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಸಂವೇದನೆಗೆ ಮೀಸಲಿಡಲಾಗಿದೆ. ಅಯಾನು ಜೋಡಣೆಯು ಅಯಾನು ಸಂಕೀರ್ಣತೆಗೆ ಅತ್ಯಂತ ಪ್ರಮುಖ ಪ್ರೇರಕ ಶಕ್ತಿಯಾಗಿದೆ, ಆದರೆ ಆಯ್ದುಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ ಉದಾ. ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಬಂಧಗಳ ಕೊಡುಗೆಗಳಿಂದಾಗಿ, ಹೈಲೈಡ್ ಸರಣಿಯೊಳಗೆ ಇದನ್ನು ಸಾಧಿಸಲಾಗಿದೆ. ಆಣ್ವಿಕ ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲ್ಗಳು ಆಣ್ವಿಕ ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲ್ಗಳು ಅತಿಥಿ ಅಣುವನ್ನು ಸೆರೆಹಿಡಿಯಲು ಮತ್ತು ಹಿಡಿದಿಡಲು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾದ ರಾಸಾಯನಿಕ ಸ್ಕ್ಯಾಫೋಲ್ಡ್ಗಳಾಗಿವೆ (ಆಣ್ವಿಕ ಎನ್ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಷನ್ ನೋಡಿ). ಸ್ಜುಮ್ನಾ ಮತ್ತು ಸಹೋದ್ಯೋಗಿಗಳು ಕೈರಲ್ ಒಳಾಂಗಣದೊಂದಿಗೆ ಹೊಸ ಆಣ್ವಿಕ ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲ್ ಅನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದರು. ಈ ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲ್ ಅನ್ನು ಪ್ಲಾಸ್ಟಿಕ್ ಈಸ್ಟರ್ ಮೊಟ್ಟೆಯಂತೆ ಎರಡು ಭಾಗಗಳಿಂದ ತಯಾರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರ 6). ಎರಡು ಭಾಗಗಳ ನಡುವಿನ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಯ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು ಅವುಗಳನ್ನು ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಸ್ವಯಂ-ಜೋಡಿಸಲು ಕಾರಣವಾಗುತ್ತವೆ (ಚಿತ್ರ 7). 60 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್ಗೆ ಬಿಸಿಮಾಡಿದಾಗಲೂ ಅವು ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುತ್ತವೆ. ಡಬಲ್ ಹೆಲಿಕ್ಸ್ ಪಾಲಿಮರ್ಗಳಾದ ಯಾಶಿಮಾ ಮತ್ತು ಸಹೋದ್ಯೋಗಿಗಳು ಡಿಎನ್ಎಯಂತೆಯೇ ಡಬಲ್ ಹೆಲಿಕ್ಸ್ ರಚನೆಯನ್ನು ಅಳವಡಿಸಿಕೊಳ್ಳುವ ಹಲವಾರು ಪಾಲಿಮರ್ಗಳನ್ನು ನಿರ್ಮಿಸಲು ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಗಳನ್ನು ಬಳಸಿದ್ದಾರೆ. ಒಂದು ಉದಾಹರಣೆಯಲ್ಲಿ, ಅವರು ಎರಡು ಹೆಲಿಕಲ್ ಮೆಟಲೊಪಾಲಿಮರ್ ಅನ್ನು ರಚಿಸಲು ಪ್ಲಾಟಿನಂ ಅನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸಿದರು. ಅವುಗಳ ಮೊನೊಮರ್ ಮತ್ತು ಪ್ಲಾಟಿನಂ (II) ಬೈಫಿನೈಲ್ನಿಂದ ಪ್ರಾರಂಭಿಸಿ (ಚಿತ್ರ 8), ಅವುಗಳ ಮೆಟಾಲೊಪಾಲಿಮರ್ ಲಿಗಂಡ್ ವಿನಿಮಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳ ಸರಣಿಯ ಮೂಲಕ ಸ್ವಯಂ ಜೋಡಣೆಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಮೊನೊಮರ್ನ ಎರಡು ಭಾಗಗಳು ಡಿಪ್ರೋಟೋನೇಟೆಡ್ ಕಾರ್ಬಾಕ್ಸಿಲೇಟ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೋನೇಟೆಡ್ ನೈಟ್ರೋಜೆನ್ಗಳ ನಡುವಿನ ಉಪ್ಪಿನ ಸೇತುವೆಯ ಮೂಲಕ ಒಟ್ಟಿಗೆ ಲಂಗರು ಹಾಕುತ್ತವೆ. ಉಲ್ಲೇಖಗಳು ರಾಸಾಯನಿಕ ಬಂಧ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಎಂಜಿನಿಯರಿಂಗ್