HAT medium
ಎಚ್ಎಟಿ ಮೀಡಿಯಂ (ಹೈಪೋಕ್ಸಾಂಥೈನ್-ಅಮಿನೋಪ್ಟೆರಿನ್-ಥೈಮಿಡಿನ್ ಮಾಧ್ಯಮ) ಸಸ್ತನಿ ಜೀವಕೋಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಆಯ್ಕೆ ಮಾಧ್ಯಮವಾಗಿದ್ದು, ಡಿಎನ್ಎ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಮಧ್ಯವರ್ತಿಗಳಾದ ಹೈಪೋಕ್ಸಾಂಥೈನ್ (ಪ್ಯೂರಿನ್ ಉತ್ಪನ್ನ) ಮತ್ತು ಥೈಮಿಡಿನ್ (ಡಿಯೋಕ್ಸಿನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಸೈಡ್) ನೊಂದಿಗೆ ಡೈಹೈಡ್ರೋಫೋಲೇಟ್ ರಿಡಕ್ಟೇಸ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುವ ಮೂಲಕ ಶಕ್ತಿಯುತ ಫೋಲೇಟ್ ಮೆಟಾಬಾಲಿಸಮ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ ಆಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುವ ಔಷಧವಾದ ಅಮಿನೋಪ್ಟೆರಿನ್ನ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿದೆ. ತಂತ್ರವೆಂದರೆ ಅಮಿನೋಪ್ಟೆರಿನ್ ಡಿಎನ್ಎ ಡಿ ನೊವೊ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಿರ್ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಜೀವಕೋಶ ವಿಭಜನೆಯು ಮುಂದುವರಿಯಲು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಅಗತ್ಯವಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಹೈಪೋಕ್ಸಾಂಥೈನ್ ಮತ್ತು ಥೈಮಿಡಿನ್ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ ತಡೆಗಟ್ಟುವಿಕೆಯನ್ನು ("ರಕ್ಷಣೆ ಮಾರ್ಗ") ತಪ್ಪಿಸಲು ಕಚ್ಚಾ ವಸ್ತುಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತವೆ, ಅವು ಸರಿಯಾದ ಕಿಣ್ವಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದರೆ, ಅಂದರೆ ಅವುಗಳನ್ನು ಎನ್ಕೋಡ್ ಮಾಡುವ ಜೀನ್ಗಳ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುವ ಪ್ರತಿಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ. ಡೈಹೈಡ್ರೋಫೋಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಟೆಟ್ರಾಹೈಡ್ರೋಫೋಲೇಟ್ (ಟಿಎಚ್ಎಫ್) ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವ ಡೈಹೈಡ್ರೋಫೋಲೇಟ್ ರಿಡಕ್ಟೇಸ್ ಎಂಬ ಕಿಣ್ವವನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಅಮಿನೋಪ್ಟೆರಿನ್ನಿಂದ ನಿರ್ಬಂಧಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳ ಸಹಯೋಗದೊಂದಿಗೆ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುವ ಟಿಎಚ್ಎಫ್, ಏಕ ಇಂಗಾಲದ ಘಟಕಗಳನ್ನು ಸ್ವೀಕರಿಸಬಹುದು, ನಂತರ ಅವುಗಳನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಗುರಿಗಳಿಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಕೋಶಗಳ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿಯ ಪ್ರಮುಖ ಗುರಿಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾದ ಥೈಮಿಡೈಲೇಟ್ ಸಿಂಥೇಸ್, ಇದು ಡಿಯೋಕ್ಸಿಯುರಿಡಿನ್ ಮೊನೊಫಾಸ್ಫೇಟ್ನಿಂದ (ಡಿ. ಯು. ಎಂ. ಪಿ.) ಥೈಮಿಡಿನ್ ಮೊನೊಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಅನ್ನು (ಟಿ. ಎಂ. ಪಿ.) ಸೃಷ್ಟಿಸುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳ ಮೂಲಕ, ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ಗಳು ಡಿಎನ್ಎ ಅನ್ನು ರಚಿಸಲು ಬಳಸುವ ನಾಲ್ಕು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಪೂರ್ವಗಾಮಿಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾದ ಥೈಮಿಡಿನ್ ಟ್ರೈಫಾಸ್ಫೇಟ್ (ಟಿಟಿಪಿ) ಅನ್ನು ತಯಾರಿಸಲು ಟಿಎಂಪಿಯನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು. ಡಿ. ಯು. ಎಂ. ಪಿ. ಯನ್ನು ಪರಿವರ್ತಿಸಲು ಅಗತ್ಯವಾದ ಟಿ. ಎಚ್. ಎಫ್. ಇಲ್ಲದೆ, ಯಾವುದೇ ಟಿ. ಟಿ. ಪಿ. ಇರಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ, ಮತ್ತು ಟಿ. ಎಂ. ಪಿ. ಯನ್ನು ಮತ್ತೊಂದು ಮೂಲದಿಂದ ಉತ್ಪಾದಿಸದ ಹೊರತು ಡಿ. ಎನ್. ಎ. ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಮುಂದುವರಿಯಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ. ಪರ್ಯಾಯ ಮೂಲವೆಂದರೆ ಎಚ್ಎಟಿ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿರುವ ಥೈಮಿಡಿನ್, ಇದನ್ನು ಜೀವಕೋಶಗಳು ಹೀರಿಕೊಳ್ಳಬಹುದು ಮತ್ತು ಥೈಮಿಡಿನ್ ಕೈನೇಸ್ (ಟಿಕೆ) ನಿಂದ ಟಿಎಂಪಿಯೊಳಗೆ ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಟ್ ಮಾಡಬಹುದು. ಐ. ಎಂ. ಪಿ. ಯ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಗೆ (ಜಿ. ಎಂ. ಪಿ. ಮತ್ತು ಜಿ. ಟಿ. ಪಿ. ಯ ಪೂರ್ವಗಾಮಿ, ಮತ್ತು ಎ. ಎಂ. ಪಿ. ಮತ್ತು ಎ. ಟಿ. ಪಿ. ಗೆ) ಸಹ ಟಿ. ಎಚ್. ಎಫ್. ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಇದನ್ನು ಬೈಪಾಸ್ ಮಾಡಬಹುದು. ಈ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ ಹೈಪೋಕ್ಸಾಂಥೈನ್-ಗ್ವಾನೈನ್ ಫಾಸ್ಫರಿಬೊಸಿಲ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಫರೇಸ್ (ಎಚ್ಜಿಪಿಆರ್ಟಿ) ಮಾಧ್ಯಮದಿಂದ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಹೈಪೋಕ್ಸಾಂಥೈನ್ ಅನ್ನು ಪಿಆರ್ಪಿಪಿಯೊಂದಿಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸುತ್ತದೆ, ಪೈರೋಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಅನ್ನು ಬಿಡುಗಡೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಐಎಂಪಿ ಅನ್ನು ಸಾಲ್ವೇಜ್ ಮಾರ್ಗದಿಂದ ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಜೀವಕೋಶ ಸಂವರ್ಧನೆಗೆ ಎಚ್ಎಟಿ ಮಾಧ್ಯಮದ ಬಳಕೆಯು ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುವ ಟಿಕೆ ಮತ್ತು ಎಚ್ಜಿಪಿಆರ್ಟಿ ಹೊಂದಿರುವ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ ಕೃತಕ ಆಯ್ಕೆಯ ಒಂದು ರೂಪವಾಗಿದೆ. ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಕೊಲ್ಲುವ ವಿಷಗಳಿಂದ ಈ ಯೋಜನೆಗೆ ಅನೇಕ ಉಪಯುಕ್ತ ಪರಿಷ್ಕರಣೆಗಳು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿವೆ, ಆದರೆ ಈ ವಂಶವಾಹಿಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದರ ಕೊರತೆಯಿದ್ದರೆ ಅವು ನಿರೋಧಕವಾಗಿರುತ್ತವೆ. ಹೀಗಾಗಿ, ಟಿ. ಕೆ. ಯ ಕೊರತೆಯಿರುವ ಜೀವಕೋಶವು ಬ್ರೋಮೋಡಿಯೋಕ್ಸಿಯುರಿಡಿನ್ (ಬಿ. ಆರ್. ಡಿ. ಯು.) ಗೆ ನಿರೋಧಕವಾಗಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಎಚ್. ಜಿ. ಪಿ. ಆರ್. ಟಿ. ಯ ಕೊರತೆಯಿರುವ ಜೀವಕೋಶವು 6-ಥಿಯೋಗುವಾನೈನ್ (6-ಟಿ. ಜಿ.) ಮತ್ತು 8-ಅಜಾಗುವಾನೈನ್ಗೆ ನಿರೋಧಕವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಹೀಗಾಗಿ, ನಂತರದ ಎರಡು ಔಷಧಿಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಿ, ನಂತರ ಎಚ್. ಎ. ಟಿ. ಮಾಧ್ಯಮವು ರಿವರ್ಟೆಂಟ್ ಕಾಲೊನಿಗಳನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ. ಮೊನೊಕ್ಲೋನಲ್ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳ ತಯಾರಿಕೆಗೆ ಎಚ್ಎಟಿ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಹೈಬ್ರಿಡೋಮಾ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನ ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಪ್ರಾಣಿಗಳು (ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಇಲಿಗಳು) ಮೊದಲು ಪ್ರತಿಜನಕಕ್ಕೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ, ಅದರ ವಿರುದ್ಧ ನಾವು ಪ್ರತಿಕಾಯವನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಆಸಕ್ತಿ ಹೊಂದಿದ್ದೇವೆ. ಸಸ್ತನಿಗಳಿಂದ ಸ್ಪ್ಲೀನೋಸೈಟ್ಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಿದ ನಂತರ, ಪಾಲಿಥಿಲೀನ್ ಗ್ಲೈಕಾಲ್ ಅಥವಾ ಸೆಂಡೈ ವೈರಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಬಿ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಎಚ್ಜಿಪಿಆರ್ಟಿ ಋಣಾತ್ಮಕ, ಅಮರ ಮೈಲೋಮಾ ಕೋಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಬೆಸೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಸಂಯೋಜಿತ ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಎಚ್ಎಟಿ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮಧ್ಯಮದಲ್ಲಿರುವ ಅಮಿನೋಪ್ಟೆರಿನ್ ಡಿ ನೊವೊ ಮಾರ್ಗವನ್ನು ನಿರ್ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಬಳಕೆಯಾಗದ ಮೈಲೋಮಾ ಕೋಶಗಳು ಸಾಯುತ್ತವೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಅವು ಡಿ ನೊವೊ ಅಥವಾ ಸಾಲ್ವೇಜ್ ಮಾರ್ಗದಿಂದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ. ಬಳಕೆಯಾಗದ ಬಿ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಕಡಿಮೆ ಜೀವಿತಾವಧಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದರಿಂದ ಸಾಯುತ್ತವೆ. ಈ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ, ಬಿ ಕೋಶ-ಮೈಲೋಮಾ ಮಿಶ್ರತಳಿಗಳು ಮಾತ್ರ ಉಳಿದುಕೊಂಡಿವೆ. ಈ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತವೆ (ಬಿ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಒಂದು ಗುಣ) ಮತ್ತು ಅವು ಅಮರವಾಗಿವೆ (ಮೈಲೋಮಾ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಒಂದು ಗುಣ). ಹೊಮ್ಮುವ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ನಂತರ ಬಹು ಬಾವಿ ಫಲಕಗಳಾಗಿ ಎಷ್ಟು ಮಟ್ಟಿಗೆ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದರೆ ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಯು ಕೇವಲ 1 ಕೋಶವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ. ನಂತರ ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಯಲ್ಲಿನ ಸೂಪರ್ನೇಟಂಟ್ ಅನ್ನು ಅಪೇಕ್ಷಿತ ಪ್ರತಿಕಾಯಕ್ಕಾಗಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಬಹುದು. ಬಾವಿಯಲ್ಲಿನ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳು ಒಂದೇ ಬಿ ಕೋಶದಿಂದ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುವುದರಿಂದ, ಅವು ಒಂದೇ ಎಪಿಟೋಪ್ ಕಡೆಗೆ ನಿರ್ದೇಶಿಸಲ್ಪಡುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಅವುಗಳನ್ನು ಮೊನೊಕ್ಲೋನಲ್ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳು ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮೊನೊಕ್ಲೋನಲ್ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳ ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಮೊದಲ ಬಾರಿಗೆ ಸೆಸರ್ ಮಿಲ್ಸ್ಟೀನ್ ಮತ್ತು ಜಾರ್ಜಸ್ ಜೆ. ಎಫ್. ಕೊಹ್ಲರ್ ಅವರು ಕಂಡುಹಿಡಿದರು, ಇದು ಅವರಿಗೆ 1984 ರ ಶರೀರಶಾಸ್ತ್ರ ಅಥವಾ ಮೆಡಿಸಿನ್ ನೊಬೆಲ್ ಪ್ರಶಸ್ತಿಯನ್ನು ನೀಲ್ಸ್ ಕಾಜ್ ಜೆರ್ನ್ ಅವರೊಂದಿಗೆ ಹಂಚಿಕೊಂಡಿತು. ಉಲ್ಲೇಖಗಳು ಕೋಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮ