Rabbit hybridoma
ಮೊಲದ ಹೈಬ್ರಿಡೋಮಾವು ಮೊಲದ ಬಿ ಜೀವಕೋಶವನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವ ಪ್ರತಿಕಾಯವನ್ನು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಬಿ-ಕೋಶದೊಂದಿಗೆ (ಮೈಲೋಮಾ) ಬೆಸೆಯುವ ಮೂಲಕ ರೂಪುಗೊಂಡ ಹೈಬ್ರಿಡ್ ಜೀವಕೋಶದ ರೇಖೆಯಾಗಿದೆ. ಮೊಲದ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ಆಕರ್ಷಣೆಯೊಂದಿಗೆ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸುವ ವಾಹನವಾಗಿ ಮತ್ತು ಫಾಸ್ಫೋ-ಪೆಪ್ಟೈಡ್ಗಳು, ಕಾರ್ಬೋಹೈಡ್ರೇಟ್ಗಳು ಮತ್ತು ಇಮ್ಯುನೊಜೆನ್ಗಳು ಸೇರಿದಂತೆ ಅನೇಕ ಅಣುಗಳ ಹೆಚ್ಚು ವೈವಿಧ್ಯಮಯ ಗುರುತಿಸುವಿಕೆಯ ವಾಹನವಾಗಿ ದಾಖಲಿಸಲಾಗಿದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಇತ್ತೀಚಿನವರೆಗೂ, ಮೊಲದಿಂದ ಲಭ್ಯವಿರುವ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳ ಪ್ರಕಾರವು ಪಾಲಿಕ್ಲೋನಲ್ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳ ವ್ಯಾಪ್ತಿಗೆ ಸೀಮಿತವಾಗಿತ್ತು. 1970ರ ದಶಕದಲ್ಲಿ ಮೌಸ್ ಹೈಬ್ರಿಡೋಮಾ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯ ನಂತರ ಮೊಲದ ಮೊನೊಕ್ಲೋನಲ್ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಹಲವಾರು ಪ್ರಯತ್ನಗಳನ್ನು ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಮೊಲದ ಮೊನೊಕ್ಲೋನಲ್ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಲು ಮೌಸ್-ರಾಬಿಟ್ ಹೆಟೆರೊ-ಹೈಬ್ರಿಡೋಮಾಗಳ ಮೇಲೆ ಸಂಶೋಧನೆ ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ ಹೆಟೆರೊ-ಹೈಬ್ರಿಡೋಮಾಗಳು ಅಂತಿಮವಾಗಿ ತದ್ರೂಪು ಮಾಡಲು ಕಷ್ಟಕರವಾಗಿದ್ದವು, ಮತ್ತು ತದ್ರೂಪುಗಳು, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಅಸ್ಥಿರವಾಗಿದ್ದವು ಮತ್ತು ದೀರ್ಘಕಾಲದವರೆಗೆ ಪ್ರತಿಕಾಯವನ್ನು ಸ್ರವಿಸಲಿಲ್ಲ. 1995ರಲ್ಲಿ, ಚಿಕಾಗೋದ ಲಯೋಲಾ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾನಿಲಯದಲ್ಲಿ ಕ್ಯಾಥರೀನ್ ನೈಟ್ ಮತ್ತು ಅವರ ಸಹೋದ್ಯೋಗಿಗಳು, ಇಮ್ಯುನೊಗ್ಲಾಬ್ಯುಲಿನ್ ಹೆವಿ ಮತ್ತು ಲೈಟ್ ಚೈನ್ ವರ್ಧಕಗಳ ನಿಯಂತ್ರಣದಲ್ಲಿ ಆಂಕೊಜೆನ್ಗಳಾದ ವಿ-ಎಬಿಎಲ್ ಮತ್ತು ಸಿ-ಮೈಕ್ ಅನ್ನು ಅತಿಯಾಗಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುವ ಡಬಲ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಜೆನಿಕ್ ಮೊಲವನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸುವಲ್ಲಿ ಯಶಸ್ವಿಯಾದರು. ಮೊಲವು ಮೈಲೋಮಾ ತರಹದ ಗೆಡ್ಡೆಯನ್ನು ರೂಪಿಸಿತು, ಇದು 240ಇ-1 ಎಂಬ ಹೆಸರಿನ ಪ್ಲಾಸ್ಮಾಸಿಟೊಮಾ ಜೀವಕೋಶದ ರೇಖೆಯನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಟ್ಟಿತು. ಮೊಲದ ಲಿಂಫೋಸೈಟ್ಗಳೊಂದಿಗೆ 240ಇ-1 ಜೀವಕೋಶಗಳ ಸಮ್ಮಿಳನವು ಹೈಬ್ರಿಡೋಮಾಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಿತು, ಇದು ಮೊಲದ ಮೊನೊಕ್ಲೋನಲ್ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳನ್ನು ಸ್ಥಿರ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ಸ್ರವಿಸುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, 1970 ರ ದಶಕದಲ್ಲಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದ ಆರಂಭಿಕ ಮೌಸ್ ಮೈಲೋಮಾ ರೇಖೆಗಳಂತೆ, ಸ್ಥಿರತೆಯು ಒಂದು ಕಾಳಜಿಯಾಗಿತ್ತು. ಡಾ. ನೈಟ್ನ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದಿಂದ 240ಇ-1 ಜೀವಕೋಶದ ರೇಖೆಯನ್ನು ಪಡೆದ ಹಲವಾರು ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳು 240ಇ-1 ಸಮ್ಮಿಳನ ಕೋಶದ ರೇಖೆಯಲ್ಲಿ ಸ್ಥಿರತೆಯ ಸಮಸ್ಯೆಗಳನ್ನು ವರದಿ ಮಾಡಿದ್ದವು. 1996ರಲ್ಲಿ, ಕ್ಯಾಲಿಫೋರ್ನಿಯಾ ಸ್ಯಾನ್ ಫ್ರಾನ್ಸಿಸ್ಕೊ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾನಿಲಯದ (ಯುಸಿಎಸ್ಎಫ್) ವೀಮಿನ್ ಝು ಮತ್ತು ರಾಬರ್ಟ್ ಪೈಟೆಲಾ ಅವರು ಡಾ. ನೈಟ್ನ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದಿಂದ 240ಇ-1 ಅನ್ನು ಪಡೆದರು ಮತ್ತು ಸುಧಾರಿತ ಮೊಲದ ಹೈಬ್ರಿಡೋಮಾವನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿದರು. ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಉಪ-ಕ್ಲೋನಿಂಗ್, ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಮ್ಮಿಳನ ದಕ್ಷತೆಗಾಗಿ ಆಯ್ಕೆ, ದೃಢವಾದ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಫೇಸ್-ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ನ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಕಾಶಮಾನವಾದ ನೋಟದಂತಹ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನದ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳಿಂದ 240ಇ-1ನ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳಲ್ಲಿನ ಸುಧಾರಣೆಗಳನ್ನು ಸಾಧಿಸಲಾಗಿದೆ. ಆಯ್ದ ಉಪಕುಟುಂಬಗಳನ್ನು ಸ್ಥಿರವಾದ ಹೈಬ್ರಿಡೋಮಾ ಮತ್ತು ಮೊನೊಕ್ಲೋನಲ್ ಪ್ರತಿಕಾಯ ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯಕ್ಕಾಗಿ ಮತ್ತಷ್ಟು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು. ಅನೇಕ ಸುತ್ತುಗಳ ಉಪ-ಅಬೀಜ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿ ಮತ್ತು ಆಯ್ಕೆ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳ ನಂತರ, 240ಇ-ಡಬ್ಲ್ಯೂ ಎಂಬ ಹೊಸ ಜೀವಕೋಶದ ಶ್ರೇಣಿಯನ್ನು ಗುರುತಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಇದು ಉತ್ತಮ ಸಮ್ಮಿಳನ ದಕ್ಷತೆ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಿತು. ಸಂಶೋಧನೆ ಮತ್ತು ವಾಣಿಜ್ಯ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳಿಗಾಗಿ ಮೊಲದ ಮೊನೊಕ್ಲೋನಲ್ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳ ಉತ್ಪಾದನೆಗೆ ಸೆಲ್ ಲೈನ್ 240ಇ-ಡಬ್ಲ್ಯೂ ಅನ್ನು ಮತ್ತಷ್ಟು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಹೊಂದುವಂತೆ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ಮೊಲದಲ್ಲಿ ಹೈಬ್ರಿಡೋಮಾ ರಚನೆಯ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ಮೊದಲು ರೋಗನಿರೋಧಕ ಶಕ್ತಿಯನ್ನು ಪಡೆದ ಮೊಲದಿಂದ ಬಿ-ಕೋಶಗಳನ್ನು ಪಡೆಯುವುದನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ. ಮೊಲಕ್ಕೆ ಹಲವಾರು ರೋಗನಿರೋಧಕ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ಗಳಿವೆ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಪಾಲಿಕ್ಲೋನಲ್ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳ ಉತ್ಪಾದನೆಗೆ. ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣೆಯ ನಂತರ, ಬಿ-ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಮೊಲದ ಸಮ್ಮಿಳನ ಪಾಲುದಾರ ಜೀವಕೋಶದ ರೇಖೆಯೊಂದಿಗೆ ಬೆಸೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಹೈಬ್ರಿಡೋಮಾಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಹೈಬ್ರಿಡೋಮಾಗಳಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳನ್ನು ಎಲಿಸಾ, ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್, ಇಮ್ಯುನೊಹಿಸ್ಟೋಕೆಮಿಸ್ಟ್ರಿ ಮತ್ತು ಎಫ್ಎಸಿಎಸ್ನಂತಹ ರೋಗನಿರ್ಣಯ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳ ಮೂಲಕ ಆಸಕ್ತಿಯ ಮಾನದಂಡಗಳನ್ನು ಪೂರೈಸುವ ಪ್ರತಿಜನಕಕ್ಕಾಗಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮೊನೊಕ್ಲೋನಲ್ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಬರುವ ಹೈಬರ್ಡೊಮಾಗಳನ್ನು ಉಪ-ಕ್ಲೋನ್ ಮಾಡಬಹುದು. ನ್ಯಾಷನಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಇನ್ಸ್ಟಿಟ್ಯೂಟ್ನಲ್ಲಿ (ಬೆಥೆಸ್ಡಾ, ಯುಎಸ್ಎ) ಮೊಲದ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳ ಮಾನವಕರಣ ಮಿಚೆಲ್ ಹೋ ಮತ್ತು ಇರಾ ಪಾಸ್ಟನ್ ಮೊಲದ ಮೊನೊಕ್ಲೋನಲ್ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳ ಗುಂಪನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಿದ್ದಾರೆ (ಉದಾಹರಣೆಗೆ. ವೈಪಿ218, ವೈಪಿ223) ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಾಗಿ ಸಿ ಟರ್ಮಿನಲ್ ತುದಿಯಲ್ಲಿ ಕಳಪೆ ರೋಗನಿರೋಧಕ ತಾಣಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ ಮೆಸೊಥೆಲಿನ್ನ ಅಪರೂಪದ ಎಪಿಟೋಪ್ಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸುತ್ತದೆ. ಡಾ. ಹೋ ಅವರ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯವು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಡೇಟಾ ಬ್ಯಾಂಕಿನಿಂದ ಅವುಗಳ ಪ್ರತಿಜನಕಗಳೊಂದಿಗೆ ಮೊಲದ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳ ಸಂಕೀರ್ಣ ರಚನೆಗಳನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿತು ಮತ್ತು ಅದರ ಪ್ರತಿಜನಕಕ್ಕೆ 6 ಆಂಗ್ಸ್ಟ್ರೋಮ್ ಅಂತರದೊಳಗೆ ಮೊಲದ ಎಫ್. ವಿ. ಯಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿಜನಕ-ಸಂಪರ್ಕಿಸುವ ಅವಶೇಷಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಿತು. ಅವರು "ಎಚ್. ವಿ. 4" ಮತ್ತು "ಎಲ್. ವಿ. 4" ಎಂದು ಹೆಸರಿಸಿದರು, ಪೂರಕವಲ್ಲದ-ನಿರ್ಧರಿಸುವ ಪ್ರದೇಶ (ಸಿ. ಡಿ. ಆರ್) ಕುಣಿಕೆಗಳು ರಚನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಪ್ರತಿಜನಕಕ್ಕೆ ಹತ್ತಿರದಲ್ಲಿವೆ ಮತ್ತು ಕ್ರಮವಾಗಿ ಮೊಲದ ಭಾರೀ ಸರಪಳಿ ಮತ್ತು ಲಘು ಸರಪಳಿಯ ಚೌಕಟ್ಟಿನ 3ರಲ್ಲಿವೆ. ಕಂಪ್ಯೂಟೇಶನಲ್ ಸ್ಟ್ರಕ್ಚರಲ್ ಮಾಡೆಲಿಂಗ್ನ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ, ಹೋ ಮತ್ತು ಜಾಂಗ್ ಸಂಯೋಜಿತ ಕಬತ್/ಐಎಂಜಿಟಿ/ಪ್ಯಾರಾಟೋಮ್ ಸಿ. ಡಿ. ಆರ್. ಗಳನ್ನು ಮಾನವ ಜರ್ಮ್ಲೈನ್ ಫ್ರೇಮ್ವರ್ಕ್ ಅನುಕ್ರಮವಾಗಿ ಕಸಿ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಮಾನವೀಕರಣ ತಂತ್ರವನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಿದರು. ಮಾನವಕೃತ ಮೊಲ ಎಫ್. ವಿ. ಎಸ್. ನಿಂದ ಕೂಡಿದ ಇಮ್ಯುನೊಟಾಕ್ಸಿನ್ಗಳು (ಉದಾ. ಎಚ್. ವೈ. ಪಿ. 218) ಅನ್ನು ವೈದ್ಯಕೀಯವಾಗಿ ಬಳಸಿದ ಟಾಕ್ಸಿನ್ಗೆ ಬೆಸೆಯಲಾಗಿದ್ದು, ಅವುಗಳ ಮೂಲ ಮೊಲದ ಎಫ್. ವಿ. ಗಳಿಂದ ಪಡೆದ ಇಮ್ಯುನೊಟಾಕ್ಸಿನ್ಗಳಿಗಿಂತ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಕೋಶಗಳ ವಿರುದ್ಧ ಬಲವಾದ ಸೈಟೋಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ. ಎಚ್. ವೈ. ಪಿ. 218 ಪ್ರತಿಕಾಯವನ್ನು ಆಧರಿಸಿದ ಸಿಎಆರ್ ಟಿ ಕೋಶಗಳು ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ತಡೆಯುತ್ತವೆ. ವಿಧಾನ (ಅಂದರೆ. ಕಬತ್/ಐಎಂಜಿಟಿ/ಪ್ಯಾರಾಟೋಮ್ ಮೊಲದ ಸಿ. ಡಿ. ಆರ್. ಗಳನ್ನು ಸ್ಥಿರವಾದ ಮಾನವ ಜರ್ಮ್ಲೈನ್ ಚೌಕಟ್ಟಿಗೆ ಜೋಡಿಸುವುದು) ಮೊಲದ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳನ್ನು ಮಾನವೀಯಗೊಳಿಸುವ ಸಾಮಾನ್ಯ ವಿಧಾನವೆಂದು ಸೂಚಿಸಲಾಗಿದೆ. ಉಲ್ಲೇಖಗಳು ಬಾಹ್ಯ ಕೊಂಡಿಗಳು 240ಇ-ಡಬ್ಲ್ಯೂ ಇಮ್ಯುನಾಲಜಿ ಬಯೊಟೆಕ್ನಾಲಜಿ ಇಮ್ಯೂನ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ ಮೊನೊಕ್ಲೋನಲ್ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳು ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳು ಮೊಲದ ಜೀವಕೋಶದ ಸಾಲುಗಳಿಗಾಗಿ 240ಇ-1 ಸೆಲ್ಲೋಸಾರಸ್ ಪ್ರವೇಶಕ್ಕಾಗಿ ಬಾಹ್ಯ ಕೊಂಡಿಗಳು