Massive parallel sequencing
ಬೃಹತ್ ಸಮಾನಾಂತರ ಅನುಕ್ರಮ ಅಥವಾ ಬೃಹತ್ ಸಮಾನಾಂತರ ಅನುಕ್ರಮವು ಬೃಹತ್ ಸಮಾನಾಂತರ ಸಂಸ್ಕರಣೆಯ ಪರಿಕಲ್ಪನೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಡಿಎನ್ಎ ಅನುಕ್ರಮಕ್ಕೆ ಹಲವಾರು ಉನ್ನತ-ಥ್ರೋಪುಟ್ ವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾಗಿದೆ; ಇದನ್ನು ಮುಂದಿನ-ಪೀಳಿಗೆಯ ಅನುಕ್ರಮ (ಎನ್ಜಿಎಸ್) ಅಥವಾ ಎರಡನೇ-ಪೀಳಿಗೆಯ ಅನುಕ್ರಮ ಎಂದೂ ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ಕೆಲವು ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳು 1993 ಮತ್ತು 1998ರ ನಡುವೆ ಹೊರಹೊಮ್ಮಿದವು ಮತ್ತು 2005ರಿಂದ ವಾಣಿಜ್ಯಿಕವಾಗಿ ಲಭ್ಯವಿವೆ. ಈ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳು ಪ್ರತಿ ಸಲಕರಣೆಯ ರನ್ಗೆ 1 ದಶಲಕ್ಷದಿಂದ 43 ಶತಕೋಟಿ ಕಿರು ರೀಡ್ಗಳನ್ನು (ತಲಾ 50ರಿಂದ 400 ಬೇಸ್ಗಳು) ಅನುಕ್ರಮಗೊಳಿಸಲು ಚಿಕ್ಕದಾದ ಮತ್ತು ಸಮಾನಾಂತರವಾದ ವೇದಿಕೆಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತವೆ. ಅನೇಕ ಎನ್ಜಿಎಸ್ ವೇದಿಕೆಗಳು ಎಂಜಿನಿಯರಿಂಗ್ ಸಂರಚನೆಗಳು ಮತ್ತು ಅನುಕ್ರಮ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರದಲ್ಲಿ ಭಿನ್ನವಾಗಿವೆ. ಅವು ಹರಿವಿನ ಜೀವಕೋಶದಲ್ಲಿ ಪ್ರಾದೇಶಿಕವಾಗಿ ಬೇರ್ಪಟ್ಟ, ಕ್ಲೋನಲಿ ವರ್ಧಿತ ಡಿಎನ್ಎ ಟೆಂಪ್ಲೆಟ್ಗಳು ಅಥವಾ ಏಕ ಡಿಎನ್ಎ ಅಣುಗಳ ಮೂಲಕ ಬೃಹತ್ ಸಮಾನಾಂತರ ಅನುಕ್ರಮದ ತಾಂತ್ರಿಕ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಹಂಚಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ. ಕ್ಯಾಪಿಲ್ಲರಿ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ಅಥವಾ ಮೊದಲ ತಲೆಮಾರಿನ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ಎಂದೂ ಕರೆಯಲಾಗುವ ಸ್ಯಾಂಗರ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ಗಿಂತ ಈ ವಿನ್ಯಾಸವು ತುಂಬಾ ಭಿನ್ನವಾಗಿದೆ-ಇದು ವೈಯಕ್ತಿಕ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಲ್ಲಿ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುವ ಚೈನ್-ಟರ್ಮಿನೇಷನ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಟಿಕ್ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ. ಈ ವಿಧಾನವು ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ದೊಡ್ಡ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ಪೂರ್ಣಗೊಳಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ. ವಾಣಿಜ್ಯವಾಗಿ ಲಭ್ಯವಿರುವ ಎನ್ಜಿಎಸ್ ಪ್ಲಾಟ್ಫಾರ್ಮ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಎನ್ಜಿಎಸ್ ಪ್ಲಾಟ್ಫಾರ್ಮ್ಗಳ ಡಿಎನ್ಎ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಈ ಕೆಳಗಿನ ಹಂತಗಳೊಂದಿಗೆ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, ಡಿಎನ್ಎ ಅನುಕ್ರಮ ಗ್ರಂಥಾಲಯಗಳನ್ನು ಪಿಸಿಆರ್ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಮೂಲಕ ಕ್ಲೋನಲ್ ವರ್ಧನೆಯಿಂದ ಉತ್ಪಾದಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಎರಡನೆಯದಾಗಿ, ಡಿಎನ್ಎಯನ್ನು ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಮೂಲಕ ಅನುಕ್ರಮಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅಂದರೆ ಡಿಎನ್ಎ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಸರಪಳಿ-ಅಂತ್ಯ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರದ ಬದಲು ಪೂರಕ ಎಳೆಗೆ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮೂರನೆಯದಾಗಿ, ಪ್ರಾದೇಶಿಕವಾಗಿ ಬೇರ್ಪಟ್ಟ, ವರ್ಧಿತ ಡಿಎನ್ಎ ಟೆಂಪ್ಲೆಟ್ಗಳನ್ನು ಭೌತಿಕ ಬೇರ್ಪಡಿಸುವ ಹಂತದ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲದೇ ಬೃಹತ್ ಸಮಾನಾಂತರ ಶೈಲಿಯಲ್ಲಿ ಏಕಕಾಲದಲ್ಲಿ ಅನುಕ್ರಮಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚಿನ ಎನ್ಜಿಎಸ್ ಪ್ಲಾಟ್ಫಾರ್ಮ್ಗಳಲ್ಲಿ ಈ ಹಂತಗಳನ್ನು ಅನುಸರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ ವಿಭಿನ್ನ ಕಾರ್ಯತಂತ್ರವನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ. ಅನುಕ್ರಮ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳ ಎನ್ಜಿಎಸ್ ಸಮಾನಾಂತರಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯು ಒಂದೇ ಸಾಧನದಲ್ಲಿ ನೂರಾರು ಮೆಗಾಬೇಸ್ಗಳನ್ನು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಅನುಕ್ರಮದ ಗಿಗಾಬೇಸ್ಗಳಿಗೆ ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ. ಇದು ಲಭ್ಯವಿರುವ ಅನುಕ್ರಮ ದತ್ತಾಂಶದಲ್ಲಿ ತೀವ್ರ ಹೆಚ್ಚಳಕ್ಕೆ ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಟ್ಟಿದೆ ಮತ್ತು ಜೈವಿಕ ವೈದ್ಯಕೀಯ ವಿಜ್ಞಾನಗಳಲ್ಲಿ ಜೀನೋಮ್ ಅನುಕ್ರಮ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಮೂಲಭೂತವಾಗಿ ಬದಲಾಯಿಸಿದೆ. ಹೊಸದಾಗಿ ಹೊರಹೊಮ್ಮುತ್ತಿರುವ ಎನ್. ಜಿ. ಎಸ್. ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳು ಮತ್ತು ಉಪಕರಣಗಳು ಅನುಕ್ರಮಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ವೆಚ್ಚದಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿ ಜೀನೋಮ್ ಅನುಕ್ರಮಕ್ಕೆ ಸುಮಾರು $1000 ರಷ್ಟು ಗಮನಾರ್ಹ ಇಳಿಕೆಗೆ ಕೊಡುಗೆ ನೀಡಿವೆ. 2014 ರ ಹೊತ್ತಿಗೆ, ಬೃಹತ್ ಸಮಾನಾಂತರ ಅನುಕ್ರಮ ವೇದಿಕೆಗಳು ವಾಣಿಜ್ಯಿಕವಾಗಿ ಲಭ್ಯವಿವೆ ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ವೈಶಿಷ್ಟ್ಯಗಳನ್ನು ಕೋಷ್ಟಕದಲ್ಲಿ ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ. ಎನ್ಜಿಎಸ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳ ವೇಗವು ವೇಗವಾಗಿ ಮುಂದುವರೆದಂತೆ, ತಾಂತ್ರಿಕ ವಿಶೇಷಣಗಳು ಮತ್ತು ಬೆಲೆಗಳು ಬದಲಾಗುತ್ತಿವೆ. ಸಿಂಗಲ್-ಎಂಡ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ಗಾಗಿ ಪ್ರತಿ ರನ್ಗೆ ರನ್ ಸಮಯಗಳು ಮತ್ತು ಗಿಗಾಬೇಸ್ (ಜಿಬಿ) ಔಟ್ಪುಟ್ ಅನ್ನು ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ. ಜೋಡಿ-ಅಂತ್ಯದ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವಾಗ ರನ್ ಸಮಯಗಳು ಮತ್ತು ಔಟ್ಪುಟ್ಗಳು ಸರಿಸುಮಾರು ದ್ವಿಗುಣಗೊಳ್ಳುತ್ತವೆ. ‡ ರೋಚೆ 454 ಮತ್ತು ಹೆಲಿಕೋಸ್ ಬಯೋಸೈನ್ಸ್ ಪ್ಲಾಟ್ಫಾರ್ಮ್ಗಳ ಸರಾಸರಿ ಓದುವ ಉದ್ದಗಳು. ಎನ್. ಜಿ. ಎಸ್. ಗೆ ಮಾದರಿ ತಯಾರಿಕಾ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಎನ್. ಜಿ. ಎಸ್. ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಲು ಎರಡು ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆಃ ಏಕ ಡಿ. ಎನ್. ಎ ಅಣುಗಳಿಂದ ಹುಟ್ಟುವ ವರ್ಧಿತ ಮಾದರಿಗಳು ಮತ್ತು ಏಕ ಡಿ. ಎನ್. ಎ ಅಣು ಮಾದರಿಗಳು. ಏಕ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಘಟನೆಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗದ ಚಿತ್ರಣ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳಿಗೆ, ಡಿಎನ್ಎ ಮಾದರಿಗಳ ವರ್ಧನೆಯ ಅಗತ್ಯವಿದೆ. ಮೂರು ಅತ್ಯಂತ ಸಾಮಾನ್ಯ ವರ್ಧನೆಯ ವಿಧಾನಗಳೆಂದರೆ ಎಮಲ್ಷನ್ ಪಿಸಿಆರ್ (ಎಂಪಿಸಿಆರ್), ರೋಲಿಂಗ್ ಸರ್ಕಲ್ ಮತ್ತು ಘನ-ಹಂತದ ವರ್ಧನೆ. ಟೆಂಪ್ಲೆಟ್ಗಳ ಅಂತಿಮ ವಿತರಣೆಯು ಪ್ರಾದೇಶಿಕವಾಗಿ ಯಾದೃಚ್ಛಿಕವಾಗಿರಬಹುದು ಅಥವಾ ಗ್ರಿಡ್ನಲ್ಲಿರಬಹುದು. ಎಮಲ್ಷನ್ ಪಿಸಿಆರ್ ವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ, ಜೀನೋಮಿಕ್ ಡಿಎನ್ಎಯ ಯಾದೃಚ್ಛಿಕ ವಿಘಟನೆಯ ಮೂಲಕ ಡಿಎನ್ಎ ಗ್ರಂಥಾಲಯವನ್ನು ಮೊದಲು ಉತ್ಪಾದಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಏಕ-ಎಳೆ ಡಿಎನ್ಎ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು (ಟೆಂಪ್ಲೆಟ್ಗಳು) ಅಡಾಪ್ಟರುಗಳು ಅಥವಾ ಲಿಂಕರ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಮಣಿಗಳ ಮೇಲ್ಮೈಗೆ ಜೋಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಡಿಎನ್ಎ ಲೈಬ್ರರಿಯಿಂದ ಒಂದೇ ಡಿಎನ್ಎ ತುಣುಕಿಗೆ ಒಂದು ಮಣಿ ಜೋಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮಣಿಗಳ ಮೇಲ್ಮೈಯು ಡಿಎನ್ಎ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಬಂಧಿಸುವ ಅಡಾಪ್ಟರ್ಗಳಿಗೆ ಪೂರಕವಾದ ಅನುಕ್ರಮಗಳೊಂದಿಗೆ ಒಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಶೋಧಕಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ. ನಂತರ ಮಣಿಗಳನ್ನು ನೀರಿನ-ತೈಲ ಎಮಲ್ಷನ್ ಹನಿಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಜಲೀಯ ನೀರಿನ-ತೈಲ ಎಮಲ್ಷನ್ನಲ್ಲಿ, ಒಂದು ಮಣಿ ಸೆರೆಹಿಡಿಯುವ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಹನಿಗಳು ಪಿಸಿಆರ್ ಮೈಕ್ರೊ ರಿಯಾಕ್ಟರ್ ಆಗಿದ್ದು ಅದು ಒಂದೇ ಡಿಎನ್ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ನ ವರ್ಧಿತ ಪ್ರತಿಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ. ಗ್ರಿಡ್ಡ್ ರೋಲಿಂಗ್ ಸರ್ಕಲ್ ನ್ಯಾನೊಬಾಲ್ಗಳು ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ರೋಲಿಂಗ್ ಸರ್ಕಲ್ ವರ್ಧನೆಯ ಮೂಲಕ ಏಕ ಡಿಎನ್ಎ ಅಣುಗಳ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಡಿಎನ್ಎಗಳಿಗಿಂತ ಚಿಕ್ಕದಾಗಿರುವ ತಾಣಗಳ ಗ್ರಿಡ್ನಲ್ಲಿ ಸೆರೆಹಿಡಿಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಡಿಎನ್ಎ ವಸಾಹತು ಉತ್ಪಾದನೆ (ಸೇತುವೆ ವರ್ಧನೆ) ಮುಂದಕ್ಕೆ ಮತ್ತು ಹಿಮ್ಮುಖ ಪ್ರೈಮರ್ಗಳು ಹರಿವಿನ ಕೋಶದಲ್ಲಿನ ಸ್ಲೈಡ್ಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ ಕೋವೆಲೆಂಟ್ ಆಗಿ ಜೋಡಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿರುತ್ತವೆ. ಬೆಂಬಲದ ಮೇಲಿನ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ಗೆ ಪ್ರೈಮರ್ಗಳ ಅನುಪಾತವು ವರ್ಧಿತ ಸಮೂಹಗಳ ಮೇಲ್ಮೈ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸುತ್ತದೆ. ಹರಿವಿನ ಕೋಶವು ಪಾಲಿಮರೇಸ್-ಆಧಾರಿತ ವಿಸ್ತರಣೆಯ ಕಾರಕಗಳಿಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ಪೂರಕ ಒಲಿಗೊಗೆ ಲಗತ್ತಿಸಲಾದ ತುಣುಕು "ಸೇತುವೆಗಳ" ಮುಕ್ತ/ದೂರದ ತುದಿಯಾಗಿ ಪ್ರೈಮಿಂಗ್ ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ. ಪುನರಾವರ್ತಿತ ವಿಕೃತೀಕರಣ ಮತ್ತು ವಿಸ್ತರಣೆಯು ಹರಿವಿನ ಜೀವಕೋಶದ ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ಲಕ್ಷಾಂತರ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಸ್ಥಳಗಳಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್ಎ ತುಣುಕುಗಳ ಸ್ಥಳೀಯ ವರ್ಧನೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ಘನ-ಹಂತದ ವರ್ಧನೆಯು 100-200 ಮಿಲಿಯನ್ ಪ್ರಾದೇಶಿಕವಾಗಿ ಬೇರ್ಪಟ್ಟ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಸಮೂಹಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಮುಕ್ತ ತುದಿಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ, ಇದಕ್ಕೆ ಅನುಕ್ರಮ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಲು ಸಾರ್ವತ್ರಿಕ ಅನುಕ್ರಮ ಪ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು ಹೈಬ್ರಿಡೈಸ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು 1997 ರಲ್ಲಿ ಗ್ಲಾಕ್ಸೊ-ವೆಲ್ಕಮ್ನ ಜಿನೀವಾ ಬಯೋಮೆಡಿಕಲ್ ರಿಸರ್ಚ್ ಇನ್ಸ್ಟಿಟ್ಯೂಟ್ (ಜಿಬಿಆರ್ಐ) ನಿಂದ, ಪ್ಯಾಸ್ಕಲ್ ಮೇಯರ್, ಎರಿಕ್ ಕವಾಶಿಮಾ ಮತ್ತು ಲಾರೆಂಟ್ ಫರಿನೆಲ್ಲಿ ಅವರು ಪೇಟೆಂಟ್ಗಾಗಿ ಸಲ್ಲಿಸಿದರು ಮತ್ತು 1998 ರಲ್ಲಿ ಮೊದಲ ಬಾರಿಗೆ ಸಾರ್ವಜನಿಕವಾಗಿ ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಲಾಯಿತು. 1994 ರಲ್ಲಿ ಕ್ರಿಸ್ ಆಡಮ್ಸ್ ಮತ್ತು ಸ್ಟೀವ್ ಕ್ರಾನ್ ಇದೇ ರೀತಿಯ, ಆದರೆ ಕ್ಲೋನಲ್ ಅಲ್ಲದ, ಮೇಲ್ಮೈ ವರ್ಧನೆಯ ವಿಧಾನದ ಮೇಲೆ ಪೇಟೆಂಟ್ ಅನ್ನು ಸಲ್ಲಿಸಿದರು, ಇದನ್ನು 1997 ರಲ್ಲಿ ಚರ್ಚ್ ಮತ್ತು ಮಿತ್ರರಿಂದ ಕ್ಲೋನಲ್ ವರ್ಧನೆಗಾಗಿ ಅಳವಡಿಸಿಕೊಂಡ "ಸೇತುವೆ ವರ್ಧನೆ" ಎಂದು ಹೆಸರಿಸಲಾಯಿತು. ಡಿಎನ್ಎ ವರ್ಧನೆಯ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಏಕ-ಅಣು ಟೆಂಪ್ಲೆಟ್ಗಳ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಕಾರ್ಯಗತಗೊಳಿಸಲು ತೊಡಕಾಗಿರುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಅನುಕ್ರಮ ದೋಷಗಳನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸಬಹುದು. ಏಕ-ಅಣು ಮಾದರಿಗಳ ತಯಾರಿಕೆಯು ಹೆಚ್ಚು ನೇರವಾಗಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಇದಕ್ಕೆ ಪಿಸಿಆರ್ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ, ಇದು ವರ್ಧಿತ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ದೋಷಗಳನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸಬಹುದು. ಎಟಿ-ಸಮೃದ್ಧ ಮತ್ತು ಜಿಸಿ-ಸಮೃದ್ಧ ಗುರಿ ಅನುಕ್ರಮಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ವರ್ಧನೆಯ ಪಕ್ಷಪಾತವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ, ಇದು ಜೀನೋಮ್ ಜೋಡಣೆಗಳು ಮತ್ತು ಜೋಡಣೆಗಳಲ್ಲಿ ಅವುಗಳ ಕಡಿಮೆ ಪ್ರಾತಿನಿಧ್ಯಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ಏಕ ಅಣು ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಕನಿಷ್ಠ ಮೂರು ವಿಭಿನ್ನ ವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಘನ ಆಧಾರಗಳ ಮೇಲೆ ನಿಶ್ಚಲಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮೊದಲ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ, ಪ್ರಾದೇಶಿಕವಾಗಿ ವಿತರಿಸಲಾದ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಪ್ರೈಮರ್ ಅಣುಗಳು ಘನ ಬೆಂಬಲಕ್ಕೆ ಕೋವೆಲೆಂಟ್ ಆಗಿ ಜೋಡಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿರುತ್ತವೆ. ಆರಂಭಿಕ ವಸ್ತುವನ್ನು ಯಾದೃಚ್ಛಿಕವಾಗಿ ಸಣ್ಣ ಗಾತ್ರಗಳಾಗಿ ವಿಭಜಿಸುವ ಮೂಲಕ (ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ~ 200-250 bp) ಮತ್ತು ತುಣುಕು ತುದಿಗಳಿಗೆ ಸಾಮಾನ್ಯ ಅಡಾಪ್ಟರ್ಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ ತಯಾರಿಸಲಾದ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ನಂತರ ನಿಶ್ಚಲ ಪ್ರೈಮರ್ಗೆ ಹೈಬ್ರಿಡೈಸ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಎರಡನೆಯ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ, ಸ್ಥಿರವಾದ ಪ್ರೈಮರ್ಗಳಿಂದ ಏಕ-ಎಳೆ, ಏಕ-ಅಣು ಟೆಂಪ್ಲೆಟ್ಗಳನ್ನು ಪ್ರೈಮಿಂಗ್ ಮತ್ತು ವಿಸ್ತರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರಾದೇಶಿಕವಾಗಿ ವಿತರಿಸಲಾದ ಏಕ-ಅಣು ಟೆಂಪ್ಲೆಟ್ಗಳನ್ನು ಘನ ಬೆಂಬಲಕ್ಕೆ ಕೋವೆಲೆಂಟ್ ಆಗಿ ಜೋಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಒಂದು ಸಾಮಾನ್ಯ ಪ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು ನಂತರ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ಗೆ ಹೈಬ್ರಿಡೈಸ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಎರಡೂ ವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ, ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಎನ್ಜಿಎಸ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಲು ಸ್ಥಿರವಾದ ಪ್ರೈಮ್ಡ್ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಸಂರಚನೆಗೆ ಬಂಧಿಸಬಹುದು. ಮೇಲಿನ ಎರಡೂ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಹೆಲಿಕೋಸ್ ಬಯೋಸೈನ್ಸಸ್ ಬಳಸುತ್ತದೆ. ಮೂರನೆಯ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ, ಪ್ರಾದೇಶಿಕವಾಗಿ ವಿತರಿಸಲಾದ ಏಕ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅಣುಗಳನ್ನು ಘನ ಬೆಂಬಲಕ್ಕೆ ಜೋಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದಕ್ಕೆ ಪ್ರೈಮ್ಡ್ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅಣುವು ಬಂಧಿಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ. ಈ ವಿಧಾನವನ್ನು ಪೆಸಿಫಿಕ್ ಬಯೋಸೈನ್ಸ್ ಬಳಸುತ್ತದೆ. ದೊಡ್ಡ ಡಿಎನ್ಎ ಅಣುಗಳನ್ನು (ಹತ್ತಾರು ಸಾವಿರ ಬೇಸ್ ಜೋಡಿಗಳವರೆಗೆ) ಈ ತಂತ್ರದೊಂದಿಗೆ ಬಳಸಬಹುದು ಮತ್ತು, ಮೊದಲ ಎರಡು ವಿಧಾನಗಳಿಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿ, ಮೂರನೇ ವಿಧಾನವನ್ನು ನೈಜ-ಸಮಯದ ವಿಧಾನಗಳೊಂದಿಗೆ ಬಳಸಬಹುದು, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ಓದುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವಿರುತ್ತದೆ. ಅನುಕ್ರಮ ವಿಧಾನಗಳು ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಮೂಲಕ ಅನುಕ್ರಮ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ (ಎಸ್ಬಿಎಸ್) ಉದ್ದೇಶವು ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ನಿಂದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ನ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವ ಮೂಲಕ ಡಿಎನ್ಎ ಮಾದರಿಯ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುವುದು. ಎಂಜಿನಿಯರಿಂಗ್ ಮಾಡಲಾದ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅನ್ನು ಡಿಎನ್ಎಯ ಒಂದೇ ಎಳೆಗಳ ನಕಲನ್ನು ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ನ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಮೂಲಕ ಅನುಕ್ರಮಗೊಳಿಸುವ ತತ್ವವನ್ನು ಮೊದಲ ಬಾರಿಗೆ 1993 ರಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಕೆಲವು ವರ್ಷಗಳ ನಂತರ ಸುಧಾರಣೆಗಳನ್ನು ಪ್ರಕಟಿಸಲಾಯಿತು. ಪ್ರಮುಖ ಭಾಗಗಳು ಎಸ್ಬಿಎಸ್ನ ಎಲ್ಲಾ ಮೂರ್ತರೂಪಗಳಿಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಹೋಲುತ್ತವೆ ಮತ್ತು (1) ನಂತರದ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಮತ್ತು ಘನ ಬೆಂಬಲಕ್ಕೆ ಅನುಕ್ರಮಗೊಳಿಸಲು ಡಿಎನ್ಎಯ ವರ್ಧನೆ, (2) ಘನ ಬೆಂಬಲದ ಮೇಲೆ ಸಿಂಗಲ್ ಸ್ಟ್ರ್ಯಾಂಡೆಡ್ ಡಿಎನ್ಎ ಉತ್ಪಾದನೆ, (3) ಎಂಜಿನಿಯರಿಂಗ್ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಗಳ ಸಂಯೋಜನೆ ಮತ್ತು (4) ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ನ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವುದು. ನಂತರ 3-4 ಹಂತಗಳನ್ನು ಪುನರಾವರ್ತಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಹಂತ 4ರಲ್ಲಿ ಪಡೆದ ಸಂಕೇತಗಳಿಂದ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಜೋಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. 454, ಪ್ಯಾಕ್ಬಯೋ, ಅಯಾನ್ ಟೊರೆಂಟ್, ಇಲ್ಯೂಮಿನಾ ಮತ್ತು ಎಂಜಿಐ ಸೇರಿದಂತೆ ಬಹುತೇಕ ಎಲ್ಲಾ ಬೃಹತ್ ಸಮಾನಾಂತರ ಅನುಕ್ರಮ ಸಾಧನಗಳಿಗೆ ಅನುಕ್ರಮ-ಮೂಲಕ-ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಈ ತತ್ವವನ್ನು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ. ಪೈರೋಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ತತ್ವವನ್ನು ಮೊದಲ ಬಾರಿಗೆ 1993 ರಲ್ಲಿ 3 ರಿಂದ 5 'ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯ (ಪ್ರೂಫ್-ರೀಡಿಂಗ್) ಕೊರತೆಯಿರುವ ಎಂಜಿನಿಯರಿಂಗ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ನೊಂದಿಗೆ ಘನ ಬೆಂಬಲವನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮತ್ತು ಫೈರ್ಫ್ಲೈ ಲೂಸಿಫೆರೇಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಲುಮಿನಿಸೆನ್ಸ್ ನೈಜ-ಸಮಯದ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಿಕೆಯ ಮೂಲಕ ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಮೂಲಕ ಅನುಕ್ರಮಗೊಳಿಸುವ ಎಲ್ಲಾ ಪ್ರಮುಖ ಪರಿಕಲ್ಪನೆಗಳನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸಲಾಯಿತು, ಇದರಲ್ಲಿ (1) ನಂತರದ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಡಿಎನ್ಎಯ ವರ್ಧನೆ ಮತ್ತು ಅನುಕ್ರಮಗೊಳಿಸಬೇಕಾದ ಡಿಎನ್ಎಯನ್ನು (ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್) ಘನ ಬೆಂಬಲಕ್ಕೆ ಲಗತ್ತಿಸುವುದು, (2) ಘನ ಬೆಂಬಲದ ಮೇಲೆ ಸಿಂಗಲ್ ಸ್ಟ್ರ್ಯಾಂಡೆಡ್ ಡಿಎನ್ಎ ಉತ್ಪಾದನೆ (3) ಎಂಜಿನಿಯರಿಂಗ್ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವುದು ಮತ್ತು (4) ನೈಜ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಬೆಳಕನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವ ಮೂಲಕ ಸಂಯೋಜಿತ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಅನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವುದು ಸೇರಿವೆ. ನಂತರದ ಲೇಖನದಲ್ಲಿ, ಪರಿಕಲ್ಪನೆಯನ್ನು ಮತ್ತಷ್ಟು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 1998 ರಲ್ಲಿ, ಒಂದು ಲೇಖನವನ್ನು ಪ್ರಕಟಿಸಲಾಯಿತು, ಇದರಲ್ಲಿ ಲೇಖಕರು ಸಂಯೋಜಿಸದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಗಳನ್ನು ನಾಲ್ಕನೇ ಕಿಣ್ವದೊಂದಿಗೆ (ಅಪೈರೇಸ್) ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು ಎಂದು ತೋರಿಸಿದರು, ಇದು ಸಂಯೋಜಿಸದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಗಳನ್ನು ತೊಳೆಯುವ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲದೇ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಮೂಲಕ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ. ರಿವರ್ಸಿಬಲ್ ಟರ್ಮಿನೇಟರ್ ಕೆಮಿಸ್ಟ್ರಿಯ ಮೂಲಕ ಅನುಕ್ರಮ ಈ ವಿಧಾನವು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್ ಸಂಯೋಜನೆ, ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಚಿತ್ರಣ ಮತ್ತು ಸೀಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಆವರ್ತಕ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ ರಿವರ್ಸಿಬಲ್ ಟರ್ಮಿನೇಟರ್-ಬೌಂಡ್ ಡಿ. ಎನ್. ಟಿ. ಪಿ. ಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ. ಪ್ರತಿ ಡಿ. ಎನ್. ಟಿ. ಪಿ. ಯನ್ನು ಸೇರಿಸಿದಂತೆ ಪ್ರತಿದೀಪಕವಾಗಿ-ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ಟರ್ಮಿನೇಟರ್ ಅನ್ನು ಚಿತ್ರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ಮುಂದಿನ ಬೇಸ್ ಅನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ. ಈ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಗಳನ್ನು ರಾಸಾಯನಿಕವಾಗಿ ನಿರ್ಬಂಧಿಸಲಾಗಿದ್ದು, ಪ್ರತಿ ಸಂಯೋಜನೆಯು ಒಂದು ವಿಶಿಷ್ಟ ಘಟನೆಯಾಗಿದೆ. ಪ್ರತಿ ಬೇಸ್ ಸಂಯೋಜನೆಯ ಹಂತವನ್ನು ಇಮೇಜಿಂಗ್ ಹಂತವು ಅನುಸರಿಸುತ್ತದೆ, ನಂತರ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ನಿಂದ ಮುಂದಿನ ಸಂಯೋಜನೆಗಾಗಿ ಪ್ರತಿ ಎಳೆಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಲು ನಿರ್ಬಂಧಿತ ಗುಂಪನ್ನು ರಾಸಾಯನಿಕವಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ. ಬಳಕೆದಾರ-ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿತ ಸಲಕರಣೆ ಸೆಟ್ಟಿಂಗ್ಗಳಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲ್ಪಟ್ಟಂತೆ, ಈ ಹಂತಗಳ ಸರಣಿಯು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಚಕ್ರಗಳಿಗೆ ಮುಂದುವರಿಯುತ್ತದೆ. 3 'ತಡೆಯುವ ಗುಂಪುಗಳನ್ನು ಮೂಲತಃ ಕಿಣ್ವಕ ಅಥವಾ ರಾಸಾಯನಿಕ ಹಿಮ್ಮುಖ ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿತ್ತು ರಾಸಾಯನಿಕ ವಿಧಾನವು ಸೊಲೆಕ್ಸಾ ಮತ್ತು ಇಲ್ಯೂಮಿನಾ ಯಂತ್ರಗಳಿಗೆ ಆಧಾರವಾಗಿದೆ. ರಿವರ್ಸಿಬಲ್ ಟರ್ಮಿನೇಟರ್ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರದ ಅನುಕ್ರಮವು ಇಲ್ಯೂಮಿನಾ/ಸೊಲೆಕ್ಸಾ ಬಳಸುವಂತಹ ನಾಲ್ಕು-ಬಣ್ಣದ ಚಕ್ರವಾಗಿರಬಹುದು ಅಥವಾ ಹೆಲಿಕೋಸ್ ಬಯೋಸೈನ್ಸಸ್ ಬಳಸುವಂತಹ ಒಂದು-ಬಣ್ಣದ ಚಕ್ರವಾಗಿರಬಹುದು. ಹೆಲಿಕೋಸ್ ಬಯೋಸೈನ್ಸಸ್ "ವರ್ಚುವಲ್ ಟರ್ಮಿನೇಟರ್ಗಳನ್ನು" ಬಳಸಿತು, ಇವು ಪ್ರತಿಬಂಧಕವಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುವ ಎರಡನೇ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಸೈಡ್ ಅನಲಾಗ್ ಹೊಂದಿರುವ ಅನ್ಬ್ಲಾಕ್ಡ್ ಟರ್ಮಿನೇಟರ್ಗಳಾಗಿವೆ. ಈ ಟರ್ಮಿನೇಟರ್ಗಳು ಗುಂಪುಗಳನ್ನು ಕೊನೆಗೊಳಿಸಲು ಅಥವಾ ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಲು ಸೂಕ್ತವಾದ ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಒಂದೇ ಬೇಸ್ ಸೇರ್ಪಡೆಯ ನಂತರ ಡಿಎನ್ಎ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಕೊನೆಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ, ಅನುಕ್ರಮ ವಿಸ್ತರಣೆಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪಾಲಿಮರೇಸ್ಗಳಿಂದ ನಡೆಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ, ಬದಲಿಗೆ ಡಿಎನ್ಎ ಲಿಗೇಸ್ ಮತ್ತು ಒನ್-ಬೇಸ್-ಎನ್ಕೋಡೆಡ್ ಪ್ರೋಬ್ಗಳು ಅಥವಾ ಎರಡು-ಬೇಸ್-ಎನ್ಕೋಡೆಡ್ ಪ್ರೋಬ್ಗಳಿಂದ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅದರ ಸರಳವಾದ ರೂಪದಲ್ಲಿ, ಪ್ರತಿದೀಪಕವಾಗಿ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ಪ್ರೋಬ್ ಪ್ರೈಮ್ಡ್ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ನ ಪಕ್ಕದಲ್ಲಿರುವ ಅದರ ಪೂರಕ ಅನುಕ್ರಮಕ್ಕೆ ಹೈಬ್ರಿಡೈಸ್ ಆಗುತ್ತದೆ. ನಂತರ ಡೈ-ಲೇಬಲ್ ಪ್ರೋಬ್ ಅನ್ನು ಪ್ರೈಮರ್ಗೆ ಸೇರಿಸಲು ಡಿಎನ್ಎ ಲಿಗೇಸ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಲಗತ್ತಿಸದ ಶೋಧಕಗಳನ್ನು ತೊಳೆದು, ನಂತರ ಲಗತ್ತಿಸಲಾದ ಶೋಧಕದ ಗುರುತನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಚಿತ್ರಣವನ್ನು ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಬಣ್ಣವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಸೀಳಬಹುದಾದ ಶೋಧಕಗಳನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೂಲಕ ಮತ್ತು ನಂತರದ ಬಂಧನ ಚಕ್ರಗಳಿಗೆ (ಚೈನ್ಡ್ ಬಂಧನ) 5′-ಪಿಒ4 ಗುಂಪನ್ನು ಪುನರುತ್ಪಾದಿಸುವ ಮೂಲಕ ಅಥವಾ ಹೊಸ ಪ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ಗೆ (ಚೈನ್ಡ್ ರಹಿತ ಬಂಧನ) ತೆಗೆದುಹಾಕುವ ಮತ್ತು ಹೈಬ್ರಿಡೈಸ್ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಈ ಚಕ್ರವನ್ನು ಪುನರಾವರ್ತಿಸಬಹುದು. ಫಾಸ್ಫೋಲಿಂಕ್ಡ್ ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಸ್ ಅಥವಾ ರಿಯಲ್-ಟೈಮ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ಪೆಸಿಫಿಕ್ ಬಯೋಸೈನ್ಸ್ ಪ್ರಸ್ತುತ ಈ ವಿಧಾನವನ್ನು ಮುನ್ನಡೆಸುತ್ತಿದೆ. ನೈಜ-ಸಮಯದ ಅನುಕ್ರಮ ವಿಧಾನವು ಡಿಎನ್ಎ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಡೈ-ಲೇಬಲ್ಡ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಗಳ ನಿರಂತರ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಚಿತ್ರಿಸುವುದನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆಃ ಏಕ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅಣುಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಶೂನ್ಯ-ಮೋಡ್ ತರಂಗ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿ ಶೋಧಕಗಳ (ಝೆಡ್ಎಂಡಬ್ಲ್ಯೂ ಡಿಟೆಕ್ಟರ್ಗಳು) ಕೆಳಗಿನ ಮೇಲ್ಮೈಗೆ ಜೋಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅದು ಅನುಕ್ರಮ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಪಡೆಯಬಹುದು ಮತ್ತು ಫಾಸ್ಫೋಲಿಂಕ್ಡ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಗಳನ್ನು ಬೆಳೆಯುತ್ತಿರುವ ಪ್ರೈಮರ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ನಲ್ಲಿ ಸಂಯೋಜಿಸಲಾಗುತ್ತಿದೆ. ಪೆಸಿಫಿಕ್ ಬಯೋಸೈನ್ಸ್ ಒಂದು ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಫಾಸ್ಫೋಲಿಂಕ್ಡ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಗಳನ್ನು ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಸಂಯೋಜಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಮುಚ್ಚಿದ ವೃತ್ತಾಕಾರದ ಟೆಂಪ್ಲೆಟ್ಗಳ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಏಕ-ಓದುವ ನಿಖರತೆಯು ಶೇಕಡಾ 87 ರಷ್ಟಿದ್ದರೆ, ಬಹು-ಕಿಲೋಬೇಸ್ ಓದುವ ಉದ್ದಗಳೊಂದಿಗೆ ಒಮ್ಮತದ ನಿಖರತೆಯನ್ನು 99.999% ನಲ್ಲಿ ಪ್ರದರ್ಶಿಸಲಾಗಿದೆ. 2015ರಲ್ಲಿ, ಪೆಸಿಫಿಕ್ ಬಯೋಸೈನ್ಸಸ್ ಸೀಕ್ವೆಲ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ ಎಂಬ ಹೊಸ ಅನುಕ್ರಮ ಸಾಧನವನ್ನು ಬಿಡುಗಡೆ ಮಾಡಿತು, ಇದು ಸುಮಾರು 6.5-fold ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ. ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಮೆಟಾಜೆನೊಮಿಕ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ಮೊದಲ-ಪೀಳಿಗೆಯ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ಮೂರನೇ-ಪೀಳಿಗೆಯ ಆರ್ಎನ್ಎ ವೇಗ ಉಲ್ಲೇಖಗಳು ಡಿಎನ್ಎ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಸಹ ನೋಡಿ.