TCEP
ಟಿಸಿಇಪಿ (ಟ್ರೈಸ್ (2-ಕಾರ್ಬಾಕ್ಸಿಥೈಲ್) ಫಾಸ್ಫೈನ್) ಜೈವಿಕ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರ ಮತ್ತು ಆಣ್ವಿಕ ಜೀವಶಾಸ್ತ್ರದ ಅನ್ವಯಗಳಲ್ಲಿ ಆಗಾಗ್ಗೆ ಬಳಸಲಾಗುವ ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸುವ ಏಜೆಂಟ್ ಆಗಿದೆ. ಇದನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ತಯಾರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 286.65 ಗ್ರಾಂ/ಮೋಲ್ನ ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕದೊಂದಿಗೆ ಹೈಡ್ರೋಕ್ಲೋರೈಡ್ ಉಪ್ಪಾಗಿ (TCEP-HCl) ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಇದು ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಕರಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ತಟಸ್ಥ pH ನಲ್ಲಿ ಸ್ಥಿರವಾದ ದ್ರಾವಣವಾಗಿ ಲಭ್ಯವಿದೆ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಏಜೆಂಟ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಅನುಕೂಲವಾಗುವಂತೆ ಅಗರೋಸ್ ಬೆಂಬಲದ ಮೇಲೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ನ ಪೂರ್ವಸಿದ್ಧತಾ ಹಂತವಾಗಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳ ಒಳಗೆ ಮತ್ತು ನಡುವೆ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧಗಳನ್ನು ಮುರಿಯಲು ಟಿಸಿಇಪಿಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಏಜೆಂಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ಉದ್ದೇಶಕ್ಕಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ಇತರ ಎರಡು ಸಾಮಾನ್ಯ ಏಜೆಂಟ್ಗಳಿಗೆ (ಡೈಥಿಯೋಥ್ರೈಟೋಲ್ ಮತ್ತು β-ಮರ್ಕ್ಯಾಪ್ಟೊಇಥನಾಲ್) ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಟಿಸಿಇಪಿ ವಾಸನೆಯಿಲ್ಲದ, ಹೆಚ್ಚು ಶಕ್ತಿಯುತವಾದ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಏಜೆಂಟ್, ಬದಲಾಯಿಸಲಾಗದ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಏಜೆಂಟ್ (ಟಿಸಿಇಪಿ ಪುನರುತ್ಪಾದಿಸುವುದಿಲ್ಲ ಎಂಬ ಅರ್ಥದಲ್ಲಿ-ಟಿಸಿಇಪಿ-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಸೀಳುವಿಕೆಯ ಅಂತಿಮ ಉತ್ಪನ್ನವು ವಾಸ್ತವವಾಗಿ ಎರಡು ಮುಕ್ತ ಥಿಯೋಲ್ಗಳು/ಸಿಸ್ಟೀನ್ಗಳು), ಹೆಚ್ಚು ಹೈಡ್ರೋಫಿಲಿಕ್ ಮತ್ತು ಗಾಳಿಯಲ್ಲಿ ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಣಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚು ನಿರೋಧಕವಾಗಿದೆ. ಇದು ಸ್ಥಿರವಾದ ಲೋಹದ ಆಕರ್ಷಣೆಯ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯಲ್ಲಿ ಬಳಸುವ ಲೋಹಗಳನ್ನು ಸಹ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವುದಿಲ್ಲ. ಸಿಸ್ಟೀನ್ ಅವಶೇಷಗಳನ್ನು ಮ್ಯಾಲಿಮೈಡ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡುವಾಗ ಟಿಸಿಇಪಿ ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಉಪಯುಕ್ತವಾಗಿದೆ. ಟಿ. ಸಿ. ಇ. ಪಿ. ಯು ಸಿಸ್ಟೀನ್ಗಳು ಡೈ-ಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸದಂತೆ ತಡೆಯುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಡೈಥಿಯೋಥ್ರೈಟೋಲ್ ಮತ್ತು β-ಮೆರ್ಕಾಪ್ಟೊಇಥನಾಲ್ಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿ, ಇದು ಮ್ಯಾಲಿಮೈಡ್ನೊಂದಿಗೆ ಸುಲಭವಾಗಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸುವುದಿಲ್ಲ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಕೆಲವು ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಟಿಸಿಇಪಿ ಮ್ಯಾಲಿಮೈಡ್ನೊಂದಿಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ವರದಿಯಾಗಿದೆ. ಟಿ. ಸಿ. ಇ. ಪಿ. ಯನ್ನು ಆರ್. ಎನ್. ಎ. ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಗಾಗಿ ಅಂಗಾಂಶಗಳ ಏಕರೂಪತೆಯ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿಯೂ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ನೇರಳಾತೀತ-ಗೋಚರ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳಿಗೆ, ಡೈಥಿಯೋಥ್ರೈಟಾಲ್ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಭವಿಸಬಹುದಾದ 250 ರಿಂದ 285 ನ್ಯಾನೊಮೀಟರ್ಗಳವರೆಗಿನ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸುವುದು ಮುಖ್ಯವಾದಾಗ ಟಿಸಿಇಪಿ ಉಪಯುಕ್ತವಾಗಿದೆ. ವಿವಿಧ ರೆಡಾಕ್ಸ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು ಸಂಭವಿಸಿದಾಗ ಡೈಥಿಯೋಥ್ರೈಟೋಲ್ ನಿಧಾನವಾಗಿ ಕಾಲಾನಂತರದಲ್ಲಿ ಈ ವರ್ಣಪಟಲದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ಹೆಚ್ಚು ಬೆಳಕನ್ನು ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಐತಿಹಾಸಿಕವಾಗಿ ಲಭ್ಯವಿದ್ದ ಫಾಸ್ಫೈನ್ಗಳು ಅತ್ಯಂತ ದುರ್ಬಲವಾಗಿದ್ದವು ಮತ್ತು/ಅಥವಾ ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಕರಗುತ್ತಿರಲಿಲ್ಲವಾದ್ದರಿಂದ ಟ್ರೈಆಲ್ಕಿಫಾಸ್ಫೈನ್ಗಳೊಂದಿಗಿನ ಜೈವಿಕ ಅಣುಗಳ ಕಡಿತವು ದಶಕಗಳವರೆಗೆ ಕಡಿಮೆ ಗಮನವನ್ನು ಪಡೆಯಿತು. 1969ರಲ್ಲಿ, ಜೈವಿಕ ರಾಸಾಯನಿಕ ಬಳಕೆಗೆ ಸೂಕ್ತವಾದ ಒಡೆರ್ಲೆಸ್ ಮತ್ತು ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಕರಗುವ ಟ್ರಯಾಲ್ಕಿಫಾಸ್ಫೈನ್ ಎಂದು ಟಿ. ಸಿ. ಇ. ಪಿ. ವರದಿಯಾಗಿದೆ, ಆದಾಗ್ಯೂ ಜೈವಿಕ ರಾಸಾಯನಿಕ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳಿಗೆ ಟಿ. ಸಿ. ಇ. ಪಿ. ಯ ಸಂಭಾವ್ಯ ಬಳಕೆಯನ್ನು ದಶಕಗಳವರೆಗೆ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ನಿರ್ಲಕ್ಷಿಸಲಾಗಿತ್ತು. 1991ರಲ್ಲಿ, ಬರ್ನ್ಸ್ ಟಿ. ಸಿ. ಇ. ಪಿ. ಗೆ ಹೊಸ ಅನುಕೂಲಕರ ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ ವಿಧಾನವನ್ನು ವರದಿ ಮಾಡಿದರು, ಇದು ಟಿ. ಸಿ. ಇ. ಪಿ. ಯು ಹೆಚ್ಚು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಲಭ್ಯವಾಗುವಂತೆ ಮಾಡಿತು ಮತ್ತು ಜೀವರಾಸಾಯನಿಕ ಬಳಕೆಗಾಗಿ "ಹೊಸ" ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸುವ ಏಜೆಂಟ್ ಆಗಿ ಮಾರಾಟ ಮಾಡಿತು, ಮತ್ತು ಹೀಗೆ ಟಿ. ಸಿ. ಇ. ಪಿ. ಯು 1990ರ ದಶಕದುದ್ದಕ್ಕೂ ಹೆಚ್ಚು ವ್ಯಾಪಕ ಬಳಕೆಗೆ ಬಂದಿತು. ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು ಕೆಲವು ಇತರ ಅಡ್ಡಪರಿಣಾಮಗಳು ಸಹ ವರದಿಯಾಗಿವೆಃ ಟಿಸಿಇಪಿ ಮತ್ತು ಶಾಖದ (90 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್) ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಸಿಸ್ಟೀನ್ ಶೇಷವನ್ನು ಅಲನೈನ್ ಆಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸುವುದು. ಸೌಮ್ಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಸಿಸ್ಟೀನ್ ಉಳಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಬೆನ್ನೆಲುಬಿನ ಸೀಳುವಿಕೆಯು ನಿಧಾನವಾಗಿ (ಆದರೆ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ, 4 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್ನಲ್ಲಿ ಎರಡು ವಾರಗಳ ಶೇಖರಣೆಗಾಗಿ 40 ಪ್ರತಿಶತ ಸೀಳು ವರದಿಯಾಗಿದೆ). ಜೈವಿಕ ಸಂಶೋಧನೆಯಲ್ಲಿ ಟಿಸಿಇಪಿ ಬಳಕೆಯು ವಿವಿಧ ರಾಸಾಯನಿಕ ಪೂರೈಕೆದಾರರಿಂದ ಹೈಡ್ರೋಕ್ಲೋರೈಡ್ ಉಪ್ಪಾಗಿ ಲಭ್ಯವಿದೆ. ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಕರಗಿದಾಗ, ಟಿಸಿಇಪಿ-ಎಚ್ಸಿಎಲ್ ಆಮ್ಲೀಯವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ವರದಿ ಮಾಡಲಾದ ತಯಾರಿಕೆಯು 0.5 ಎಂ ಟಿ. ಸಿ. ಇ. ಪಿ-ಎಚ್. ಸಿ. ಎಲ್ ಜಲೀಯ ಸ್ಟಾಕ್ ದ್ರಾವಣವಾಗಿದ್ದು, ಇದು ಪಿ. ಎಚ್ ಅನ್ನು ತಟಸ್ಥ ಪಿ. ಎಚ್ಗೆ ಸರಿಹೊಂದಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು-20 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್ನಲ್ಲಿ ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟಿಸಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಬಫರ್ಗಳಲ್ಲಿ ಟಿಸಿಇಪಿ ಕಡಿಮೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿದೆ ಎಂದು ವರದಿಯಾಗಿದೆ. 2-ಮೆರ್ಕಾಪ್ಟೊಇಥನಾಲ್ (ಬಿಎಂಇ) ಡೈಥಿಯೋಥ್ರೈಟೋಲ್ (ಡಿಟಿಟಿ) ಡೈಥಿಯೋಬ್ಯುಟಿಲಮೈನ್ (ಡಿಟಿಬಿಎ) ಉಲ್ಲೇಖಗಳನ್ನು ಸಹ ನೋಡಿ.