Proximity ligation assay
ಸಾಮೀಪ್ಯ ಬಂಧನ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು (ಇನ್ ಸಿಟು ಪಿಎಲ್ಎ) ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳ ನೇರ ಪತ್ತೆ, ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು, ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ಕೋಶಕಗಳು ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯೊಂದಿಗೆ ಅನುವಾದದ ನಂತರದ ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳ ಸಾಮರ್ಥ್ಯಗಳನ್ನು ವಿಸ್ತರಿಸುವ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವಾಗಿದೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್ ಗುರಿಗಳನ್ನು ಏಕ ಅಣು ನಿರ್ಣಯದೊಂದಿಗೆ ಸುಲಭವಾಗಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದು ಮತ್ತು ಸ್ಥಳೀಕರಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಮಾರ್ಪಡಿಸದ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ ವಸ್ತುನಿಷ್ಠವಾಗಿ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಬಹುದು. ಕೆಲವು ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಮಾತ್ರ ಬಳಸಿ, ಉಪ-ಜೀವಕೋಶದ ಘಟನೆಗಳು, ಅಸ್ಥಿರ ಅಥವಾ ದುರ್ಬಲ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು ಸಹ ಸ್ಥಳದಲ್ಲೇ ಪ್ರಕಟವಾಗುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶಗಳ ಉಪ-ಜನಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಬಹುದು. ಕೆಲವೇ ಗಂಟೆಗಳಲ್ಲಿ, ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಕೋ-ಇಮ್ಯುನೊಪ್ರೆಸಿಪಿಟೇಶನ್ ಮತ್ತು ಕೋ-ಲೋಕಲೈಸೇಶನ್ ತಂತ್ರಗಳ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ದೃಢೀಕರಿಸಬಹುದು. ಪಿಎಲ್ಎ ತತ್ವವು ವಿವಿಧ ಪ್ರಭೇದಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆದ ಎರಡು ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳು ಆಸಕ್ತಿಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳ ಮೇಲಿನ ಗುರಿ ಪ್ರತಿಜನಕವನ್ನು ಗುರುತಿಸುತ್ತವೆ (ಚಿತ್ರ 1). ಪಿಎಲ್ಎ ಪ್ರೋಬ್ಸ್ ಎಂದು ಕರೆಯಲ್ಪಡುವ ವಿವಿಧ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳ ಸ್ಥಿರ ಪ್ರದೇಶಗಳ ವಿರುದ್ಧ ನಿರ್ದೇಶಿಸಲಾದ ದ್ವಿತೀಯಕ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳು (2o ಎಬಿ) ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳೊಂದಿಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತವೆ (ಚಿತ್ರ 2). ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಪಿಎಲ್ಎ ಶೋಧಕಗಳು ಅದರೊಂದಿಗೆ ಜೋಡಿಸಲಾದ ಸಣ್ಣ ಅನುಕ್ರಮ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಡಿಎನ್ಎ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ. ಪಿಎಲ್ಎ ಶೋಧಕಗಳು ಸಾಮೀಪ್ಯದಲ್ಲಿದ್ದರೆ (ಅಂದರೆ, ಆಸಕ್ತಿಯ ಎರಡು ಮೂಲ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು ಸಾಮೀಪ್ಯದಲ್ಲಿದ್ದರೆ, ಅಥವಾ ಅಂಕಿ ಅಂಶಗಳಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಕೀರ್ಣದ ಭಾಗವಾಗಿದ್ದರೆ), ಡಿಎನ್ಎ ಎಳೆಗಳು ಸೂಕ್ತವಾದ ತಲಾಧಾರಗಳು ಮತ್ತು ಕಿಣ್ವಗಳೊಂದಿಗೆ ಇತರ ಎರಡು ಅನುಕ್ರಮ-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಡಿಎನ್ಎ ಒಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ ವೃತ್ತಾಕಾರದ ಡಿಎನ್ಎ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಭಾಗವಹಿಸಬಹುದು (ಚಿತ್ರ 3). ಡಿಎನ್ಎ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯು ಡಿಎನ್ಎ ವೃತ್ತದ ನೂರಾರು ಪಟ್ಟು ವರ್ಧನೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ಮುಂದೆ, ಪ್ರತಿದೀಪಕ-ಲೇಬಲ್ ಪೂರಕ ಒಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಶೋಧಕಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅವು ವರ್ಧಿತ ಡಿಎನ್ಎಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತವೆ (ಚಿತ್ರ 4). ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದಿಂದ ನೋಡಿದಾಗ ಪ್ರತಿದೀಪಕದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಒಂದು ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಪ್ರಕಾಶಮಾನವಾದ ತಾಣವಾಗಿ ಸುಲಭವಾಗಿ ಗೋಚರಿಸುತ್ತದೆ. ತೋರಿಸಲಾದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರಕರಣದಲ್ಲಿ (ಚಿತ್ರ 5), ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್ಅನ್ನು ವಿಸ್ತರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಇದು ಬಿ-ಸೆಲ್ ಲಿಂಫೋಮಾ ಕೋಶವಾಗಿದೆ. ಆಸಕ್ತಿಯ ಎರಡು ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳೆಂದರೆ ಬಿ ಕೋಶ ಗ್ರಾಹಕ ಮತ್ತು ಎಂವೈಡಿ88. ಬಿ ಜೀವಕೋಶದ ಗ್ರಾಹಕಗಳು ಜೀವಕೋಶದ ಪೊರೆಯಲ್ಲಿವೆ ಎಂದು ಭಾವಿಸಲಾಗಿರುವುದರಿಂದ ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸಂನಲ್ಲಿ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯುವುದು ಆಸಕ್ತಿದಾಯಕವಾಗಿದೆ. ಮೇಲೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಪಿಎಲ್ಎ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ಗಳನ್ನು ಇತರ ಅನೇಕ ವಿಷಯಗಳ ನಡುವೆ ಪ್ರಾಣಿಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ನ ಅಂಶಗಳನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ. ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಿಕೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವುದು, ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವುದು ಮತ್ತು ಉತ್ತಮ ಸ್ಥಳೀಕರಣವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ ಐ. ಎಚ್. ಸಿ. ಗಿಂತ ವಿವಿಧ ಪ್ರಯೋಜನಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಮಾನವ ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿನ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳ ಊರ್ಜಿತಗೊಳಿಸುವಿಕೆಗೆ ಇನ್ ಸಿಟು ಸಾಮೀಪ್ಯ ಬಂಧನ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು (ಐ. ಎಸ್. ಪಿ. ಎಲ್. ಎ.) ಅನ್ವಯಿಸಲಾಗಿದೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮತ್ತು ಆರ್. ಎನ್. ಎ. ಗಳ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ತಂತ್ರದ ಒಂದು ರೂಪಾಂತರವನ್ನು (ರಿಶ್-ಪಿ. ಎಲ್. ಎ.) ಬಳಸಲಾಗಿದೆ. ಇನ್ ಸಿತು ಪಿಎಲ್ಎಯ ಮತ್ತೊಂದು ಬದಲಾವಣೆಯು ಮಲ್ಟಿಪ್ಲೆಕ್ಸ್ ಪಿಎಲ್ಎ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ, ಇದು ಅನೇಕ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳನ್ನು ಸಮಾನಾಂತರವಾಗಿ ದೃಶ್ಯೀಕರಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸುತ್ತದೆ. ಪಿಎಲ್ಎಯನ್ನು ಎಲಿಸಾ, ಫ್ಲೋ ಸೈಟೋಮೆಟ್ರಿಯಂತಹ ಇತರ ರೀಡ್ ಔಟ್ ರೂಪಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಬಹುದು. ಮತ್ತು ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟಿಂಗ್ ಉಲ್ಲೇಖಗಳು ಬಯೋಕೆಮಿಸ್ಟ್ರಿ ಪತ್ತೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು ಇಮ್ಯುನೊಲಾಜಿಕ್ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳು