Recombinant AAV mediated genome engineering
ರಿಕಾಂಬಿನೆಂಟ್ ಅಡೆನೊ-ಅಸೋಸಿಯೇಟೆಡ್ ವೈರಸ್ (ಆರ್ಎಎವಿ) ಆಧಾರಿತ ಜೀನೋಮ್ ಎಂಜಿನಿಯರಿಂಗ್, ಜೀವಂತ ಸಸ್ತನಿ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಜೀನೋಮ್ಗಳಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್ಎ ಅನುಕ್ರಮಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಲು, ಅಳಿಸಲು ಅಥವಾ ಬದಲಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುವ ರಿಕಾಂಬಿನೆಂಟ್ ಎಎವಿ ವಾಹಕಗಳ ಬಳಕೆಯನ್ನು ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸಿದ ಜೀನೋಮ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ಪ್ಲಾಟ್ಫಾರ್ಮ್ ಆಗಿದೆ. ಈ ತಂತ್ರವು ಮಾರಿಯೋ ಕೇಪೆಚಿ ಮತ್ತು ಆಲಿವರ್ ಸ್ಮಿತ್ ಅವರ ನೊಬೆಲ್ ಪ್ರಶಸ್ತಿ ವಿಜೇತ ಆವಿಷ್ಕಾರದ ಮೇಲೆ ನಿರ್ಮಿಸುತ್ತದೆ, ನೈಸರ್ಗಿಕ ಹೈ-ಫಿಡೆಲಿಟಿ ಡಿಎನ್ಎ ರಿಪೇರಿ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವಾದ ಹೋಮೋಲೋಗಸ್ ರಿಕಾಂಬಿನೇಷನ್ (ಎಚ್ಆರ್) ಅನ್ನು ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ ನಿಖರವಾದ ಜೀನೋಮ್ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಮಾಡಲು ಬಳಸಿಕೊಳ್ಳಬಹುದು. ಆರ್ಎಎವಿ ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ಜೀನೋಮ್-ಎಡಿಟಿಂಗ್ ಯಾವುದೇ ಪೂರ್ವ-ಸ್ಥಾಪಿತ ಮತ್ತು ವಿಭಿನ್ನ ಮಾನವ ಜೀವಕೋಶದ ಸಾಲಿನಲ್ಲಿ ಜೀನೋಮ್ ಎಂಜಿನಿಯರಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಅನುಮತಿಸಲು ಈ ತಂತ್ರದ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಮೌಸ್ ಇಎಸ್ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿ, ಕಡಿಮೆ ಪ್ರಮಾಣದ ಎಚ್ಆರ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ. ಐಸೋಜೆನಿಕ್ ಮಾನವ ರೋಗದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಮಾನವ ಜೀವಕೋಶದ ರೇಖೆಗಳ ಎಂಜಿನಿಯರಿಂಗ್ನಲ್ಲಿ ಬಳಸಲು ಈ ತಂತ್ರವನ್ನು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಅಳವಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲಾಗಿದೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್ ಲಸಿಕೆಗಳು ಮತ್ತು ಚಿಕಿತ್ಸಕಗಳ ಜೈವಿಕ ಉತ್ಪಾದನೆಗಾಗಿ ಜೈವಿಕ ಉತ್ಪಾದಕ ಜೀವಕೋಶದ ಸಾಲುಗಳನ್ನು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿಸಲು ಸಹ ಇದನ್ನು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ಆರ್. ಎ. ಎ. ವಿ. ಯ ರೋಗಕಾರಕವಲ್ಲದ ಸ್ವರೂಪದಿಂದಾಗಿ, ಇದು ಜೀವಂತ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಜೀನ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲು ಅಪೇಕ್ಷಣೀಯ ವಾಹಕವಾಗಿ ಹೊರಹೊಮ್ಮಿದೆ. ಆರ್. ಎ. ಎ. ವಿ ವೆಕ್ಟರ್ ಆರ್. ಎ. ಎ. ವಿ ಜೀನೋಮ್ ಅನ್ನು ಏಕ-ಎಳೆ ಡಿಯೋಕ್ಸಿರೈಬೊನ್ಯೂಕ್ಲಿಕ್ ಆಮ್ಲದಿಂದ (ಎಸ್. ಎಸ್. ಡಿ. ಎನ್. ಎ) ನಿರ್ಮಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಧನಾತ್ಮಕ ಅಥವಾ ಋಣಾತ್ಮಕ-ಸಂವೇದನಾಶೀಲವಾಗಿದೆ, ಇದು ಸುಮಾರು 4.7 ಕಿಲೋಬೇಸ್ ಉದ್ದವಾಗಿದೆ. ಈ ಏಕ-ಎಳೆ ಡಿಎನ್ಎ ವೈರಲ್ ವಾಹಕಗಳು ಹೆಚ್ಚಿನ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಡಕ್ಷನ್ ದರಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ ಮತ್ತು ಜೀನೋಮ್ನಲ್ಲಿ ಡಬಲ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಡಿಎನ್ಎ ಬಿರುಕುಗಳನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡದೆ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಎಚ್ಆರ್ ಅನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುವ ವಿಶಿಷ್ಟ ಗುಣವನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ, ಇದು ಇತರ ಹೋಮಿಂಗ್ ಎಂಡೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ಜೀನೋಮ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ವಿಧಾನಗಳ ವಿಶಿಷ್ಟ ಲಕ್ಷಣವಾಗಿದೆ. ಸಾಮರ್ಥ್ಯಗಳು ಬಳಕೆದಾರರು ಯಾವುದೇ ಗುರಿ ಜೀನೋಮಿಕ್ ಲೋಕಸ್ಗೆ ಆರ್ಎಎವಿ ವಾಹಕವನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಸಸ್ತನಿಗಳ ದೈಹಿಕ ಜೀವಕೋಶ-ಪ್ರಕಾರಗಳಲ್ಲಿ ಒಟ್ಟು ಮತ್ತು ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಜೀನ್ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಮಾಡಬಹುದು. ಇವುಗಳಲ್ಲಿ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಜೀನೋಮಿಕ್ಸ್ಗಾಗಿ ಜೀನ್ ನಾಕ್-ಔಟ್ಗಳು ಅಥವಾ ಜೀವಂತ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ದೈಹಿಕ ಮಟ್ಟದಲ್ಲಿ ಸ್ಥಳಾಂತರದ ಘಟನೆಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಟ್ಯಾಗ್ ಅಳವಡಿಕೆಗಳ 'ನಾಕ್-ಇನ್' ಸೇರಿವೆ. ಬಹು ಮುಖ್ಯವಾಗಿ, ಆರ್. ಎ. ಎ. ವಿ ಒಂದು ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಒಂದೇ ಆಲೀಲ್ ಅನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಯಾವುದೇ ಗುರಿಯಿಲ್ಲದ ಜೀನೋಮಿಕ್ ಬದಲಾವಣೆಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುವುದಿಲ್ಲ. ಈ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿ, ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಎಸ್. ಎನ್. ಪಿ. ಗಳು ಅಥವಾ ಬಿಂದು ರೂಪಾಂತರಗಳಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಆನುವಂಶಿಕ ಕಾಯಿಲೆಗಳನ್ನು ವಾಡಿಕೆಯಂತೆ ಮತ್ತು ನಿಖರವಾಗಿ ರೂಪಿಸಲು ಇದು ಸಾಧ್ಯವಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಹೊಸ ಔಷಧ ಆವಿಷ್ಕಾರ ಕಾರ್ಯಕ್ರಮಗಳ ಗುರಿಯಾಗಿದೆ. ಇಲ್ಲಿಯವರೆಗೆ, ಆರ್. ಎ. ಎ. ವಿ. ಮಧ್ಯಸ್ಥ ಜೀನೋಮ್ ಎಂಜಿನಿಯರಿಂಗ್ನ ಬಳಕೆಯನ್ನು 2100ಕ್ಕೂ ಹೆಚ್ಚು ಪೀರ್ ರಿವ್ಯೂಡ್ ವೈಜ್ಞಾನಿಕ ನಿಯತಕಾಲಿಕಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರಕಟಿಸಲಾಗಿದೆ. ಆರ್. ಎ. ಎ. ವಿ. ಆಧಾರಿತ ಜೀನೋಮ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್ನ ಮತ್ತೊಂದು ಉದಯೋನ್ಮುಖ ಅನ್ವಯವೆಂದರೆ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಜೀನ್ ಥೆರಪಿಗಾಗಿ, ನಿಖರತೆ ಮತ್ತು ಈ ವಿಧಾನವು ಒದಗಿಸುವ ಆಫ್-ಟಾರ್ಗೆಟ್ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯ ಘಟನೆಗಳ ಕೊರತೆಯಿಂದಾಗಿ. ಬಯೋಲಾಜಿಕಲ್ ಎಂಜಿನಿಯರಿಂಗ್ ಹೋಮಿಂಗ್ ಎಂಡೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಹೋಮೋಲೋಗಸ್ ರಿಕಾಂಬಿನೇಷನ್ ಮೆಗಾನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಜಿಂಕ್ ಫಿಂಗರ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್ ಐಸೋಜೆನಿಕ್ ಹ್ಯೂಮನ್ ಡಿಸೀಸ್ ಮಾಡೆಲ್ಗಳು Cas9 ಉಲ್ಲೇಖಗಳು ಆನ್ಕೊಜೆನಿಕ್ PI3K ರೂಪಾಂತರದ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಸಕ್ರಿಯವಾದ PI3K ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು AACR/EORTC ಆಣ್ವಿಕ ಗುರಿಗಳು ಮತ್ತು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಥೆರಪ್ಯೂಟಿಕ್ಸ್, ಬೋಸ್ಟನ್, USA, ನವೆಂಬರ್ 2009ರಲ್ಲಿ ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಲಾದ ಇನ್ವೇಸಿವ್ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಪೋಸ್ಟರ್, ಆನ್ಕೊಜೆನಿಕ್ PI3K ರೂಪಾಂತರದ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮೈಟೋಕಾಂಡ್ರಿಯಾದಲ್ಲಿ ಆಂಟಿ-ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳ ಶೇಖರಣೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ AACR 2010, ವಾಷಿಂಗ್ಟನ್, D. C., USA, ಏಪ್ರಿಲ್ನಲ್ಲಿ ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ 2010 ಪಿಐ3-ಕೈನೇಸ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ ಆಕ್ಟಿವಿಟಿ ಪ್ರೊಫೈಲ್ಗಳನ್ನು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲು 'ಎಕ್ಸ್-ಮ್ಯಾನ್' ಐಸೋಜೆನಿಕ್ ಸೆಲ್ ಲೈನ್ಗಳ ಬಳಕೆ ಎ. ಎ. ಸಿ. ಆರ್ 2010, ವಾಷಿಂಗ್ಟನ್, ಡಿ. ಸಿ., ಯುಎಸ್ಎ, ಏಪ್ರಿಲ್ನಲ್ಲಿ ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಿದ ಪೋಸ್ಟರ್. 2010 'ಎಕ್ಸ್-ಮ್ಯಾನ್' ರೂಪಾಂತರಿತ ಪಿಐ3ಸಿಎ ಬಳಕೆಯು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಟ್ಯೂಬುಲಿನ್ ಐಸೋಫಾರ್ಮ್ಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಎ. ಎ. ಸಿ. ಆರ್. 2010, ವಾಷಿಂಗ್ಟನ್, ಡಿ. ಸಿ., ಯುಎಸ್ಎ, ಏಪ್ರಿಲ್ನಲ್ಲಿ ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಲಾದ ಆಂಟಿ-ಮಿಟೋಟಿಕ್ ಕೀಮೋಥೆರಪಿ ಔಷಧಿಗಳ ಪೋಸ್ಟರ್ಗೆ ಪ್ರತಿರೋಧವನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ. 2010 ಬಯೋಕೆಮಿಸ್ಟ್ರಿ ರಿಕಾಂಬಿನೆಂಟ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು