Ce fut peu auparavant la mort de Marguerite d'Autriche, que Charles-Quint fit présent de l'île de Malte aux Chevaliers de saint Jean de Jérusalem. Depuis la prise de Rhodes, le Grand-Maître, Villiers de l'Île-Adam, se trouvait errant, sans demeure fixe et sans ports pour retirer sa flotte, et pour continuer ses armements contre les Infidèles. Il jeta les yeux sur l'île de Malte, qui a par les différents ports qui s'y trouvent, convenait parfaitement pour y fixer la résidence de son Ordre. Il fit demander à l'Empereur, qu'il lui plût, par une inféodation libre et franche de tout afin qu'elle devienne le restaurateur et comme le second fondateur d'un Ordre, qui depuis plusieurs siècles s'était consacré à la défense des Chrétiens ; d'ailleurs l'avantage de mettre à couvert des incursions des infidèles les îles de Sicile et de Sardaigne, le Royaume de Naples et les côtes d'Italie : ces différents motifs déterminèrent Charles-Quint à donner à perpétuité, tant en son nom que pour ses héritiers et successeurs, au très-révérend Grand-Maître de l'Ordre de Malte, et à la Religion de saint Jean, comme fief noble, libre et franc, les châteaux, places et îles de Tripoli, Malte et Gozo avec tous leurs territoires et juridictions, haute et moyenne justice et droit de vie et de mort, avec toutes exemptions, privilèges rentes et autres droits et immunités ; à la condition qu'à l'avenir le Grand-Maître et les Chevaliers tiendraient ces places de lui et de ses successeurs au Royaume de Sicile, comme fiefs nobles, francs et libres, sans être obligés à autre chose qu'à donner totis les ans au jour de la Toussaints un faucon ; et que dans la vacance de l'Évêché de Malte, le Grand-Maître et le Couvent seraient obligés de lui présenter et à ses successeurs, trois personnes pieuses et savantes dont il en choisirait une pour remplir cette dignité, et que le préféré serait honoré de la croix de l'Ordre. 